微波辅助提取香橙皮渣中酚类化合物研究

绪论柑橘属科水果是世界上种植最广泛的植物之一，平均年产量约为1.02亿吨REF_Ref8313\r\h[21]。该部分涵盖柑橘、主要品种包括甜橙、柠檬与葡萄柚，传统柑橘类占总体产量的50%。橘中含有维生素E、抗坏血酸与膳食纤维等营养素，兼独特风味与营养价值，在鲜食与加工制品包括罐头，蜜饯及果酒等多种形式，但是在生产过程中会产生约原料总量40%-50%的果皮副产物。若未对这些富含生物活性物质的果皮进行资源化利用，不仅造成资源浪费，还将引发严峻的环境污染问题，这使得柑橘加工副产物的高值化利用成为当前研究热点。湖北宜昌秭归作为“中国脐橙之乡”，2023年秭归县夏橙栽培面积1866.6hm2，产量67200t，比2022年分别增长1.8%、17.8%REF_Ref13009\r\h[1]。秭归脐橙凭借独特的风味形成显著的市场优势，其产业化发展已成为区域经济的重要支柱。在深加工过程中，大量的果皮副产物没有被有效利用，按照常规的处理方式已废弃物填埋为主，这种粗放模式即导致生物活性成分的流失，又加重环境负荷。近几年研究表明，橙皮中富含酚类化合物等具有抗氧化，抗炎功能的活性成分，如：何雅静在对不同极性橘皮中多酚对小鼠溃疡性结肠炎实验中得ECP、WCP和TCP在缓解急性溃疡性结肠炎症状方面同样有效，其原因可能是柑橘皮提取物中含有多酚REF_Ref13208\r\h[4]本实验通过优化提取工艺旨在实现橙皮资源的高校利用，同时满足市场对天然酚类化合物的需求。当前多酚化合物提取技术主要包括溶剂提取法REF_Ref15618\r\h[6],超声波辅助提取法REF_Ref15618\r\h[6]，微波辅助提取法REF_Ref15618\r\h[6]，超临界流体提取法REF_Ref15618\r\h[6]。各方法特点鲜明提如：陈秋娟用溶液提取法等将马蹄皮粉碎后，用乙醇溶液浸提得到马蹄皮多酚的最佳提取工艺为乙醇浓度为80%，提取温度为80°C，浸提时间为20min，料液比为1∶60，其提取率为5.35%，但是试剂消耗量大，提取时间长，提取效率低等不可忽视的缺点REF_Ref15618\r\h[6]。茹月蓉等采用超声波辅助溶剂提取青冈栎果壳多酚，得出最佳提取条件为乙醇体积分数50%、提取时间25min料液比1:40（g/mL）、提取次数5次，此条件下的多酚得率最高为3.13%REF_Ref15618\r\h[6]。马景蕃等利用超临界CO2萃取技术，通过响应面法进行白背天葵多酚的提取工艺优化，并与前人所使用的有机溶剂法和超声辅助萃取法进行比较，确定了最佳提取工艺为：萃取压力35MPa，萃取时间2h，萃取温度40°C和CO2流量20L/h，多酚提取得率为5.32%REF_Ref15618\r\h[6]。酶解法的优点是反应条件温和，不需要耐高温或耐高压及耐腐蚀的设备，副反应少，但反应时间过长是此法的缺点REF_Ref15618\r\h[6]。ZILL-E.Humma等研究微波萃取方法证明了用微波辅助提取最方法更高效。综上所述，对比以上实验方法，因此该实验使用微波辅助提取法为最优提取法，通过单因素实验考察乙醇浓度、橙皮粉与溶剂的料液比、微波时间、微波温度进行了响应面分析REF_Ref15618\r\h[6]。1.材料和方法1.1主要材料与仪器原料：香橙源自湖北秭归，脐橙之乡。当地采摘该实验所用主要仪器和试剂参照表1.1与表1.2所示表1.1试剂表Table1.1Tableofreagents添加剂种类级别生产厂商福林酚试剂500上海蓝季生物有限公司焦性没食子酸100天津市百世化工有限公司碳酸钠500天津市凯通化学试剂有限公司无水乙醇500福晨（天津）化学试剂有限公司表1.2仪器表Table1.2Tableofinstruments仪器名称仪器型号生产厂商101-2AB电热鼓风干燥箱101-2AB天津市泰斯特仪器有限公司天平（感量为0.1mg）/奥豪斯国际贸易有限公司800C粉碎机800c永康市红太阳机电有限公司电动验粉筛YYSF30×8杭州大吉光电仪器有限公司微波消解仪APL/Touchwin2.0奥普乐恒温水浴锅HH-2国华电器有限公司滤纸/抚顺市民政滤纸厂台式低速离心机3-5N湖南恒诺仪器设备有限公司紫外光可见光光度计UV-5860S尤里柯上海有限公司1.2试验方法1.2.1香橙皮渣的预处理洗净后放置于50°干燥箱干燥除去脐橙皮内部缨络果实剥皮洗净后放置于50°干燥箱干燥除去脐橙皮内部缨络果实剥皮清洗漂水 存在干燥器中备用得到粉碎的橙皮粉末存在干燥器中备用得到粉碎的橙皮粉末粉碎过50目筛图1.2.1橙皮原材料预处理流程图Fig1.2.1Flowchartoforangepeelrawmaterialpretreatment1.2.2酚类化合物提取和测定标准溶液的配置用钥勺精准称量没食子酸0.50g，定容至100mL容量瓶中，再取此液1mL稀释至100mL，得浓度0.05mg/mL的标准溶液，精准量取0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、置于10mL的离心管中，对应的没食子酸含量分别为5、15、25、35、45ug，分别加入3mL蒸馏水、0.25mL的福林酚、1min后加入20%（w/v）Na2CO3溶液0.75mL混匀，用蒸馏水定容至5mL，混合液于75℃恒温下水浴10min后，立即冰浴，离心（4000r/min，20min），于760nm波长测定吸光度值，以蒸馏水为对照REF_Ref13685\r\h[12]。使用Origin软件分析数据，以吸光度作为纵轴变量，没食子酸的浓度作为横轴变量，构建得到一元回归的线性方程。取5毫升蒸馏水对溶液进行定容，随后将混合物置于75摄氏度的恒温水浴锅内，持续加热10分钟。实验方法流程和测定波长的选择取5毫升蒸馏水对溶液进行定容，随后将混合物置于75摄氏度的恒温水浴锅内，持续加热10分钟。加入0.25ml的福林酚，1min后加入20%（w/v）Na2CO3溶液0.75ml混匀加入0.25ml的福林酚，1min后加入20%（w/v）Na2CO3溶液0.75ml混匀在标准溶液中分分别加入3mL蒸馏水别加入 760nm波长测定吸光值立即冰浴离心（4000/min,20min）760nm波长测定吸光值立即冰浴离心（4000/min,20min）图1.2.2测定多酚类化合物波长流程图Fig1.2.2Flowchartfordeterminingthewavelengthofpolyphenoliccompounds溶液配制完成后，使用分光光度计进行光谱扫描，研究发现，在360-800纳米波长区间内，溶液于760纳米处展现出显著的吸收特性，鉴于此，760纳米被确定为后续实验的测量工作波长。标准曲线的制定配制该溶液在760nm的工作波长下测得吸光度REF_Ref14910\r\h[7]。以吸光度A为纵坐标轴，没食子酸浓度为横坐标轴，利用origin测得出标准曲线（见图表1.2.3)，y=0.0207x+0.0043，R2=0.9992。图1.2.3没食子酸标准曲线Figure1.2.3Standardcurveofgallicacid总多酚提取计算通过计算公式，得到香橙多酚提取率:脐橙多酚提取率（%）=c×式中：c测得香橙样品数据中标准曲线所得多酚浓度mg/MLM为香橙样品质量gm样品提取含率百分率%V为香橙提取率总体积mlK为稀释倍数2试验方法设计2.1单因素试验设计本研究以香橙粉为研究对象，采用单因素实验设计，通过控制变量法考察不同工艺参数对活性成分溶出特性的影响。对比料液比、乙醇体积分数、微波时间、微波功率四个单因素对香橙皮渣中酚类化合物提取率的影响。在乙醇体积分数、料液比为1：25的固定条件下REF_Ref14910\r\h[7]，分别设计在乙醇体积分数浓度为30%、40%、50%、60%、70%、五个条件下对酚类化合物提取率的影响；在料液比1：15、1：20、1：25、1：30、1：35，五个条件下对酚类化合物提取率的影响；在微波时间1min、2min、3min、4min、5min，6min五个条件下对酚类化合物提取率的影响；在微波功率300w、400w、500w、600w、700w，五个条件下对酚类化合物提取率的影响。2.2响应面试验设计本研究通过前期单因子实验数据解析，筛选出对植物多酚类活性成分提取效能具有统计学意义的显著效应（P<0.05）的三个关键自变量。为优化超声辅助提取技术的工艺参数，实验设计采用Box-BehnkenDesign（BBD）响应曲面法，以总多酚得率作为核心评价指标（Y），构建包含三个考察因子（X₁-X₃）、各设置三个梯度水平（-1,0,+1）的因子矩阵。该实验方案严格遵循中心复合设计原理，通过建立多元二次回归模型，旨在精确解析各工艺参数间的交互作用机制，最终确定使目标化合物提取效率最大化的最优参数区间。表3.2.1响应面试验因素水平设计Table3.2.1Responsesurfacetestfactorleveldesign水平因素A乙醇浓度（%）B料液比（g/ml）C微波时间（min）-1401：2030501：2541601：3052.3验证试验设计对2.00g的香橙粉末进行研究设计并实施了三组独立重复试验，旨在系统验证响应曲面法优化所得工艺参数的可靠性与适用性。3.实验结果与分析3.1单因素实验的结果与分析3.1.1乙醇浓度对多酚提取率的影响实验结果表明，在固定其他参数的条件下，乙醇体积分数的变化对香橙果肉内多酚类物质的溶出特性具有显著调控作用。如色谱分析数据所示（详见图1(a)），当乙醇浓度由50%增加至70%时，目标成分的提取率呈现明显上升趋势。这一现象证实了在单因素控制实验中，溶剂极性参数的调整是影响植物次级代谢产物传质过程的关键要素，其作用机制可能与不同极性溶剂的分子渗透效率及细胞壁破壁效果密切相关。本研究数据表明，乙醇溶剂浓度梯度变化对植物活性成分的溶出特性具有显著影响。如图3所示，当乙醇浓度由40%（v/v）逐步提升至60%（v/v）时，目标产物的得率呈现规律性递增，最高达到18.75mg·g⁻¹。乙醇浓度在60%至70%阶段，随着乙醇浓度的增加反而不利于多酚的提取，可能的原因是乙醇浓度高有利于多酚化合物类物质的提取，但浓度达到60%之后，部分脂溶性物质的提取率就会提高，乙醇体积分数对脐橙皮多酚含量的影响由于乙醇浸提的选择性好，对植物细胞的穿透能力强，浸出率高，提取时间短，溶解出的杂质少，提取物不易霉变，且乙醇毒性小，因此，参照有关文献REF_Ref13757\r\h[10]，并在预备实验的基础上选用乙醇作为提取溶剂。又由于高温日照均不利于多酚的稳定REF_Ref13812\r\h[11]，因此本研究采用常温避光提取。综上所得，乙醇浓度的最优条件是50%。图1乙醇体积分数对香橙皮多酚含量的影响Fig.1Effectofethanolconcentrationonextractionrateofpolyphenolsfromnavelorangepeel3.1.2料液比对多酚提取率影响本研究采用单因素实验设计，系统考察了物料与溶剂比例对柑橘类原料中酚类成分溶出效率的作用规律。以体积分数60%（v/v）的乙醇溶液作为提取介质，在恒温条件（25±1℃）下进行避光浸提处理，总时长设定为180分钟，该工艺参数系根据预实验结果并参照标准方法（GB/T22244-2008）优化确定。实验数据显示（图2），随着溶剂体积的增加，脐橙粉末中总多酚得率呈现显著上升趋势，当固液比达到1:25时，可以发现当液料比逐渐上升，提取液中多酚化合物的含量也成趋势上升。经实验数据分析可知，物料与溶剂配比参数对植物多酚溶出过程存在显著影响。当固液比调整至1:25时，目标活性成分的得率呈现最优值，值得注意的是，随着溶剂体积继续增大至1:30时，提取物收率出现显著负向变化趋势。本研究结果表明，在固液比参数优化过程中存在明显的剂量效应阈值，当溶剂体积超过1:25临界点时，溶液体系的饱和度反而抑制目标成分的持续溶。根据浓度梯度是提取的动力，因而提高料液比对提取有正面影响REF_Ref14910\r\h[7]。随料液比增加有助于多酚提取，但逾其上限后，进一步提升不再增效单因素料液比数值时，测得多酚化合物提取率效果都不佳。所以进行单因素实验分析并考虑到其它因素时，可以得出该实验单因素最佳条件料液比确定为1∶25左右。图2料液比对香橙皮多酚含量的影响Fig.2Effectofmaterial-to-liquidratioonextractionrateofpolyphenolsfromnavelorangepeel3.1.3微波时间对多酚提取率的影响图3将60%乙醇体积分数作为提取剂，以体积分数60%（v/v）的乙醇溶液作为提取介质，在恒温条件（25±1℃）下进行避光浸提处理，总时长设定为180分钟，该工艺参数系根据预实验结果并参照标准方法（GB/T22244-2008）优化确定。伴随着微波时间的逐步增加，提取液中多酚提取率也在逐步增加。研究结果显示，在微波作用下的2至6分钟内，酚类化合物的含量峰值出现在4分钟。具体而言到4分钟时，酚类化合物的提取效率最高。然而，一旦微波作用时间超过某一临界值，在4分钟后，提取效率开始呈现下降趋势。尽管延长微波时间有助于提升多酚化合物的提取，但当达到特定极限时，即使继续增加单因素的微波时间，对提高多酚化合物的提取率也收效甚微。所以进行单因素实验分析并考虑到其它因素时，可以得出该实验单因素最佳条件为微波时间为4min。图3微波时间对香橙中多酚含量的影响Figure3:Theeffectofmicrowavetimeonpolyphenolcontentinnaveloranges3.1.4微波功率多多酚提取率的影响图4将60%乙醇体积分数作为提取剂，以体积分数60%（v/v）的乙醇溶液作为提取介质，在恒温条件（25±1℃）下进行避光浸提处理，总时长设定为180分钟，该工艺参数系根据预实验结果并参照标准方法（GB/T22244-2008）优化确定。伴随着微波功率的上升，酚类化合物的提取率多酚也在上升。依据实验结果分析，在微波功率设定于450W至600W区间内，当功率达到500W时，实现对酚类化合物最高提取效率。然而，值得注意的是，一旦功率提升至500W以上，酚类化合物的提取效率呈现出先增后减的趋势。依据梯度表所示，提升微波功率展现出积极的效应于提取过程中。提升微波功率能促进酚类化合物的提取效率，然而，一旦功率达到500W，继续增加微波作用时间对提高提取率的作用有限。由结果分析并考虑到最佳提取功率，可将微波功率确定为500w左右，这样提取脐橙中酚类化合物含量达到最佳值。图4微波功率对香橙中多酚含量的影响Figure4:Theeffectofmicrowavepoweronpolyphenolcontentinnaveloranges3.2响应面试验的结果与分析依据实验可知单因素试验的结果，对酚类化合物提取率即确定响应值（Y）最大影响的三个因素，为乙醇浓度（A）、料液比（B）微波时间（C），通过研究三因素三层级的响应面法设计实验，共执行17次试验点以求得最优参数组合。利用DesignExpert实验结果可以得出酚类化合物提取率含量的二次多项式回归线性方程：Y=20.84+0.74A-0.69B+0.075C+0.32AB-0.100AC-0.15BC-3.33A2-2.18B2-1.16C2，R2=0.9873。表1响应面试验设计与结果Table1Responsesurfacetestdesignandresults试验号乙醇浓度/%（A）料液比/（g/ml）（B）微波时间/min（C）多酚提取率/(mg/g)（Y）1401：20415.52601：204163401：304144601：30415.85401：253156601：253177401：255158501：25516.69501：20317.610501：3031611501：20518.412501：30516.213501：25420.514501：25420.715501：2542116501：2542117501：254213.2.1回归模型建立与方差分析表2和表3是由DesignExpert分析而得的结果。F值和P值可检验二次多项式方程各因素的显著性和相互作用REF_Ref13685\r\h[12]。根据表2得出，模型的F=60.26（P<0.0001）表明模式具有极显著的意义。结果显示，本模型与实验结果符合良好，其误差主要来自于随机误差。模型交互项AB/AC/BC均P>0.05，表明响应面实验中响应值交互项均无影响作用，所以对于单因素A（乙醇浓度）,B（料液比）,C（微波时间）而言，其中响应面值存在变量的是具有极显著影响变化的0.01对于二次项模型A2、B2、C2，存在响应值变量的变化，此变化显示出极显著影响，其统计显著性水平小于0.01。通过响应面分析，揭示了各因素对响应值具有影响，且此影响并非呈现单一线性模式。此时对比F值可知，单因素对响应值酚类化合物提取率的影响大小为乙醇浓度（A）>料液比（B）>微波时间（C），根据分析结果可知，影响该实验提取酚类化合物的主要因素是乙醇浓度。根据表3数据分析可得，该模型具有优异的统计特性：决定系数R2=0.9873，表明模型对数据变异的解释度极高，校正决定系数R2Adj=0.9709与育才决定系数R2Pred的差值仅为0.1427，二者数值相近并且均处于高位，证实模型既能有效解释实验数据又具备良好预测能力。回归方程的变异系数（C.V.%）为2.39%，显示实验数据离散度较低，而22.694的精密度值（AdeqPrecision）显著高于基准值4，进一步验证了模型参数的可靠性。综合各项指标分析，该数学模型不仅具有统计学显著性，更能准确表征香橙皮渣酚类物质提取过程的工艺特征，适用于后续工艺参数的优化研究可以利用这个模型对香橙皮渣中酚类化合物的提取工艺进行了优化REF_Ref13685\r\h[12]。表2方差分析结果Table2Analysisofvarianceresults方差来源平方和自由度均方F值P值显著性模型94.48910.5060.26<0.0001**A4.3514.3524.980.0016**B3.7813.7821.700.0023**C0.04510.0450.260.6269-AB0.4210.422.430.1634-AC0.04010.0400.230.6464-BC0.09010.0900.520.4956-A246.76146.76268.41<0.0001**B220.06120.06115.12<0.0001**C210.88110.8862.45<0.0001**残差1.2270.17失拟项1.0130.346.340.0533-纯误差0.2140.053总和95.7016标注说明：单个星号(*)代表在0.05显著性，(**)表示在极显著，(-)则代表不显著。表3误差统计分析Table3Errorstatisticalanalysis统计项目统计值Std.Dev.0.42Mean17.49变异系数（C.V.%）2.39PRESS16.45R20.9873R2Adj0.9709R2Pred0.8281精密度（AdeqPrecision）22.6943.2.2响应面图和等高线分析三维响应面图是由各个因素和响应值组成的表面关系图形，它能被直接用来判断各个变量因子间的相互作用对响应值的影响趋势和响应值的变化范围REF_Ref27350\r\h[13]。曲线坡度愈大，则反映其对反应值的影响愈大，轮廓曲线愈像椭圆形，则表示两者间的相互作用愈明显REF_Ref14227\r\h[14]。根据图4和图5的解析结果，实验数据的可视化呈现揭示了明显的拱形结构特征。进一步对响应曲面形态进行定量考察发现，其分布规律呈现非均匀隆起现象。在特定参数区间内，数据分布曲线上存在明显的极值点，该特征反映出关键变量对系统输出指标具有决定性作用。根据图中表示，相应面曲面越陡，等高线越密集REF_Ref14227\r\h[14]。根据响应面法实验数据可视化分析结果（图5）显示，各工艺参数对酚类物质提取效率的影响呈现显著差异性。从三维响应曲面特征来看，乙醇浓度（A）的曲率变化较料液比（B）更为明显，实验数据表明当乙醇浓度在设定范围内波动时，其对总酚得率产生变异系数，而料液比（B）的调控则展现出更强的提取效能，其单因素作用强度较乙醇浓度提升。值得注意的是，微波处理时间（C）作为热力学参数，其响应曲面的斜率特征显示该因素对提取过程的影响具有滞后效应，但通过正交对比发现其主效应值仍比料液比（B）高。进一步采用轮廓图形态分析显示，AB、AC、BC三组双因素交互作用的椭圆形等高线长轴比均小于一定的数值，结合方差分析表（表2）中交互项P值均>0.05的统计学特征[14]，证实各工艺参数间的协同效应对总酚得率未产生显著性影响（p<0.01）。该研究结论为优化多酚提取工艺提供了重要的理论依据。图4各因素交互作用对香橙皮渣酚类化合物提取率的影响Fig4:TheInfluenceofInteractionofVariousFactorsontheExtractionRateofPhenolicCompoundsfromFragrantOrangePeelResidue图5各因素交互作用对香橙皮渣酚类化合物提取率的影响Fig5:TheInfluenceofInteractionofVariousFactorsontheExtractionRateofPhenolicCompoundsfromFragrantOrangePeelResidue3.3验证试验的结果与分析基于响应曲面法（RSM）的优化研究结果表明，柑橘果皮废弃物中多酚类活性成分的最佳提取条件为固液比1:25。为验证模型可靠性，取（2.00±0.05）g干燥试样开展验证实验，经三次平行测定显示实际得率与预测值的相对误差小于3%（具体数据详见表4），该结果证实所建数学模型具有显著的统计学意义（P<0.05）。根据表4分析试验结果，可以确定在最佳工艺固定条件下，验证的3个实验结果均相近，所以可以得出在提取香橙皮渣中酚类化合物的提取率平均为20.58mg/g，0.27%的平均相对偏差，可以证明微波辅助提取香橙皮渣中酚类化合物是有效且可行的。表4验证试验结果分析Table4Analysisofverificationtestresults试验号吸光度提取率/(mg/g)平均值/(mg/g)相对平均偏差/%10.041320.6920.581.7220.041521.0030.040920.05结论本研究基于福林-肖卡比色法建立柑橘果皮残渣中酚类物质的定量分析体系。以标准物质没食子酸为参照物，通过紫外分光光度法绘制校准曲线，构建线性回归模型（R²>0.99），据此实现生物活性成分的精准定量。实验设计采用单变量分析法，系统考察溶剂极性（乙醇体积分数30-70%）、固液比（1:15-1:35g/mL）、辐照时长（2-6min）及微波强度（300-700W）四个独立变量对提取效率的影响规律，通过方差分析筛选出三个关键工艺参数。基于中心复合设计原理，构建三因子三阶次响应面模型，通过Design-Expert软件进行参数优化。实验结果表明：以体积分数50%的乙醇为溶剂，按照固液质量比1:25，在微波辅助下进行提取，总时长设定为4分钟，辐射功率500W时，总多酚得率达20.58±0.36mg/g，显著优于常规提取工艺（P<0.05）。验证试验显示该优化方案具有良好优化性。柑橘加工副产物中富含维生素C、酚类化合物等生物活性物质，其高效回收利用具有双重效益：一方面可满足大健康产业对植物源功能成分的持续需求，另一方面能显著降低柑橘加工业的生态足迹。本研究应用的微波辅助提取法显示了其优越性，体现在缩短了提取时间并减少了溶剂使用，与常规微波提取和其他提取技术相比。该工艺在功能食品开发（如天然抗氧化剂）、医药中间体制备（如抗炎活性成分）及绿色日化产品（如植物基防腐剂）等领域展现出产业化前景，为农副产品增值加工提供了创新解决方案也大大的解决了当地脐橙损耗问题。参考文献陈云龙，马娟，向长海，等．秭归夏橙2023年产销形势分析及对策[J]．中国果业信息，2024，41(02)，32-34．向长海．湖北：秭归县召开秭归脐橙品质提升大会[J]．中国果业信息，2023，40(09)：55．黄筱雄，张玉蓉．桔皮的综合利用[J]．中国林副特产，2004，(01)：40-42．KoiralaN,ThuanNH,GhimireGP,etal.Methylationofflavonoids:Chemicalstructures,bioactivities,progressandperspectivesforbiotechnologicalproduction[J].Enzymeandmicrobialtechnology,2016,86:103-116.江华明.微波辅助提取植物多酚技术的研究进展[J].现代食品,2022,28(08):33-36.DOI:10.16736/41-1434/ts.2022.08.009.崔艳平,聂玮,迟晓君,等.食品中多酚类化合物提取方法的研究进展[J].山东农业工程学院学报,2021,38(01):31-35.DOI:10.15948/ki.37-1500/s.2021.01.005.秦艳,冯卫华,白卫东,等.响应面分析法优化脐橙皮中多酚类物质提取工艺[J].食品工业科技,2012,33(20):231-236.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2012.20.067.汪建红，廖立敏，王碧．乙醇-硫酸铵双水相体系提取柠檬渣中总黄酮研究[J]．华中师范大学学报(自然科学版)，2013