2025年微生物检验实操技能培训试题及答案

2025年微生物检验实操技能培训试题及答案一、填空题（共15题，每题2分，共30分）1.根据2024年修订、2025年正式实施的《病原微生物实验室生物安全通用准则》（GB19489-2024），二级生物安全（BSL-2）实验室操作疑似呼吸道高致病性病原微生物样本时，个体防护装备需包含：一次性医用防护口罩（N95及以上级别，密合性检测合格）、护目镜/防护面屏、双层乳胶手套、防水隔离衣、鞋套。2.微生物检验用培养基的pH值需在____℃条件下测定，常规细菌检验用培养基的pH允许偏差为±0.2。答案：253.高压蒸汽灭菌的常用参数为：____℃、103.4kPa、维持____min，针对朊病毒污染物品需采用134℃、18min的灭菌参数。答案：121；15~204.食品微生物检验中，菌落总数的报告单位为____，计数时需选取菌落数在____CFU之间、无蔓延菌落生长的平板进行计数。答案：CFU/g（或CFU/mL、CFU/cm²）；30~3005.依据CLSIM100-S34（2024版）抗菌药物敏感性试验执行标准，常规细菌药敏试验的孵育温度为____，孵育时间为____。答案：35±2℃；16~18h（特殊菌株可延长至24h）6.粪便样本分离沙门氏菌时，需先接种缓冲蛋白胨水进行前增菌，再转种____或四硫磺酸盐煌绿增菌液进行选择性增菌。答案：亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）7.紫外线消毒的有效波长范围为200~275nm，峰值为____nm，日常监测中普通30W直管紫外线灯的辐照强度不得低于70μW/cm²。答案：253.78.微生物实验室样本拒收的核心标准包括：标识模糊/错误、容器破损污染、样本量不足、采样至送检超过时限，其中脑脊液样本送检时限不得超过____h，痰样本不得超过____h。答案：1；29.革兰染色的标准操作步骤为：结晶紫初染1min→碘液媒染1min→____脱色15~30s→沙黄（或复红）复染1min。答案：95%（体积分数）乙醇10.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）鉴定微生物时，常规细菌样本点样后添加的基质溶液为____配制的α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA）溶液。答案：50%乙腈+2.5%三氟乙酸11.洁净区微生物监测中，BSL-2实验室操作区空气沉降菌的合格标准为≤____CFU/皿（Φ90mm，暴露30min），物体表面菌落数≤____CFU/cm²。答案：10；1012.食品中大肠菌群检验的初发酵培养基为____，初发酵阳性管需转种煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）进行复发酵确认。答案：月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）13.病原微生物菌株保存时，普通苛养菌可采用-20℃甘油肉汤保存，保存时间不超过6个月，高致病性病原微生物菌株需送____集中保藏。答案：国家级病原微生物菌（毒）种保藏机构14.抗酸染色的结果判读中，抗酸杆菌呈____色，非抗酸杆菌及背景物质呈蓝色。答案：红15.药敏试验菌悬液的浊度需调整至____麦氏单位，相当于1.5×10^8CFU/mL的菌浓度。答案：0.5二、单项选择题（共10题，每题3分，共30分）1.高压蒸汽灭菌效果监测的生物指示剂为（）A.枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢B.嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢C.大肠杆菌ATCC25922D.金黄色葡萄球菌ATCC25923答案：B2.痰样本培养前的合格性判定标准为：低倍镜下鳞状上皮细胞<10个、白细胞>（）个A.10B.15C.25D.30答案：C3.倾注法接种菌落总数时，熔化的培养基需冷却至（）后方可倾注A.37±1℃B.46±1℃C.55±1℃D.60±1℃答案：B4.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的药敏筛查试验指示药物为（）A.青霉素GB.苯唑西林/头孢西丁C.阿莫西林D.万古霉素答案：B5.真菌浅部感染标本直接镜检的常用封片液为（）A.0.9%生理盐水B.革兰染色液C.10%氢氧化钾（KOH）溶液D.瑞氏染色液答案：C6.BSL-2实验室操作区的空气洁净度要求为（）A.十万级B.万级C.千级D.百级答案：B7.微生物检验样本短期冷藏保存的温度范围为（）A.0~4℃B.2~8℃C.-20℃D.-70℃答案：B8.下列哪种细菌的生化反应特征为：不发酵乳糖、动力阴性、硫化氢阴性（）A.沙门氏菌B.志贺氏菌C.大肠杆菌D.肺炎克雷伯菌答案：B9.生物安全柜高效过滤器的常规更换周期为（），或阻力达到初始阻力的150%时必须更换A.3个月B.6个月C.1~2年D.5年答案：C10.下列哪种样本不需要进行前增菌处理可直接接种分离平板（）A.冷冻加工食品样本B.环境涂抹样本C.腹泻患者新鲜脓血便样本D.恢复期患者粪便样本答案：C三、多项选择题（共5题，每题4分，共20分，多选、少选、错选均不得分）1.下列属于微生物检验实操中的强制生物安全规范的有（）A.佩戴的污染手套不得触碰实验室公共区域（门把手、键盘、电梯按钮等）B.样本离心时必须使用密封转子，离心结束后静置10min方可开盖C.废弃病原样本、接触过病原的耗材必须经121℃高压灭菌30min后方可处置D.接种环灼烧灭菌后需充分冷却再挑取菌落，避免高温杀死待检菌E.生物安全柜操作时玻璃挡板不得高于安全刻度线，操作全程不得离开安全柜区域答案：ABCDE2.微生物检验用培养基的质量验收内容包括（）A.外观检查：颜色均一、无沉淀、无杂质、凝固度符合要求（固体培养基斜面长度不超过试管2/3，平板无冷凝水）B.pH值测定：25℃下pH值符合产品标准，偏差≤±0.2C.无菌试验：每批次培养基随机抽取3%~5%置于35℃孵育24h，无菌落生长为合格D.促生长试验：接种标准菌株，菌落生长率≥70%，菌落形态符合特征E.选择性培养基需做抑制试验：接种非目标菌，无生长或生长明显受抑制为合格答案：ABCDE3.下列革兰染色结果判读正确的有（）A.金黄色葡萄球菌：革兰阳性球菌，呈葡萄串状排列B.大肠埃希菌：革兰阴性杆菌，呈单个或短链排列C.肺炎链球菌：革兰阳性球菌，呈双排列或短链排列，周围有荚膜D.脑膜炎奈瑟菌：革兰阴性双球菌，呈肾形排列E.结核分枝杆菌：革兰阳性杆菌，呈抗酸阳性答案：ABCD（解析：结核分枝杆菌细胞壁脂质含量高，革兰染色难以着色，常规革兰染色结果为阴性或弱阳性，需通过抗酸染色确认）4.抗菌药物敏感性试验的质量控制要求包括（）A.每批次试验同步接种标准质控菌株（如大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853），药敏结果在CLSI规定的允许范围内方可报告B.MH琼脂平板的厚度为4±0.5mm，pH值为7.2~7.4C.菌悬液浊度严格控制为0.5麦氏单位，配制后15min内完成接种D.孵育环境不得含有CO2，除非是苛养菌药敏试验E.结果判读需测量抑菌圈直径或MIC值，严格对照CLSI标准判定敏感、中介、耐药答案：ABCDE5.微生物实验室消毒灭菌效果监测的常规内容包括（）A.高压蒸汽灭菌：每锅次进行物理监测、每批次进行化学监测、每周进行1次生物监测B.紫外线消毒灯：每季度监测1次辐照强度，日常记录开灯时间，累计使用时间不超过1000hC.空气消毒效果：每月监测1次沉降菌或浮游菌浓度D.物体表面及手卫生：每月监测1次菌落数，不得检出致病性微生物E.生物安全柜：每年至少进行1次性能验证，包括高效过滤器完整性、气流流速、洁净度等答案：ABCDE四、实操简答题（共4题，每题10分，共40分）1.简述食品样本菌落总数检验的完整实操流程及关键控制点。答案：（1）样本接收与核对：核查样本标识、包装完整性、送检时限，样本需在采样后2~8℃冷藏运输，4h内送达实验室；（2）样本稀释：无菌操作称取25g（或量取25mL）样本，加入装有225mL无菌生理盐水的均质袋中，拍击式均质1~2min制成1:10的稀释液，根据样本污染程度进行10倍梯度稀释，选取2~3个适宜稀释度备用；（3）接种倾注：分别取1mL稀释液加入无菌平皿，立即倾注15~20mL冷却至46±1℃的平板计数琼脂，摇匀后静置待凝；（4）培养：平板倒置，36±1℃培养48±2h，水产品样本需30±1℃培养72±2h；（5）计数与选取菌落数在30~300CFU之间、无蔓延菌落的平板计数，若所有稀释度菌落数均<30CFU则计数最低稀释度平板，均>300CFU则计数最高稀释度平板，计算结果后以CFU/g（CFU/mL）为单位报告，结果保留2位有效数字。关键控制点：均质充分、稀释液混匀、培养基温度适宜、避免交叉污染。2.简述革兰染色的操作要点及结果判读注意事项。答案：操作要点：（1）涂片：取1μL生理盐水滴于载玻片，挑取单个菌落均匀涂布成直径1cm左右的薄菌膜，自然晾干；（2）固定：载玻片过火焰3次，温度以触及手背不烫为宜，避免菌体变形；（3）染色：严格按照初染、媒染、脱色、复染步骤操作，脱色为核心步骤，根据菌膜厚度调整脱色时间，至洗脱液无紫色为止；（4）干燥：自然晾干或吸水纸吸干，避免擦拭菌体。结果判读注意事项：（1）选取菌膜均匀、菌体分散的区域观察，避免菌苔过厚区域导致假阳性；（2）每批次染色同步做阴阳性对照（金黄色葡萄球菌为阳性对照，大肠埃希菌为阴性对照），对照结果正确方可判读样本结果；（3）老年菌、死亡菌可能出现革兰染色结果阴阳混合，需重新挑取新鲜菌落染色复核。3.简述BSL-2实验室操作疑似新型冠状病毒感染患者呼吸道样本的个人防护穿脱流程。答案：穿戴流程：（1）进入一更衣区，脱去个人衣物，穿戴实验室工作服、工作鞋；（2）进入二更衣区，佩戴N95及以上级别的医用防护口罩，做密合性检测合格；（3）佩戴一次性帽子，全覆盖头发及耳部；（4）佩戴护目镜/防护面屏，调整至视野清晰无松动；（5）穿防水连体隔离衣，收紧袖口、领口拉链拉至顶部；（6）佩戴双层乳胶手套，内层手套套入隔离衣袖口内，外层手套覆盖隔离衣袖口；（7）穿防水鞋套，覆盖隔离衣裤脚。脱卸流程：（1）操作结束后，用75%乙醇消毒外层手套，进入脱卸区；（2）摘除外层手套，放入感染性废物袋，手消毒；（3）解开隔离衣拉链，从上向下脱卸隔离衣，连同鞋套一同脱下，反卷放入感染性废物袋，手消毒；（4）摘去护目镜/面屏，放入消毒容器，手消毒；（5）摘去帽子，放入感染性废物袋，手消毒；（6）摘去医用防护口罩，手消毒；（7）摘除内层手套，手消毒，更换清洁口罩后离开实验室。4.简述MALDI-TOFMS微生物鉴定的实操步骤及质量控制要求。答案：实操步骤：（1）菌株纯化：待检菌株需在非选择性平板上培养获得单个菌落，保证纯度≥99%；（2）点样：取1μL接种环挑取单个菌落，均匀涂布于质谱靶板的点样孔内，薄而均匀；（3）加基质：每孔加入1μLCHCA基质溶液，室温自然晾干；（4）上机检测：将靶板放入质谱仪，选择标准细菌鉴定程序进行检测。质量控制要求：（1）每批次靶板同步点样标准质控菌株（大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923），质控菌株鉴定得分≥2.0分，说明本次检测有效；（2）样本鉴定得分≥2.0分时，可报告到种水平；得分1.7~2.0分时，可报告到属水平；得分<1.7分时，需重新纯化菌株、重复点样检测，或采用生化试验、核酸检测方法复核。五、案例分析题（共2题，每题15分，共30分）1.某地市疾控中心微生物实验室接到辖区内某学校食源性疾病爆发报告，共送检腹泻患者粪便样本28份、剩余食物（凉拌菜）样本5份，要求检测沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌及其肠毒素，请制定完整的实操检测方案。答案：（1）生物安全防护：所有操作在BSL-2实验室进行，操作人员采用二级生物安全防护，样本处理在Ⅱ级A2型生物安全柜内操作，所有接触样本的耗材经高压灭菌后处置。（2）样本接收与保存：核查样本包装（符合B类感染性物质运输要求）、标识、送检时限，样本2~8℃保存，24h内完成检测，无法检测的样本置于-20℃保存。（3）检测流程：①沙门氏菌检测：粪便样本直接接种SS平板、麦康凯平板，同时接种亚硒酸盐胱氨酸增菌液；剩余食物样本称取25g加入225mL缓冲蛋白胨水均质，36℃培养6~8h前增菌，转种亚硒酸盐胱氨酸增菌液培养18~24h，转种SS、麦康凯平板；挑取可疑无色透明、中心黑色的菌落，做生化试验（三糖铁、动力、吲哚、尿素酶等）和沙门氏菌因子血清凝集试验确认。②志贺氏菌检测：粪便样本直接接种SS平板、麦康凯平板，挑取无色透明、小而光滑的可疑菌落，做生化试验（三糖铁不产气、无动力、硫化氢阴性）和志贺氏菌因子血清凝集试验确认。③金黄色葡萄球菌检测：样本接种7.5%氯化钠肉汤增菌18~24h，转种Baird-Parker平板，36℃培养24~48h，挑取黑色、周围有浑浊圈的可疑菌落，做血浆凝固酶试验，阳性菌株采用ELISA或荧光PCR方法检测肠毒素。（4）质量控制：每批次检测同步做阳性对照（沙门氏菌ATCC14028、志贺氏菌ATCC51055、金黄色葡萄球菌ATCC25923）和阴性对照（无菌生理盐水），培养基、试剂均在有效期内，批批做无菌试验和性能验证。（5）结果24h内出具初筛阳性报告，上报市卫健委及食源性疾病监测系统，48h内出具确认报告，阳性菌株送省级疾控中心复核保藏。2.某三甲医院微生物室检验人员在ICU患者痰标本培养中，分离到1株肺炎克雷伯菌，纸片扩散法药敏结果显示：亚胺培南抑菌圈直径11mm、美罗培南抑菌圈直径10mm、头孢他啶-阿维巴坦抑菌圈直径12mm，其余