2025年免疫学免疫技术应用试题及答案解析

2025年免疫学免疫技术应用试题及答案解析1.下列关于单克隆抗体制备过程中细胞融合的叙述，错误的是（）A.融合时可利用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂B.融合细胞包括B-B细胞、瘤-瘤细胞和B-瘤细胞C.融合后需要通过HAT培养基筛选出B-瘤细胞D.未融合的B淋巴细胞在体外培养条件下可无限增殖答案：D解析：单克隆抗体制备的细胞融合环节，常使用PEG、灭活病毒等作为诱导剂，A选项正确；细胞融合是随机的，因此会产生多种融合细胞类型，包括B-B细胞、瘤-瘤细胞和B-瘤细胞，B选项正确；HAT培养基含有次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T），氨基蝶呤可阻断细胞内的从头合成途径，未融合的B淋巴细胞和B-B细胞因缺乏体外无限增殖能力，且无法通过补救途径合成核酸，会逐渐死亡；瘤-瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT），无法利用次黄嘌呤进行补救合成，也会死亡，只有同时具备B淋巴细胞的HGPRT和瘤细胞无限增殖能力的B-瘤细胞能存活，故可通过HAT培养基筛选出目标细胞，C选项正确；未融合的B淋巴细胞在体外培养条件下寿命有限，不能无限增殖，只有瘤细胞和融合后的B-瘤细胞具备无限增殖能力，D选项错误。2.流式细胞术（FCM）可用于多种细胞分析，下列关于其原理和应用的描述，正确的是（）A.仅能分析细胞表面标志物，无法检测细胞内分子B.通过检测荧光信号强度来定量分析细胞的相关特性C.不能用于细胞周期和细胞凋亡的检测D.样本只能是新鲜制备的单细胞悬液，不能使用固定样本答案：B解析：流式细胞术的核心原理是将处理后的单细胞悬液在鞘液包裹下形成单列细胞流，通过检测区时，激光照射细胞产生散射光和荧光信号，其中散射光可反映细胞的大小、颗粒度等物理特性，荧光信号则由细胞表面或内部结合的荧光染料或荧光抗体产生，通过检测荧光信号的强度和波长，可定量分析细胞的相关生物特性，B选项正确；流式细胞术不仅能分析细胞表面标志物，还可通过细胞通透处理，使荧光抗体进入细胞内，检测细胞内的蛋白、核酸等分子，A选项错误；利用荧光染料（如PI）结合DNA的特性，可根据DNA含量的差异分析细胞周期各阶段的比例；通过AnnexinV/PI双染法，AnnexinV可结合凋亡早期细胞外翻的磷脂酰丝氨酸，PI可标记坏死或凋亡晚期细胞的核酸，从而实现细胞凋亡的检测，C选项错误；流式细胞术的样本处理灵活，除新鲜单细胞悬液外，经适当固定和通透处理的固定样本也可用于检测，只要保证细胞形态完整且目标分子能与荧光探针结合即可，D选项错误。3.酶联免疫吸附试验（ELISA）是临床常用的免疫检测技术，下列关于其不同类型的叙述，错误的是（）A.间接法主要用于检测抗体，以酶标抗抗体作为二抗B.双抗体夹心法适合检测具有多个抗原表位的大分子抗原C.竞争法可用于检测小分子半抗原，其检测信号与待测抗原浓度呈正相关D.捕获法常用于检测IgM类抗体，可减少IgG抗体的干扰答案：C解析：间接法的操作流程是将抗原包被于固相载体，加入待检样本，若样本中存在特异性抗体，会与固相抗原结合，再加入酶标记的抗抗体（如抗人IgG），与结合在固相上的抗体结合，最后通过底物显色反应检测抗体含量，主要用于检测血清中的抗体，A选项正确；双抗体夹心法需先将捕获抗体包被于固相，加入待测抗原后，抗原与捕获抗体结合，再加入酶标记的检测抗体，检测抗体与抗原的另一个表位结合，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”的夹心结构，因此要求抗原具有至少两个不同的抗原表位，适合大分子抗原检测，B选项正确；竞争法常用于小分子半抗原检测，因半抗原通常只有一个表位，无法用双抗体夹心法。其原理是将抗体包被于固相，加入待检样本和酶标记的半抗原，二者竞争结合固相抗体，待测抗原浓度越高，与固相抗体结合的酶标半抗原越少，最终的显色信号越弱，即检测信号与待测抗原浓度呈负相关，C选项错误；捕获法针对IgM类抗体设计，先将抗人IgM的μ链特异性抗体包被于固相，可特异性捕获样本中的IgM抗体，再加入抗原，使IgM与抗原结合，随后加入酶标记的抗抗原抗体，通过显色反应检测IgM含量。由于该方法先捕获IgM，避免了样本中高浓度IgG抗体与抗原的竞争性结合，能有效减少IgG的干扰，D选项正确。4.免疫组化技术可在组织或细胞原位检测抗原分布，下列关于其染色方法和注意事项的叙述，正确的是（）A.免疫荧光法的结果可长期保存，不受荧光淬灭影响B.酶标记法中，辣根过氧化物酶（HRP）的常用底物为DAB，显色后呈蓝色C.石蜡切片进行免疫组化时，需进行抗原修复以恢复抗原表位D.直接法因使用两种抗体，染色灵敏度高于间接法答案：C解析：免疫荧光法利用荧光抗体与抗原结合，通过荧光显微镜观察结果，但荧光物质易受光照、时间等因素影响发生淬灭，结果难以长期保存，需及时观察和记录，A选项错误；辣根过氧化物酶的常用底物包括3,3'-二氨基联苯胺（DAB）和3-氨基-9-乙基咔唑（AEC）等，DAB显色后呈棕褐色，AEC显色后呈红色，B选项错误；石蜡切片在制作过程中，组织经甲醛固定会导致抗原表位发生交联、遮蔽，使抗原性减弱或消失，因此需通过抗原修复（如高温高压修复、酶修复等方法）来解开交联，暴露抗原表位，保证抗体能有效结合，C选项正确；免疫组化的直接法是将酶或荧光直接标记在特异性一抗上，直接与抗原结合；间接法是先加一抗与抗原结合，再加入酶或荧光标记的二抗与一抗结合。间接法通过二抗的“放大效应”，能显著提高检测灵敏度，且一种二抗可匹配多种一抗，适用性更广，因此间接法灵敏度高于直接法，D选项错误。5.实时荧光定量PCR（qRT-PCR）在免疫研究中可用于基因表达分析，下列关于其原理的描述，正确的是（）A.仅通过终点PCR产物的电泳条带亮度来定量分析基因表达量B.利用荧光信号的累积实时监测PCR扩增过程，无需后续电泳检测C.荧光标记仅能结合在引物上，不能结合在探针或双链DNA上D.所有qRT-PCR方法的荧光信号强度均与扩增产物量无关答案：B解析：传统的常规PCR仅通过终点产物的电泳条带半定量分析，易受扩增效率、平台期影响，准确性差；而实时荧光定量PCR在PCR反应体系中加入荧光物质，通过荧光信号的累积实时监测每一轮扩增产物的变化，结合标准曲线可准确定量初始模板的浓度，无需进行后续的电泳检测，A选项错误，B选项正确；qRT-PCR的荧光标记方式多样，包括结合在引物上的SYBRGreenI（双链DNA结合染料，与双链DNA结合后发出荧光）、结合在探针上的TaqMan探针（5'端标记荧光报告基团，3'端标记荧光淬灭基团，扩增时Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，发出荧光）、分子信标等，C选项错误；无论是SYBRGreenI法还是TaqMan探针法，荧光信号的强度都与PCR扩增产物的量呈正相关，扩增产物越多，荧光信号越强，通过实时监测荧光信号的增长曲线，可计算初始模板量，D选项错误。6.下列关于免疫印迹（WesternBlot）技术的叙述，错误的是（）A.需先通过SDS将蛋白质按分子量大小分离B.分离后的蛋白质需转移至固相载体（如NC膜、PVDF膜）上C.只能检测特异性抗体，不能检测抗原D.可通过化学发光或显色法检测结合的抗体信号答案：C解析：免疫印迹技术的流程为：首先将样本中的蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS），SDS可使蛋白质变性并带上负电荷，在电场作用下，蛋白质按分子量大小在凝胶中分离，分子量小的蛋白质迁移速度快，分子量大的迁移速度慢，A选项正确；凝胶中的蛋白质无法直接与抗体结合进行检测，需通过电泳转移（如湿转、半干转）将其转移至硝酸纤维素膜（NC膜）或聚偏氟乙烯膜（PVDF膜）等固相载体上，以便后续的抗体孵育，B选项正确；免疫印迹不仅能检测抗原，也能检测抗体。检测抗原时，将样本蛋白转移至膜上后，加入特异性一抗与目标抗原结合，再加入酶标记的二抗，通过信号检测确定抗原存在和含量；检测抗体时，可将已知抗原固定在膜上，加入待检血清，若血清中存在特异性抗体，会与膜上抗原结合，再加入酶标记的抗人IgG，通过信号检测判断抗体是否存在，C选项错误；检测信号的方式包括化学发光法和显色法，化学发光法利用酶标记的二抗催化底物产生发光信号，通过曝光成像检测，灵敏度高；显色法如HRP催化DAB显色，可直接观察膜上的显色条带，D选项正确。7.噬菌体展示技术是筛选特异性抗体的重要方法，下列关于其原理和优势的描述，正确的是（）A.仅能展示肽段，不能展示完整的抗体可变区B.可将抗体基因的表达与抗体的功能筛选直接偶联C.筛选过程需依赖动物免疫，无法实现人源化抗体的筛选D.筛选得到的抗体亲和力较低，无需进一步优化答案：B解析：噬菌体展示技术是将编码蛋白质或肽段的基因插入噬菌体外壳蛋白基因中，使外源蛋白或肽段与噬菌体外壳蛋白融合表达，展示在噬菌体表面。除肽段外，还可展示完整的抗体可变区（如单链抗体scFv、Fab片段等），A选项错误；该技术的核心优势在于将基因表达产物（展示在噬菌体表面的抗体或肽段）与编码其的基因（存在于噬菌体内部的核酸）直接偶联，当通过抗原亲和筛选得到结合特异性抗原的噬菌体时，噬菌体内部的核酸也随之被分离，可通过测序获取抗体基因，实现“基因型-表型”的统一，便于后续的基因工程改造和表达，B选项正确；噬菌体展示技术无需依赖动物免疫，可通过构建人源抗体文库（如从人外周血淋巴细胞、骨髓细胞中提取mRNA，反转录为cDNA，扩增抗体可变区基因，构建噬菌体文库），利用抗原直接从文库中筛选人源化抗体，避免了动物抗体的免疫原性问题，C选项错误；初始筛选得到的抗体亲和力可能不高，可通过亲和力成熟技术（如易错PCR、DNA改组等）对抗体基因进行突变，构建次级文库，再进行多轮筛选，得到亲和力更高的抗体，D选项错误。8.免疫荧光技术中，荧光素标记抗体的质量直接影响实验结果，下列关于常用荧光素的描述，正确的是（）A.异硫氰酸荧光素（FITC）的发射波长为570nm，呈红色荧光B.藻红蛋白（PE）的最大吸收波长为495nm，与FITC的激发波长重叠C.别藻蓝蛋白（APC）的荧光强度高，常用于多色荧光标记D.荧光素的标记率越高，实验结果的特异性越强答案：C解析：异硫氰酸荧光素（FITC）是最常用的荧光素之一，其最大激发波长为495nm，发射波长为525nm左右，呈明亮的黄绿色荧光，A选项错误；藻红蛋白（PE）的最大吸收波长为565nm，最大发射波长为575nm，呈橙红色荧光，而FITC的激发波长为495nm，二者激发波长不重叠，可用于双标记实验，B选项错误；别藻蓝蛋白（APC）属于藻胆蛋白，具有高量子产率和强光稳定性，最大激发波长为650nm，发射波长为660nm，呈红色荧光，因激发和发射波长位于长波区，对样本的光毒性小，且与FITC、PE等荧光素的光谱重叠少，常用于多色荧光标记，C选项正确；荧光素的标记率需保持适当范围，标记率过低会导致荧光信号弱，难以检测；标记率过高可能使抗体分子结构发生改变，影响抗体与抗原的结合特异性，导致非特异性结合增加，反而降低实验结果的特异性，D选项错误。9.细胞因子的检测技术多样，下列关于不同方法的比较，正确的是（）A.生物学检测法仅能检测细胞因子的活性，不能定量检测其含量B.酶联免疫吸附试验（ELISA）可同时检测细胞因子的活性和含量C.流式细胞术胞内染色法可检测单个细胞分泌的细胞因子类型和含量D.实时荧光定量PCR检测的是细胞因子的蛋白水平，不是mRNA水平答案：C解析：生物学检测法是利用细胞因子的生物学活性，通过观察其对靶细胞的作用（如促进增殖、细胞毒作用等）来检测细胞因子活性，同时可通过制备标准品，绘制剂量-效应曲线，实现对细胞因子活性的定量检测，A选项错误；ELISA是基于抗原-抗体特异性结合的免疫检测方法，检测的是细胞因子的蛋白含量，无法检测其生物学活性，因为部分细胞因子蛋白可能因变性、修饰等原因失去活性，但仍能与抗体结合，B选项错误；流式细胞术胞内染色法通过体外刺激细胞，同时加入蛋白转运抑制剂（如莫能菌素），使细胞分泌的细胞因子滞留于胞内，再进行细胞通透和荧光标记的细胞因子特异性抗体孵育，可在单细胞水平分析分泌特定细胞因子的细胞比例，同时通过荧光信号强度半定量分析单个细胞分泌细胞因子的含量，C选项正确；实时荧光定量PCR检测的是细胞因子的mRNA水平，反映的是细胞因子的转录水平，而不是蛋白水平，蛋白水平的检测需依赖ELISA、免疫印迹等免疫检测技术，D选项错误。10.基因工程抗体的发展有效解决了鼠源抗体的免疫原性问题，下列关于人源化抗体的叙述，正确的是（）A.人源化抗体是将鼠源抗体的恒定区替换为人源恒定区B.CDR移植抗体是将鼠源抗体的互补决定区（CDR）移植到人源抗体的骨架区上C.完全人源抗体只能通过杂交瘤技术制备D.人源化抗体的免疫原性与鼠源抗体无差异答案：B解析：人源化抗体主要包括嵌合抗体、CDR移植抗体和部分人源化抗体。嵌合抗体是将鼠源抗体的可变区与人源抗体的恒定区融合，而非仅替换恒定区，A选项错误；CDR移植抗体（也称为重构抗体）是基因工程人源化的核心类型，其原理是将鼠源抗体可变区中决定抗原结合特异性的互补决定区（CDR）基因序列，移植到人源抗体可变区的骨架区（FR）基因上，构建成既保留鼠源抗体抗原结合特异性，又具有人源抗体大部分序列的抗体，可显著降低鼠源抗体的免疫原性，B选项正确；完全人源抗体的制备方法包括噬菌体展示技术、转基因小鼠技术等，杂交瘤技术主要用于制备鼠源抗体或嵌合抗体，无法直接制备完全人源抗体，C选项错误；人源化抗体通过替换鼠源序列，保留了人源抗体的大部分结构，免疫原性远低于鼠源抗体，可减少人体对抗体的免疫排斥反应，更适合临床应用，D选项错误。11.免疫沉淀技术可用于分离和鉴定特异性抗原，下列关于其原理和应用的叙述，正确的是（）A.仅能用于可溶性抗原的分离，不能用于细胞内抗原的检测B.免疫共沉淀技术可用于研究蛋白质-蛋白质之间的相互作用C.无需将抗体固定在固相载体上即可进行沉淀反应D.结果仅能通过蛋白电泳和染色进行检测，不能用免疫印迹验证答案：B解析：免疫沉淀技术包括常规免疫沉淀和免疫共沉淀，常规免疫沉淀可用于可溶性抗原的分离，对于细胞内抗原，可先通过细胞裂解制备含有细胞内蛋白的上清液，再加入特异性抗体进行免疫沉淀，实现细胞内抗原的检测，A选项错误；免疫共沉淀技术的原理是，若细胞内两个蛋白质存在相互作用，当用针对其中一个蛋白质的特异性抗体进行免疫沉淀时，会将与其结合的另一个蛋白质一起沉淀下来，通过检测沉淀复合物中的蛋白质，可验证二者的相互作用，常用于研究蛋白质复合物的组成和蛋白质-蛋白质相互作用，B选项正确；为便于沉淀的分离和洗涤，通常需要将抗体固定在固相载体上，如ProteinA/G琼脂糖微球，通过抗原-抗体结合，使目标抗原随微球沉淀，若不固定抗体，形成的抗原-抗体复合物不易分离，会影响实验结果，C选项错误；免疫沉淀的结果可通过蛋白电泳和染色初步观察蛋白条带，但为确认目标抗原的特异性，通常需要进行免疫印迹检测，即分离沉淀中的蛋白并转移至膜上，加入目标抗原的特异性抗体，通过信号反应验证是否为目标蛋白，提高结果的准确性，D选项错误。12.关于核酸疫苗的构建和免疫机制，下列描述正确的是（）A.仅能构建DNA疫苗，无法制备RNA疫苗B.核酸疫苗进入机体后，仅能诱导体液免疫，无法激活细胞免疫C.DNA疫苗可通过宿主细胞的转录翻译系统表达抗原蛋白D.核酸疫苗的免疫原性强，无需佐剂辅助即可产生有效免疫应答答案：C解析：核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗，RNA疫苗又可分为mRNA疫苗、自我扩增RNA疫苗等，近年来mRNA疫苗在新冠疫情防控中得到广泛应用，A选项错误；核酸疫苗的免疫机制较为全面，进入机体后，宿主细胞摄取核酸并表达抗原蛋白，抗原蛋白可被细胞内的蛋白酶体降解为多肽，与MHCI类分子结合呈递给CD8+T细胞，激活细胞免疫；同时，抗原蛋白也可被抗原提呈细胞（APC）摄取、加工，与MHCII类分子结合呈递给CD4+T细胞，辅助B细胞活化产生抗体，诱导体液免疫，因此既能诱导体液免疫，又能激活细胞免疫，B选项错误；DNA疫苗通常构建在含有真核表达调控元件（如启动子、增强子）的质粒载体上，当宿主细胞摄取质粒后，质粒进入细胞核，在宿主细胞的转录系统作用下合成mRNA，mRNA进入细胞质后，通过宿主的翻译系统合成抗原蛋白，C选项正确；核酸疫苗的免疫原性相对较弱，单独使用时难以产生足够强的免疫应答，通常需要佐剂辅助，如铝佐剂、脂质体载体等，脂质体不仅能保护核酸不被降解，还能增强抗原提呈细胞的摄取，提高免疫效果，D选项错误。13.亲和层析技术是分离纯化蛋白质的常用方法，下列关于其原理和类型的叙述，错误的是（）A.基于抗原与抗体、酶与底物等生物分子的特异性亲和作用B.免疫亲和层析利用抗原与抗体的特异性结合纯化目标蛋白C.金属螯合层析（如Ni-NTA柱）可用于纯化带有His标签的蛋白D.凝胶过滤层析属于亲和层析的一种，利用分子大小差异分离蛋白答案：D解析：亲和层析技术的核心原理是利用生物分子之间的特异性亲和相互作用，如抗原与抗体、酶与底物或抑制剂、受体与配体、蛋白与核酸等，通过将其中一种分子固定在固相载体上作为配基，当含有目标分子的样本通过层析柱时，目标分子与配基特异性结合，其他杂质被洗脱，随后通过改变洗脱条件（如pH、离子强度、加入竞争剂等）将目标分子洗脱下来，实现分离纯化，A选项正确；免疫亲和层析是亲和层析的重要类型，将特异性抗体固定在层析柱上，当含有目标抗原的样本通过时，抗原与抗体特异性结合，杂质被去除，之后用适当的洗脱液（如甘氨酸-HCl缓冲液）将抗原洗脱，可获得高纯度的抗原，B选项正确；金属螯合层析利用蛋白质与金属离子的配位结合，Ni-NTA柱是常用的金属螯合层析柱，NTA（次氮基三乙酸）可与Ni2+螯合，带有组氨酸（His）标签的蛋白（通常是在蛋白N端或C端融合6个组氨酸）可与Ni2+特异性结合，通过咪唑竞争结合Ni2+，可将His标签蛋白洗脱，C选项正确；凝胶过滤层析（也称为分子筛层析）不属于亲和层析，其原理是利用凝胶颗粒的孔径大小差异，使样本中的分子按分子量大小分离，分子量大的蛋白质无法进入凝胶颗粒内部，直接从颗粒间隙流出，洗脱速度快；分子量小的蛋白质可进入凝胶颗粒内部，洗脱速度慢，与生物分子的特异性亲和作用无关，D选项错误。14.关于免疫芯片技术的特点和应用，下列描述正确的是（）A.仅能检测一种生物分子，检测通量低B.基于抗原-抗体的特异性结合，可同时检测多种靶标C.实验