仪器分析实验讲义

《原子汲取光谱法测定水样中012+》

一、试验目的

学习原子汲取光谱法的基本原理。驾驭原子汲取分光光度计的主要结构与工作原理，驾

驭其正确运用方法。

二、试验原理

待测元素在肯定条件下被原子化转器转变成基态原子，该基态原子汲取来自空心阴极灯

发出的该元素特征辐射光，在肯定条件下，其吸光度与待测元素的浓度成正比，从而求得待

测元素的含量。

在通常状况下，原子处于基态，当特征辐射光通过原子蒸气时，基态原子就从入射辐射

中汲取能量由基态跃迁到激发态，通常是第一激发态产生共振汲取，从而产生原子光谱。

原子汲取的程度（吸光度A）取决于汲取光程内基态原子的浓度。

A=kNoLlg（Io/I）（1）

式中为Io入射辐射的强度，I为透射辐射的强度，L为光程的长度，k为与波长和原子特性

有光的常数，N。为基态原子数。

在通常的火焰和石墨炉温度条件下，处于激发态的原子数Ni与处于基态原子数No相比，

可忽视不计，事实上可将基态原子的浓度No看作等于总原子N,在确定的条件下，蒸气相中

的总原子数与试样中被测元素的含量c成正比。

N0=N=pc（2）

式中。与试验条件和被测元素化合物的性质有光。将（2）带入（1）即得

A=KcL（3）

即原子汲取光谱定量分析的基本公式。其中K和L在给定的仪器和条件下是常数，因此吸

光度A与试样浓度c成正比关系。

三、试验仪器和试剂药品

I）仪器：TAS-990火焰原子汲取分光光度仪；铜空心阴极灯

2）试剂：二价铜离子标液（浓度为lOOmg/L）

3）空白溶液1%的稀硝酸.

4）超纯水

四、试验步骤

1、开机，仪器预热，留意开机与关机依次与留意事项。

2、标准系列溶液的制备：分别精密吸取铜标准溶液（100mg/L）0,0.5,1.0,1.5,2,2.5,

3mL于100mL容量瓶中，用1%的稀硝酸溶液定容，摇匀。

3、最佳试验条件的选择。

4、在最佳试验条件下测定标准溶液与未知样品的吸光度，获得工作曲线的方程、相关系数和

未知样品的浓度。

相关仪器运用方法

相关仪器操作方法参见仪器分析试验原子汲取光谱分析检出限的那部分内容。

五、数据处理

1工作曲线的拟合：利用软件将所得试验数据进行拟合，得出工作曲线的方程和相关系

数。

2依据未知样品的吸光度利用获得的工作曲线方程分别计算出未知样品中Cd?的浓度。

并计算方法的相对误差和肯定误差。

六、留意事项

留意事项参见仪器分析试验原子汲取光谱分析检出限那部分内容。

七、思索题

1、原子汲取分光光度计原子化器的类型与各自的特点？

2、火焰原子汲取分光光度法中火焰的类型与常用的火焰有哪些？

3、分子光谱和原子光谱的最主要区分与成因？

4、影响火焰原子汲取光谱法灵敏度的主要因素有哪些？

5、何为最佳试验条件？在火焰原子汲取分光光度法中常把哪几项因素作为试验条件加以

选择？

6、原子汲取光谱法定量的几种方法？

7、火焰原子化器都包括那些部分？各自的作用？

《原子汲取光谱分析检出限的测定》

一、试验目的

驾驭原子汲取光谱法检已限的定义与测定方法。驾驭影响检出限的因素。了解检出限与

灵敏度和精密度的关系。

二、试验原理

能以适当的置信度，测已被测元素的最小浓度（或质量浓度）或最小量称作检出限。检

出限是用来衡量一台仪器或一项分析方法能以肯定置信度测量的最低浓度或肯定量的指标，

它是测定灵敏度和测量精密度的综合体现。测定灵敏度越高、测量精密度越好，检出限值越

低。

IUPAC对原子汲取光谱法的检出限定义为给出信号等于二倍（或3倍）噪声时所对应的

试样浓度或试样的量，以|ag/ml（火焰法）或g（石墨炉法）表示。按下式计算检出限（XDL）：

XDL=kSb/S,式中Sb为空白标准偏差，S为方法的灵敏度（IUPAC对灵敏度所作的定义为工

作曲线的斜率），k值一般取3。对于无限多次测量且测量值严格遵从高斯分布时，k=3的置

信度为99.86%,对于有限次测量且测量值未必遵从高斯分布时,k=3的置信度大约只有90%。

选取四份浓度不同的标准溶液，分别测定标准溶液的吸光度A。依据工作曲线求出斜率即灵

敏度。之后再选取一份标准溶液，浓度约等于资料所给出该元素检出限的5倍或10倍，在扩

展10倍的条件下，连续测定10-20次，求得吸光度平均值为A,依据公式计算出睑出限。

三、试验仪器和试剂药品

5）仪器：TAS-990火焰原子汲取分光光度仪；铜空心阴极灯

100mL容量瓶，移液管

6）试剂：二价铜离子标液（浓度为lmg/L）

7）空白溶液1%的稀硝酸。

四、试验步骤

1、开机，仪器预热，留意开机与关机依次与留意事项。

2、利用给出的二价铜离子标液（浓度为lmg/L）配制浓度为0.02ug/mL0.5ug/ml,1.0

ug/ml.3.0ug/ml.5.0ug/ml的铜溶液，采纳1%的稀硝酸定溶。

3、最佳试验条件的选择

4、在仪器的最佳试验条件下，对浓度为0.02Ug/mL的铜标准溶液连续测定20次，记录每

一次的吸光度值。之后分别测定四个标准溶液的吸光度。

相关仪器运用方法

一、开机

依次打开打印机，显示器，计算机电源开关，等计算机完全启动后，打开原子汲取主机电源。

二、仪器联机初始化.

1：在计算机束面上双击AAwin图标，出现窗口，选择联机方式，点击确定，出现仪器初始化界面.等待3

一5分钟（联机初始化过程），等初始化各项出现确定后，将弹出选择元素灯和预热灯窗口。

2：依照用户须要选择工作灯和预热灯（双击元素灯位置，可更改所在灯位置上的元素符号）。点击下一步，

出现设置元素测量参数窗口。

3：可以依据须要更改光谱带宽，燃气流量，燃烧器高度等参数，（一般工作灯电流，预热灯电流和负高压

以与燃烧器位置不用更改。）设置完成后点击下一步。出现设置波长窗口。

4：不要更改默认的波长值，干脆点击寻峰。将弹出寻峰窗口，（依据所选元素灯元素不同，整个过程须要

时间不同，一般在1—3分钟）等寻峰过程完成后，点击关闭。点击下一步，点击完成，

三、设置样品

点击样品，弹出样品设置向导窗口：

1：选择校正方法（一般为标准曲线法），曲线方程（一般为一次方程），和浓度单位，输入样品名称和起

始编号，点击下一步。

2：输入标准样品的浓度和个数（可依照提示增加和削减标准样品的数显），点击下一步。

3：可以选择须要或不须要空白校正和灵敏度校正（一般为不要）然后点击下一步。

4：输入待测样品数量，名称，起始编号，以与相应的稀释倍数等信息，点击完成。

四、设置参数

点击参数，弹出测量参数窗口。

1：常规：输入标准样品，空白样品，未知样品等的测量次数（测几次计算出平均值）

选择测量方式（手动或自动，一般为自动），输入间隔时间和采样延时（一般均为1秒）2：显示：设置吸

光值最小值和最大值一般为（0-0.7）以与刷新时间（一般300秒）

3：信号处理：设置计算方式（一般火焰汲取为连续或峰高，石墨炉多用峰面积），以与积分时间和滤波系

数，（火焰积分时间一般为1滤波系数为0.3-0.8）

4：质量限制：（适用于带自动进样的设备）

点击确定，退出参数设置窗口

五、火焰汲取的光路调整

火焰汲取测量方法下：点击仪器下的燃烧器参数，弹出燃烧器参数设置窗口，输入燃气流量和高度，点击

执行，看燃烧头是否在光路的正下方，假如有偏离，更改位置中相应的数字，点击执行，可以反复调整，

直到燃烧头和光路平行并位于光路正下方。（如不平行，可以通过用手调整燃烧头角度来完成）点击确定

退出燃烧器参数设置窗口。

六、测量

A、火焰汲取的测量过程

1：依次打开空气压缩机的风机开关，工作开关，调整压力调整阀，使得空气压力稳定在0.2—0.25MPa

后，打开乙焕钢瓶主阀，调整出II压力在0.05—0.06MPa（点火前后出口压力可能有变更，这里的出口压

力在0.05—0.06Mpa指引火后的压力）检查水封，

点击点火（第一次点火时有点火提示窗口弹出，，点击确定将起先点火），等火焰稳定后首先吸喷纯净水。

以防止燃烧头结盐。

2：点击测量下的测量，起先（或），吸喷空白溶液校零，依次吸喷标准溶液和未知样品，击起先，进行测量。

测量完成后，点击终止，完成测量，退出测量窗口。拦住火焰探头熄火

（假如不再须要接着测量其他元素，请关闭乙块钢瓶主阀，让火焰自动熄灭），点击确定，退出熄火提示

窗口，吸喷纯水1分钟，清洗燃烧头，防止燃烧头结盐。

3：点击视图下的校正曲线，查看曲线的相关系数，确定测量数据的牢靠性，进行保存

或打印处理。

七、关机过程

依次关闭乙烘钢瓶主阀，，空压机工作开关，按放水阀，排空压缩机中的冷凝水，关闭风机开关，AAwin

软件，原子汲取主机电源，退出计算机Window操作程序，关闭打印机，显示器和计算机电源。盖上仪器

罩，检查乙焕，氮气，冷却水，是否已经关闭，清理试验室。

六、数据处理

1标准偏差的计算；利用标准偏差的公式将所得试验数据带入求得标准偏差。（标准偏

差的计算公式自己查资料获得）

2依据浓度与吸光度的关系绘制出工作曲线，求出工作曲线的斜率。将标准偏差，灵敏

度带入到公式中求得方法的检出限。

七、留意事项

1：假如开机依次不对，可能出现COM口被占用，无法联机的现象，这时须要关闭原子汲

取主机电源开关，重新启动计算机，等待Windows完全启动后再开启原子汲取主机电源开

关，将联机正常。

2：开机初始化时，假如在工作灯位置没有元素灯，或原子化器挡光，可能造成初始化过

程中的波长电极初始化失败。

工作中：假如工作灯位置上元素灯设置的元素和实际元素灯元素不同，或原子化器挡光，

将造成寻峰失败，出现灯能量不足，负高压超上限的提示。

3：点火前后，乙快钢瓶压力可能有变更，留意调整出口压力。当燃气流量小于1200时可

能点火失败或吸喷溶液后自动熄火，这时须要调高燃气流量到1500以上，再次点火即可。

特殊留意：乙块气瓶的总表压力低于0.4MPa就必需更换新的气瓶，否则易损坏仪器，导致不良后果；

要求乙焕气必需达到99.9%以上，如乙燃气不纯，影响分析测试结果，（吸光度值不稳定），易导致质量

流量计损坏（堵塞

八、思索题

1、哪些因素影响原子汲取分光光度计的检出限？

2、不同的元素是否具有相同的检出限？

3、检出限是否是一台仪器能够精确测定浓度的最低值？

4、原子汲取分光光度计仪器的主要构造？

5、原子汲取光谱分析法中的衡量仪器性能的两个主要技术指标是什么？

6、灵敏度与检出限的关系？

《有机化合物的紫外汲取光谱与溶剂效应》

一、试验目的

1.了解苯与其衍生物的紫外汲取光谱与鉴定方法。

2.视察溶剂对汲取光谱的影响。

二、试验原理

芳香族化合物n-"*跃迁在近紫外区产生3个特征汲取带。苯的特征汲取

带为184nm,(L/mol),204nm(L/mol)254nm(L/mol)..当苯处在气态时有良好

的精细结构.；当苯环上有取代基时，会对其3个特征汲取带剧烈地影响…例如在碱

性条件下的苯酚盐离子3个汲取带为分别为移至209nm,235nm(L/mol

L/mol)和286nm(L/mol)。

利用紫外汲取光谱鉴定有机化合物的方法是在相同条件下(溶剂、浓度、pH、

温度等)比较未知物与已知纯化合物的汲取光谱，或在与标准谱图相同条件下将

绘制的未知物的汲取光谱，再与标准谱图比较，若两者完全一样，基本可认为是

同一化合物。

溶剂的极性对有机化合物的紫外汲取光谱有肯定的影响，溶剂的极性增加会

使有机化合物n-冗*跃迁产生的汲取带红移，nf冗*跃迁产生的汲取带兰多。

三、药品

苯、甲苯、苯甲酸、苯胺、环己烷、丁酮、乙醇、氯仿。

3.溶液

(1)HCl(().lmol•L-l),NaOH(0.1mol•L-l)o

⑵苯的环己烷溶液(1:250)，甲苯的环己烷溶液(1:250)。

⑶苯酚的水溶液(0.4g-L-1),苯酚的环己烷溶液(0.3g-L-l)o

⑷苯甲酸环己烷溶液(0.8g-L-1)苯胺的环己烷溶液(1:3000)。

(5)异亚丙基丙酮溶液(0.4g-L-1)(分别用水、氯仿、正己烷

四、试验仪器

1紫外可见分光光度计。

21.00mL石英比色池。

3带塞比色管：5mLi。支，10mL3支。

五、试验步骤

1.苯与其衍生物的紫外汲取光谱的测绘

(1)在石英汲取池，加两滴苯，加盖，放置约两分钟后，相对空石英汲取池，在

200至320nm波长范围内绘制紫外汲取光谱。

(2)在5支5mL带塞比色管中分别加().5mL的苯、甲苯、苯酚、苯甲酸，苯胺

的环己烷溶液，用环己烷溶液稀释至刻度，摇匀。用带盖的石英汲取池相对环己

烷溶液，在200至320nm波长范围内绘制紫外汲取光谱。找出入max,并计算相

对于苯的AXmax红移值。

2.溶剂的极性对有机化合物的紫外汲取光谱的影响

⑴溶剂的极性对有机化合物n->n*跃迁产生的影响：

在3个5mL带塞比色管中各加().02ml丁酮，分别用水、乙醇、氯仿稀释至刻度,

摇匀。用带盖的1cm石英汲取池相对各自的溶剂作参比在200至320nm波长范

围内绘制紫外汲取光谱，找出入max。

⑵溶剂的极性对机化合物弘一口*跃迁产生的影响：

在3支10mL带塞比色管各加0.20mL异亚丙基丙酮溶液，分别用正己烷、氯仿、

水稀释至刻度，摇匀。用带盖的1cm石英汲取池相对各自的溶剂在200至320nm

波长范围内绘制紫外汲取光谱，找出入max。

3.溶液的酸碱性对苯酚的汲取光谱的影响

在2支5ml带塞比色管中各加苯酚的水溶液0.50mL分别用0.10mol/L的

HC1和0.10mol/L的NaOH稀释至刻度，摇匀，用石英汲取池相对蒸储水在在

200至320nm波长范围内绘制紫外汲取光谱，找出入max。

六、数据处理

1.阐述苯的不同性质的取代基对苯的汲取峰影响规律。

2.计算丁酮的水和乙醇溶液相对丁酮的氯仿溶液汲取峰的的△入max值，阐述规

律。

3.计算异亚丙基丙酮的乙醇和氯仿溶液相对异亚丙基丙酮的环己烷水溶液汲取

峰的△入max值，阐述规律。

4.比较苯酚在盐酸和氢氧化钠溶液中的Xmax变更，并试加以说明。

七、思索题

1.溶剂的极性增大对有机化合物和跃迁的汲取带各产生什么影响，试分析缘由。

2.影响有机化合物溶液的紫外汲取光谱形态有那些主要因素？

《4.氨基安替比林光度法测定酚》

一、试验目的

驾驭用蒸播法预处理水样的方法和用分光光度法测定挥发酚的试验技术。

二、试验原理

酚类化合物于PH10.0±0.2的介质中，在铁氨化钾的存在下，与4.氨基安替

比林反应，生成成红色的口引口朵酚安替比林染料，在510mm波长出有最大汲取，

用比色法定量。

显色反应受酚环上取代基的种类，位置，数目等影响。邻位硝基酚和间位硝

基酚与4-氨基安替比林发生的反应又不相同，前者反应无色,后者反应有点颜色。

所以本法测定的酚类不是酚类不是总酚，而仅仅是与4-氨基安替比林反应显色的

酚，并以苯酚为标准，结果以苯酚计算含量。

用20mm比色皿测定，方法最低检出浓度为0.1mg/L。假如显色后用三氯甲

烷萃取，于46()nm波长出测定，其最低检出浓度可达()0()2mg/L,测定上限为

0.12mg/Lo此外，在干脆光度法中，有色络合物可稳定3小时。

三、药品

(1)无酚水：于1升水中假如0.2g经200℃活化0.5h的活性炭粉末，充分振

摇后，放置过夜。用双层中速滤纸过滤，滤出液贮于硬质玻璃瓶中备用。

或加氢氧化钠使水呈强碱性，并滴加高锦酸钾溶液至紫红色，移入蒸谣瓶

中加热蒸锵，收集储出液备用。

(2)硫酸铜溶液：称取50g(CuSO4,5H2O)溶于水,稀释至500mL。

(3)磷酸溶液：量取10mL85%的磷酸用水稀释至100mL。

(4)甲基橙指示剂溶液：称取0.05g甲基橙溶于100mL水中。

(5)苯酚标准贮备液：称取1.00g无色苯酚溶于水，移入1000mL容量瓶中，

稀释至标线，置于冰箱内备用。该溶液按下述方法标定：

吸取10.00mL苯酚标准贮备液于250mL碘量瓶中，加100mL0.1000mol/L澳酸

钾一漠化钾溶液，马上加入5mL浓盐酸，盖好瓶塞，轻轻摇匀，于暗处放置10

mino加入1g碘化钾，密塞，轻轻摇匀，于暗处放置5min后，用0.125mol/L

硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加1mL淀粉溶液，接着滴定至蓝色刚好褪

去，记录用量。以水代替苯酚贮备液做空白试验，记录硫代硫酸钠标准溶液用量。

苯酚贮备浓度按下式计算：

苯酚(mg/L)=(V1-V2)*C*15.68/V

式中：VI一空白试验消耗硫代硫酸钠标准溶液量，mL；

V2一滴定苯酚标准贮备液时消耗硫代硫酸钠标准溶液量，mL；

V一取苯酚标准体积，mL；

C一硫代硫酸钠标准溶液浓度，mol/L

15.68—苯酚摩尔(1/6C6H5OH)质量，g/molo

(6)苯酚标准中间液：取适量苯酚贮备液，用水稀释至每亳升含().()l()mg苯酚。

运用时当天配制。

(7)澳酸钾一澳化钾标准参考溶液(cl/6KBrO3)：称取2.784g澳酸钾(KBrCh)

溶于水，加入l()g溪化钾(KBr),使其溶解，移入l()0()mL容量瓶中，稀释至

标线。

(8)碘酸钾标准溶液<cl/6KIO3=0.1mol/L)：称取预先经180c烘干的碘酸钾

0.8917g溶于水中，移入1()0()mL容量瓶中，稀释至标线。

(9)硫代硫酸钠标准溶液;称取6.2g硫代硫酸钠标(Na2s3任0)溶于煮沸放

冷的水中，加入0.2g碳酸钠，稀释至1000mL,临用前，用下述方法标定；吸

取20.00mL碘酸钾溶液于250mL碘量瓶中，加水稀释至100mL,加1g碘化

钾，再加5mL(1+5)硫酸，加塞，轻轻摇匀。置暗处放置5min,用硫代硫酸

钠标准溶液滴定至淡黄色，加1mL淀粉溶液，接着滴定置蓝色刚褪去为止，记

录硫代硫酸钠溶液用量。按下式计算硫代硫酸钠溶液(mol/L)：

cNa2S3.H2O=0.025*V4/V3

式中：V3一硫代硫酸钠标准溶液消耗量，mL；

V4一移取碘酸钾标准溶液量，mL；

0.025—碘酸钾标准溶液浓度，mol/Lo

(10)淀粉溶液：称取1g可溶性淀粉，用少量水调成糊状，加沸水至100mL,

冷后，置冰箱内保存。

(11)缓冲溶液(PH约为10)：称取2g氯化镂(NH4CL)溶于100mL氨水中，

加塞，置于冰箱内保存。

(12)2%(m/V)4-氨基安替比林溶液：称取4-氨基安替比林(C11H13N3O)2g

溶于水，稀释至100mL置冰箱内保存。可运用一周。(固体试剂易解潮，氧化,

宜保存在干燥器中)。

(13)8%(m/V)铁氟化钾溶液：称取8g铁氨化钾｛K3[Fe(CN)6]｝溶于水稀释至

100mL,置冰箱内保存。可运用一周。

四、试验仪器

1.500mL全玻璃蒸储器

2.50mL具塞比色管

3.分光光度计

五、试验步骤

1.标准曲线的绘制:于一组8支50mL比色管中，分别加入0、0.50、1.00、3.00>

5.00、7.00、10.00、12.50mL苯酚标准中间液,加水至50mL标线。加0.5mL缓

冲溶液,混匀,此时PH值为10.0±0.2,加溶氨基安替比林溶液1.0mL,混匀。

再加1.0mL铁氟化钾溶液,充分混匀，放置lOmin后马上于510nm波特长,用

20mm比色皿，以水为参比，测量吸光度。经空白校正后，绘制吸光度对苯酚含

量（mg）的标准曲线。

2.水样的测定：分取适量储出液50mL比色管中，稀释至5（）mL标线。用与绘制

标准曲线相同步骤显色何测定吸光度，计算减取空白试验后的吸光度。空白试验

是以水代替水样，经蒸储楼，按与水样相同的步骤测定。水样中挥发酚类的含量

按下式计算：

挥发酚（以本分II,mg/L）=（m/V）*1000

式中：m—水样吸光度经空白校正后从标准曲线上查得本分含量，mg；

V一移取储出液体积，mL。

相关仪器运用方法

六、数据处理

1.绘制吸光度一苯酚含量（mg）标准曲线。

2.计算水样中挥发酚类含量（以苯酚计，mg/L）。

3.依据试验状况，分析影响测定结果精确度的因素工

七、留意事项

1.如水样含挥发酚较高，移取适量水样并加水至250mL进行蒸储，则再计算时

应乘以稀释倍数。如水样中挥发酚类浓度低时，采纳4-氨基安替比林萃取分

光光度法。

2.当水样中含游离氯等氧化剂、硫化物、油类、芳香胺类与甲醛、亚硫酸钠等

还原剂时，应在蒸储前先做适当得预处理。处理方法参见《水和废水监则分

析方法》（第四版）第四篇其次章。

八、思索题

1.分析影响试验测定精确度得因素有哪些？

2.如加入硫酸铜溶液后产生较多量的黑色沉淀，应如何处理，该黑色沉淀是什

么？

《分子荧光光谱法测定水样中罗丹明B》

一、试验目的

学习荧光分析法的基本原理。了解分子荧光分光光度计的主要结构与工作原理，驾驭其正

确运用方法。了解荧光与分子结构的关系以与影响荧光强度的因素。了解罗丹明B的结构、

性质与其应用。

二、试验原理

利用某些物质分子受光照耀时所发生的荧光的特性和强度，进行物质的定性分析或定量

分析的方法。对于稀溶液（吸光度A=£cLW0.05）而言，其荧光强度F=2.3jlo£cL。式

中j是荧光物质的荧光效率；Io为入射光强度；£为荧光物质的摩尔吸光系数，c为荧光物质

的浓度，L为样品池的厚度。该式表明，在稀溶液（AWO.O5）和I。与L不变的条件下，荧

光强度与该物质的浓度成正比，据此进行定量。

罗丹明B是一种具有鲜桃红色的人工合成的工业染料，英文名：RhodamineB；分子式

C28H31CIN2O3；分子量479.0。由于罗丹明B具有特殊的化学结构，即含有两个赐予体基团

的氨基和一个接受体基团酮基，从而有助于产生荧光效应。因此，罗丹明B除反射一部分可

见光，还反射一部分荧光，因此具有很高的光亮度。在日光下它为品红色，故俗称玫瑰红，

荧光颜色为红〜橙色。其荧光颜色的变更与罗丹明B溶剂的浓度、pH等诸多因素相关。

三、试验仪器和试剂药品

1）仪器：960MC荧光分光光度仪（光源：150W汞灯；激发波长：365nm）

100mL容量瓶，10mL移液管

2）试剂：罗丹明B（浓度为1X105moI/L）

四、试验步骤

1电源开关操作程序

开机程序：灯电源开关一主机电源开关一打印机电源开关

关机程序：打印机电源开关一主机电源开关一灯电源开关

2利用标准溶液配制一系列浓度的罗丹明B溶液2X107mol/L,4X10-7mol/L,6XlOhmol/L,

8X10-7mol/L

3最大放射波长的确定：比色皿中放入代测溶液，选择起始波长和终止波长扫描，确定

最大放射波长。

4在最大放射波长下测定不同浓度标液和待测水样中罗丹明B的荧光强度。

相关仪器运用方法

部分操作流程图

例1定波长测定

按ENTER键,指示灯暗

显示荧光值

注⑦：带※的操作，若沿用原有的参数值，此时可省略此类操作。

⑧：如荧光显示值偏小或无，可重新设置SENS（灵敏度）与YSCALE（纵轴放大倍数）

值。

例2样品不扣背景值扫描

X按FUNCTION键，指示灯亮

按数字键"9"

按ENTER键,指示灯暗

派按入1键，指示灯亮

输入起始波长值

按ENTER键，指示灯暗

按YSCALE键,指示灯亮

L।।『J

;输入纵轴值匕

按ENTER键,指示灯暗

样品室中放入样品

।|I,

按SCAN键,指示灯亮

开始样品扫描,输入不扣样品背

景值的图谱.指示灯暗,结束。

六、数据处理

1工作曲线的拟合：利用计算机将所得试验数据进行拟合，得出工作曲线的方程和相关

系数.

2依据未知样品的荧光强度利用获得的工作曲线方程计算出未知样品中罗丹明B的浓

度。

七、留意事项

1.1留意事项：

1）安装或初次运用960荧光分光光度计前请务必细致阅读本运用说明书。本仪器可以选

配CRT,若带CRT部分的仪器其操作方法可参阅6.960CRT操作方法部分。

2）请肯定在打开灯源开关，点亮灯后再开主机开关（初次运用者，可通过仪器右上方的

红色窗口推断灯源是否点亮），最终开打印机。

3）灯源点亮稳定须要肯定的时间，故进行精密测试应在3（）min后。

4）当操作错误或其他干扰引起微机出错时，应即关断主机开关，重新启动，但无须关断

灯电源。

5）停止工作后，应先关打印机，再关主机，最终关灯电源。

6）在操作过程中，请勿用手干脆接触比色皿，同时留意样品不要污染比色皿外表。

八、思索题

1、在荧光测量中，为什么激发光的入射与荧光的接收不在始终线上，而呈肯定角度？

2、试述荧光分光光度计与紫外.可见分光光度计在结构上的有哪些不同点？

3、分子光谱和原子光谱的最主要区分与成因？

4、荧光与分子结构的关系

《电位法测定样品中的F・》

氟化物（尸一）是人体必需的微量元素之一。人体含氟的数量受环境（特殊

是水中）和食物含氟量、摄入量、年龄与其他金属（A/、&/、Mg）含量的影响。

一般认为，正常成年人体内共含叙2.6g,为体内微量元素的第三位，仅次于硅和

铁。氟对牙齿与骨骼的形成和结构以与钙和磷的代谢均有重要影响。适量的氟

（O.5~lmg/L）能被牙釉质中的氟灰石吸附，形成坚硬质密的氟磷灰石表面爱护

层，它能抗酸腐蚀，抑制嗜酸细菌的活性，并拮抗某些酶对牙齿的不利影响，发

挥防踽作用；还有利于钙和磷的利用与在骨骼中沉积，可加速骨骼的形成，增加

骨骼的硬度。缺氟易患龈齿病。而长期饮用含氟量高于1.（）〜1.5mg/L水时，则易

患斑齿病，如水中含氟量高于4.0mg/L时，则可导致氟骨病。饮用水中氟的相宜

浓度为。5~L0mg/L（F-）。

氨化物广泛存在于自然水体中。有色冶金、钢铁和铝加工、焦炭、玻璃、陶

瓷、电子、电镀、化肥、农药厂的废水中经常含有氟化物。本试验用电位法测定

水中氟的含量。

一、试验目的

1、驾驭用电位法测定水中氟含量的原理和基本操作;

2、初步了解氟与人体健康的关系。

二、试验原理

氟离子选择性电极的传感膜为氟化锄单晶片，与含氟试液接触时，电池的电

动势（E）随溶液中氟离子活度的变更而变更（遵守能斯特方程）。当溶液的总

离子强度为定值时听从下述关系式：

二E2.303僧

E=E------------lgpF.

E与lg/V成直线关系，2.3O3R77F为该直线的斜率，亦为电极的斜率。即电池

的电动势与试液中氟离子活度的对数呈线性关系。本方法的检测限范围为

0.05~19（）0mg/Lo水样的颜色、浊度不影响测定。

工作电池可表示如下：

A^AgCLQ33moi/L）,「（0.001〃w〃L）h/试洌外参比电极。

用氟电极测定氟离子时，最相宜的pH范围为5.5〜6.50pH过低，由于形成，几

影响尸的活度；pH过高，可能由于单晶膜中口3+的水解，形成〃（的）3,而

影响电极的响应，故通常用pH=6的柠檬酸钠缓冲液来限制溶液的pH值。

Fe3\A产对测定有严峻的干扰，加入大量的柠檬酸钠可消退它们的干扰。也有

采纳横基水杨酸、CyDTA（环己二胺四乙酸）等为掩蔽剂，但其效果不如柠檬

酸钠。此外，用离子选择性电极测量的是溶液中离子的活度，因此，必需限制试

液和标准溶液的离子强度相同；大量柠檬酸钠的存在，还可以达到限制溶液离子

强度的目的。

三、仪器与试剂

1、仪器

（2）氟离子选择电极；

（3）饱和甘汞电吸或氯化银电极：

（4）离子活度计、毫伏计或pH计：精确到O.lmV；

（5）磁力搅拌器：带聚乙烯或聚四氟乙烯包袱的搅拌子；

（6）聚乙烯杯:100mL,150mLo

2、试剂

（1）氟化物标准储备液：称取0.2210g基准氟化钠（NaF）（预先在

105~110℃干燥2h,或者在500〜650℃干燥40min,冷却）,用水溶解

后转入1000mL容量瓶中，稀释至标线，摇匀，贮存在聚乙烯瓶中。

此溶液氟离子浓度为100Ug/mLo

（2）氟化物标准溶液：移取10.00mL氟化钠标准储备液于100mL容量瓶中，

稀释至标线，摇匀。此溶液氟离子浓度为10ug/mL。

（3）乙酸钠溶液：称取15g乙酸钠溶于水，并稀释至100mL。

（4）总离子强度调整缓冲溶液（TISAB）：

①0.2mol/L柠檬酸钠T.Omol/L硝酸钠（TISABI）：称取58.8g二水柠檬

酸钠和85g硝酸钠，加水溶解，用盐酸调整pH至5〜6,转入1000mL

容量瓶中，稀释至标线，摇匀。

②总离子强度调整缓冲溶液（TISABII）：量取约500mL水置于1000吐容

量瓶中，加入57mL冰乙酸,58g氯化钠和4.0g环己二胺四乙酸（CyDTA）,

或1,2-环己撑二胺四乙酸，搅拌溶解，置烧杯于冷水浴中，渐渐地在不

断搅拌下加入6mol/L氢氧化钠溶液（约125mL）使pH达到5.（）~5.5之

间，转入1000mL容量瓶中，稀释至标线，摇匀。

③1.0mol/L六次甲基四胺-1.0mol/L硝酸钾-0.03mol/L铁钛试剂（TISAB

III）：称取142g六次甲基四胺［（。出）6241和85g硝酸钾（或硝酸钠）,

9.97g铁钛试剂加水溶解，调整pH至5〜6,转移到1000mL容量瓶中，

用水稀释至标线，摇匀。

（5）盐酸溶液：2mol/L盐酸溶液。

所用水为去离子水或无氟蒸僧水。

四、试验步骤

1、水样的采集和保存

应运用聚乙烯瓶采集和贮存水样。假如水样中氟化物含量不高、pH值在7

以上，也可用硬质玻璃瓶贮存。

2、仪器的打算

按测量仪器与电极的运用说明进行。在测定前应使试液达到室温，并使试液

和标准溶液的温度相同（温差不得超过±1°C）。

3、标准曲线绘制

分别取0.00、1.00、3.00、5.00>10.00和20.00mL氟化物标准溶液，置于50mL

容量瓶中，加入10mL总离子调整缓冲溶液，用水稀释至标线，摇匀。分别移入

100mL聚乙烯杯中，各放入一只塑料搅拌子，以浓度由低到高为依次，依次插

入电极，连续搅拌溶液，待电位稳定后，在接着搅拌下读取电位值（5），记耒

数据。在每一次测量之前，都要用水将电极冲洗净，并用滤纸吸取水分。在半对

数坐标纸上绘制E（mV）〜lgpr（nig/L）标准曲线。浓度标于对数分格上，最低浓

度标于横坐标的起点线上。

4、样品的测定

吸取适量样品溶液，置于50mL容量瓶中，用乙酸钠或盐酸调整至近中性，

加入10mL总离子强度调整缓冲溶液，用水稀释至标线，摇匀。将其移入100mL

聚乙烯杯中，放入一只塑料搅拌子，插入电极，连续搅拌溶液待电位稳定后，在

接着搅拌下读取电位值（E」）。在每一次测量之前，都要用水充分洗涤电极，并

用滤纸吸去水分。

按测定样品的条件和步骤，用水代替试样进行空白试验。

五、数据处理

水样中F-的浓度计算公式如下：

1

式中：pF.——水样中尸的浓度，mg/L；

2则——水样中尸的测定浓度，mg/L；

V}---所取水样体积，mL；

匕一一所测水样体积，mL。

依据测定结果，分析水样中氟的污染状况，评价氟污染水体对人体健康的影

响。

六、留意事项

1、测量仪器在运用前要进行校正；

2、测定过程中，要留意测定依次由低浓度到高浓度，且在每一次测量之前,

都要用水充分洗涤电极，并用滤纸吸去水分。

七、思索题

1、溶液的温度和离子强度对离子选择电极法测定水中氟有什么影响？

2、水中氟化物对人体健康有什么影响？

《醇系物的气相色谱分析》

一、试验目的

1、驾驭气相色谱分析的基本操作和苯系物的分析方法；

2、学习用归一法计算各组分的含量。

3、熟识FID检测器操作与运用。

二、试验原理

组分性质不同，在固定相上的溶解或吸附实力不同，即它们的安排系数大小不同。安排系数

大的组分在固定相上的溶解或吸附实力强，停留时间也长，移动速度慢，因而后流出柱子。可见

只要选择合适的固定相，使被分别组分的安排系数有足够差别，再加上对色谱柱和其他操作条件

的合理选择，就可得到令人满足得分别。

甲醇、乙醇等醇系物，可以采纳气相色谱法进行分析。在肯定条件下可实现各组分的分别。

采纳归一化法定量。

三、试验仪器

GC7900气相色谱仪，氢气（或氮器）钢瓶，微量注射器。

四、试验药品

1、标准样的配制：分别称取不同质量的甲醇和乙醇等醇系物，组成标准混合样品。

2、样品的配制：由甲醇和乙醉等醇系物依据肯定比例组成的混合样。

五、试验步骤

1、开启色谱与工作站；

2、设定操作条件：

F1D温度：250℃、；衰减：2；柱温：11（）℃；气化室温度：200℃；载气流速：10mL/min；

待温度升到设定值后，FID点火；

3、待基线平稳后，依次进入标准样品和待测样品；进样量0.1UL：

4、试验完成后关闭氢火焰和仪器，仪器降温后，关闭载气。

5、

同日900气相色谱仪器运用方法［

这样口：毛细柱进样口

检测器：FID

色谱柱：0V-17，0.25mm,50m

进样体积：0.1uL

气体打算：高纯氢（99.999%）；干燥空气；高纯氮（99.999%）

1、开启N2气钢瓶阀门，调整载气输入压力在0.3—0.4MPa；

2、打开GC—7900电源开关，仪器通过自检；

3、开启计算机，点击D—7900色谱工作站图标；

4、在工作站上进行温度设定：进样口、柱箱、FID输入详细数据，回车确定；

5、视察流量和柱压，若柱压太低，更换进样器的压垫；

6、点击通道1,打开窗口；

7、输入样品号、样品名称、类型、运用方法等

依据进入样品选择不同的类型和运用方法：标准样品运用‘标样’，测试样品运用'试样'，

8、方法建立：

选择'新建方法'，输入方法名称，进入参数设定，点击'下一步'，进入'定量参数'，根选

择‘峰高’或‘峰面积’为定量基础。选择‘内标法''外标法'等为‘定量方法'，在'组

分表'中输入测定的组分，进入'下一步‘报告风格'选择为'默认报告风格’，点击完成。

待各部分温度升到设定值后，开启H2钢瓶和空气泵。氢火焰点火。分别进标准样品，对曲

线进行校正。

9、假如为标样在浓度选项中确定，其详细的浓度：

10、样品测定

样品类型选择'试样'，方法选择为已经校正后的方法或归一化法。

进样分析。

11、结束

关闭氢气和空气，关闭氢火焰，待柱温降低至50℃以下，检测器温度降低至1（）0℃以下关闭

载气，关闭全部的钢瓶。

六、数据处理

测试结束后取下色谱图，按下列计算式，用峰面积外标法求个组分的含量。

C（。/归尸

式中：h：峰高（峰面积）；

ho：空白峰高（峰面积）测定值；

b：回来方程的斜率；

a：回来方程的截距。

七、留意事项

1.气相色谱的开关机依次要严格遵守；

2.柱箱的温度肯定要低于色谱柱的运用温度；

3.检测器的运用温度高于色谱柱的运用温度。

八、思索题

1.气相色谱对苯系物分别的原理；

2.气相色谱定性和定量的原理；

3、为什么本试验可以用归一法定量？

4、比较氢气和氮气作载气的优缺点。

《自来水中阴离子的测定》

一、试验目的

驾驭离子色谱法的基本原理；

了解圈子色谱的运用方法；

驾驭色谱法定性和定量的基本方法。

二、试验原理

离子色谱法以低交换容量的离子交换树脂为固定相，对离子行物质进行分

别。以电导检测器连续检测流出物电导变更的一种色谱方法。

离子在固定相和流淌相之间有不同的安排系数，当流淌相将样品带到分别柱时.，

由于各种离子对离子交换树脂的相对亲合力不同，样品中的各离子被分别，继而

进入抑制器。抑制器的作用主要是降低洗脱液的本底电导，增加被测离子的电导

响应值和除去样品中的阳离子，再流经电导池，由电导检测器检测并绘出各离子

的色谱图，以保留时间定性，峰高或峰面积定量，测出离子含量。

三、药品

1、水：超纯水，且经脱气处理;

2、氟离子标准贮备液(l.OOmg/mL)：称取氟化钠2.210g,溶于水，移入1000

n】L容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。贮于聚乙烯瓶中，置于冰箱(4℃)。

3、氟离子标准溶液(0.10mg/mL)：移取氟离子标准贮备液10.00mL,于100mL

容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。贮于聚乙烯瓶中，此溶液现用现配。

4、氯离子标准贮备液(1.OOmg/mL)：称取于500〜600C灼烧