楚雄州2019年健康人群麻疹IgG抗体复核结果分析

楚雄州2019年健康人群麻疹IgG抗体复核结果分析1材料与方法1.1材料1.1.1血清标本来源从楚雄州10县(市)30个乡镇90个村委会随机抽取健康人群静脉血365份,分为8~17月龄、18~35月龄、3~6岁、7~14岁、15~24岁、25~34岁、35~44岁、≥45岁8个年龄组,分离血清并贮存于-20℃冰箱待检。1.1.2麻疹IgG试剂盒州级和县(市)级实验室均采用珠海海泰生物制药有限公司生产的麻疹病毒IgG抗体检测试剂盒，批号20190401，试剂有效期20200409。1.2方法与结果判断检测方法：参照WS296-2017《麻疹诊断标准》ELISA酶联免疫吸附实验。1.2.1检测步骤相关操作按说明书进行：血清标本1：100稀释后，加入微孔板，孵育后洗涤板孔，加入酶标IgG抗体后孵育，洗涤板孔，加入底物，终止反应，读取双波长吸光度（OD）值。1.2.2结果计算①定性：标准品A的OD值小于0.10，标准品B的OD值大于0.20，标准品C的OD值大于等于0.50。②定量：标准品A的OD值小于0.10，标准品B、C、D、E的OD值分别大于等于0.20，0.50，1.00，1.50，且标准曲线相关系数r值不低于0.99。满足以上条件，证明实验成立，否则实验结果无效，需重新实验。1.2.3结果判定①定性：以标准品B作为临界对照，计算样品的吸光度与临界值的比值（S/CO）值，S/CO值＝样品OD值/临界对照OD值平均值。阳性（R）：S/CO≥1.1；可疑（S）：0.9≤S/CO≥1.1；阴性（N）：S/CO≤0.9。②定量：以标准品浓度为横坐标，检测OD值为纵坐标，采用半对数曲线拟合方法进行定量，通过标准品拟合定量曲线读取血清标本中麻疹病毒IgG抗体含量。麻疹IgG抗体含量＜200mIU/ml的判定为阴性，≥200mIU/ml的判定为阳性。抗体含量大于5IU/ml的样品进一步稀释至标准品浓度范围内后再检测。按以下公式结算样本抗体含量：样品抗体含量（IU/ml）=样品测量值*样品稀释倍数/100。1.2.4麻疹IgG抗体检测结果州级复核结果判定依据定性结果：结果分为阳性和阴性，州、县（市）级两级疾病预防控制中心检测结果一致判定为符合，结果不一致判定为不符合。定量结果：结果为数值（单位mIU/ml），本次抽样标本县（市）级疾病预防控制中心的定量检测结果在州级检测结果的±15%范围内为符合，超出±15%范围为不符合。1.2.5统计分析使用Excel和SPSS17.0统计软件对资料进行χ2检验和t检验，以α=0.05为检验水准，P≤0.05为差异有统计学意义,计算分析灵敏度、特异度、假阴性率、假阳性率、正确指数和Kappa值。2结果2.1州级与县（市）级实验室检测结果比较2.1.1定量结果比较本次检测365份麻疹血清IgG抗体检测结果显示：县（市）级定量检测平均值为1507.80mIU/ml；州级定量检测平均值为1940.80mIU/ml；州级与县（市）级实验室365份麻疹血清IgG抗体几何平均浓度（GMC）结果差异有统计学意义（t=-2.532,P=0.011，P＜0.05）；两级实验室检测结果之间存在关联性，其关联强度为0.62，Kappa值=0.66,县（市）级定量检测结果的灵敏度和特异性分别为99.44%和62.50%；假阴性率0.56%，假阳性率37.50%，正确指数=0.62（详见表1）。表1州级与县（市）级定量结果比较县（市）级定量检测州级定量检测合计（份）阳性（份）阴性（份）阳性（份）3553358阴性（份）257合计（份）35783652.1.2定性结果比较州级与县（市）级实验室同样检测365份麻疹血清IgG抗体中有335份同为阳性，8份同为阴性。州级和县（市）级实验室定性检测结果的阳性率分别为93.69%和95.89%，两级实验室检测的阳性结果差异没有统计学意义（χ2=2.23，P=0.134，P＞0.05）。两级实验室检测结果之间存在关联性，其关联强度为0.40，Kappa值=0.39,县（市）级定性检测结果的灵敏度和特异性分别为97.95%和34.78%；假阴性率2.05%，假阳性率65.22%，正确指数=0.33（详见表2）。表2州级与县（市）级定性结果比较县（市）级定性检测州级定性检测合计（份）阳性（份）阴性（份）阳性（份）33515357阴性（份）788合计（份）342233652.2定性和定量两种检测标准结果比较2.2.1州级实验室定性和定量两种检测标准结果比较抽检的365份麻疹血清中有341份定性、定量检测结果均为阳性，7份均为阴性。定性和定量检测结果的阳性率分别为93.69%和97.80%，两种检测标准的阳性结果差异有统计学意义（χ2=11.53，P＜0.001，P＜0.05），定量检测的阳性率高于定性检测的阳性率。两种检测标准之间存在关联性，其关联强度为0.47，Kappa值=0.43,定量检测结果的灵敏度为99.71%，特异性为30.44%；假阴性率0.29%，假阳性率69.56%，正确指数=0.30（详见表3）。表3州级实验室定性、定量两种检测标准结果比较定量检测定性检测合计（份）阳性（份）阴性（份）阳性（份）34116357阴性（份）178合计（份）342233652.2.2县（市）级实验室定性和定量两种检测标准结果比较县（市）级实验室检测的365份麻疹血清中有349份定性、定量检测结果均为阳性，6份均为阴性，定性结果阳性率为95.89%，定量结果阳性率为98.08%，定量的阳性率高于定性的阳性率，两种检测标准的阳性结果差异有统计学意义（χ2=0.49，P=0.02，P＜0.05），两种标准之间存在关联性，其关联强度为0.58，Kappa值=0.53,定量检测结果的灵敏度和特异性分别为99.71%和40%；假阴性率和假阳性率分别为0.29%和60%；正确指数=0.40（详见表4）。表4县（市）级实验室定性、定量两种检测标准结果比较定量检测定性检测合计（份）阳性（份）阴性（份）阳性（份）3499358阴性（份）167合计（份）350153652.3州县两级实验室定性和定量复核结果比较定性结果复核情况：抽查的365份麻疹血清IgG抗体检测结果显示，州级检测结果与县（市）级检测结果相同的有343份，定性结果符合率为93.97%，经统计学分析不同地区、年龄段、性别、民族之间定性的符合率差异均无统计学意义。不同地区之间姚安县符合率最低为84%，牟定县最高为100%。不同年龄之间15~24岁符合率最低为85%，8~17岁、25~34岁最高为100%。定量结果复核情况：定量结果复核采用县级结果必须在州级检测结果的±15%范围内才能判定为符合，本次抽查365份麻疹血清IgG抗体检测结果显示，州级检测结果与县（市）级检测结果相同的有65份，定量结果符合率为17.81%，经统计学分析不同地区之间定量符合率具有显著性差异（χ2=34.643，P＜0.05），楚雄市的符合率最高为43.33%，牟定县的符合率最低为2.13%；不同年龄段之间定量符合率具有显著性差异（χ2=22.980，P＜0.05），≥45岁的符合率最高为36.36%，35~44岁最低为0%。不同民族、性别之间定量的符合率差异无统计学差异（详见表5）。表5楚雄州麻疹IgG抗体检测复核结果变量检测标本数（份）定性符合数（份）定性符合率（%）定量符合数（份）定量符合率（%）地区楚雄市302996.671343.33双柏县323093.7513.13牟定县4747100.0012.13南华县323196.88618.75姚安县504284.00918.00大姚县323196.88412.50永仁县323196.881134.38元谋县302790.00826.67武定县464393.48715.22禄丰县343294.12514.71统计学分析χ2=12.032，P=0.130χ2=34.643，P＜0.001民族汉族18316992.353116.94彝族13613297.062820.59其他464291.30613.04统计学分析χ2=3.716，P=0.156χ2=1.526，P=0.466年龄8~17月龄3333100.001030.3018~35月龄898393.261011.243~6岁787292.31810.267~14岁898494.382123.6015~24岁201785.00210.0025~34岁1818100.00633.3335~44岁161593.7500.00≥45岁222195.45836.36统计学分析χ2=5.937，P=0.464χ2=22.980，P=0.001性别男19618292.863015.31女16916195.273520.71统计学分析χ2=0.930，P=0.335χ2=1.811，P=0.178合计36534393.976517.813讨论楚雄州365份健康人群标本州级和县（市）级实验室麻疹IgG定性检测抗体阳性率均大于90%，州、县（市）的麻疹IgG抗体几何平均浓度分别为1940.80mIU/ml和1507.80mIU/ml；楚雄州本次结果高于云南省2015年全人群麻疹抗体阳性率89.77%及几何平均浓度为810.20mIU/ml[20]，也高于省内大理州2016年麻疹抗体几何平均浓度904.31mIU/ml[21]，同时远超江苏省镇江市2015年麻疹抗体几何平均浓度288.78mIU/ml[22]，说明楚雄州麻疹IgG抗体阳性率及几何平均浓度均保持较高水平。本次对比分析结果表明，楚雄州、县两级实验室对楚雄州365份健康人群标本麻疹IgG抗体定量和定性检测结果均体现出较高的灵敏度，这说明在使用同样试剂的前提下，楚雄州各级疾病预防控制中心实验室检验检测质量较高。同时我们也看到，州县两级实验室麻疹IgG抗体定性和定量两种检测方法存在一致性，但一致性强度仅为中度；州级定性检测结果阴性的23份麻疹血清标本中，有16份经定量检测为阳性，占69.56%；县级定性检测结果阴性的15份麻疹血清标本中，有9份经定量检测为阳性，占60%；这说明麻疹IgG抗体定量检测能较好的区分人群抗体滴度的高低，并能有效矫正定性结果偏差。综合对比州、县两级实验室检测结果复核情况看，定性检测结果符合率远高于定量检测结果符合率，而且各县市定量结果符合率差别较大，提示部分县市疾控中心实验室定量检测结果波动较大，定量检测质量还有待提高。ELISA法操作简单，在保持灵敏度和特异性的基础上，准确评价血清中的抗体水平，在麻疹病毒及其它病原微生物的血清学研究中具有明显优势[3]，考虑到本次定量结果复核采用县级结果必须在州级检测结果的±15%范围内才能判定为符合，且实际工作中ELISA试验易受试剂盒质量、不同实验室条件、操作等诸多因素的影响,导致结果的差异较大[13]，目前尚难得出全州定量检测结果复核符合率较定性结果符合率差的结论。楚雄州健康人群麻疹IgG抗体保持在较高水平，楚雄州州级和县级实验室在麻疹IgG抗体ELISA试验检测质量较高，各县（市）级疾病预防控制中心实验室均熟练掌握相关实验操作技能，实验重现性较好，但也能看出在结果判定方面，定性检测结果假阳性率远高于定量检测结果，但各县市定量检测结果与州级检测结果存在差异。在公共卫生工作中，疾病防控、抗体水平监测等很多方面均有赖于检验机构结果的准确性。因此，不断提高楚雄州各级疾病预防控制中心检验检测质量，做到准确可靠，对疾病防控与免疫规划工作起着重要作用。同时，麻疹IgG抗体水平高低是衡量健康人群免疫屏障牢固程度的指标，只有保证试验的可重复性、结果的可靠性,才能对人群免疫屏障的牢固程度作出正确的判断,从而准确预测人群麻疹流行强度,制定适宜的控制、消除麻疹策略，在这个方面，我们仍然有很多工作要做[13]。在实验室检测麻疹IgG抗体过程中，由于实验室检测的专业技术人员技术不一，血清样本的采集、储存、运输等过程存在不同的操作问题都有可能造成州级疾病预防控制中心复核结果存在差异。因此，为提高基层机构检测IgG抗体的准确性，州级疾病预防控制中心应该定期开展培训确保基层专业技术人员操作的规范性，要确保检测结果的可靠性就需要反复验证找到一个准确性高、操作简易，适用于基层疾病预防控制中心的标准。4结论州县两级实验室麻疹IgG抗体定性和定量两种检测方法的检测结果存在一致性，但一致性强度仅为中度。对比州、县两级实验室检测结果复核情况，定性检测结果符合率远高于定量检测结果符合率，各县市定量结果符合率差别较大，定量检测假阳性率低于定性检测。定量检测方法真实性较定性检测方法高，但定量检测方法仍然存在可重复性不好，复核结果差异较大的问题。故无论是定性还是定量，