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血淋巴细胞培养染色体检查常规一、适应症：（一）习惯性流产、原发不孕及分娩过染色体异常儿的夫妇。（二）原发闭经、月经稀发、卵巢早衰等月经病患者。（三）外生殖器畸形、性别不明确的男女。（四）原因不明的先天性智力低下患者。（五）各类畸形新生儿或父母染色体异常的新生儿。二、培养前准备（一）所用器皿须经肥皂水、清水、蒸馏水冲洗，过酸清洁烤干消毒备用，消毒时间超过二周要重新消毒。（二）术前紫外线照射无菌室每周用苍术熏烟1次。（三）无菌条件下抽取外周血1-2m1，肝素抗凝。（四）洗手，戴口罩、帽子，换鞋进入无菌室。三、培养（一）用pH为7.2~7.4的1640培养液4ml，加入肝牛血清1ml，PHA0.2ml及血液0.5ml。（二）37℃培养箱中培养68~72小时，加入秋水仙素终止分裂。（三）加入秋水仙素后继续培养3~6小时。（四）每天观察培养箱温度及培养物情况，看有无溶血及污染，培养箱温度控制在37士0.5℃为宜。四、收获（一）收集细胞：培养物倒入尖底离心管、以800~1000转/分速度离心5分钟去上清液。（二）低渗：加入预温为0.075M氯化钾8至10ml，37℃水溶中低渗30分钟。（三）预固定：以3：1甲醇冰醋酸0.5m1固定30分至1小时2次，必要时4℃冰箱过夜。（四）冰片滴片，火焰上过数次。五、G带的制备（一）将玻片放于70℃烤箱710小时或放于37℃温箱中72小时。（二）胰酶消化：用Difico胰酶液（浓度为2.5%）0.5ml溶于60ml生理盐水中，再用3%Tris液及0.4%酚红调节pH值7.2~7.4，37C水溶箱中预温。（三）染缸内溶液温度达到37C时放入玻片每次要摸索消化时间，一般为60~80秒。（四）用pH6.8的磷酸缓冲液配制的20：1吉姆氏染色15~20分钟。六、C带的制备（一）把5%氢氧化钡和2XSSC溶液各50m1分装两染缸中，置于60℃水溶箱中。（二）把常规制备的染色体新鲜片子放入5%氢氧化钡溶液中处理30秒。（三）取出清水冲洗干净后再放入2XSSC液中1~1.5小时。（四）取出清水冲洗干净后以20：1的吉姆氏染色5分钟。七、镜检（一）每例镜下计数30个分裂相，画图分析3个分裂相，嵌合体则计数50个分裂相，各系细胞分析3个分裂相。（二）画图分析有异常或可疑的，摄片3至5个分裂相，剪贴分析。（三）培养基pH值严格控制在7.

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