2.2.2 单克隆抗体的制备课件高二下学期生物人教版选择性必修3

2.2.2《单克隆抗体的制备》参赛教师：王丽倩2026年道县优质教学资源评选活动人教版生物高二年级选择性必修三目标导学目标010203理解杂交瘤细胞增殖与单克隆抗体的特性分析单克隆抗体制备的两次筛选逻辑，培养实验分析能力了解单克隆抗体在实际生产医疗中的应用单克隆抗体的制备——早期获得抗体的方法及缺陷不能无限增殖产生大量抗体动物体内抗原刺激浆细胞多种抗体筛选单一B细胞增殖分化抗体不纯缺点：制备的抗体一般为多克隆抗体，产量低、纯度低，特异性差。抗原不纯传统抗体制备方法及缺陷单克隆抗体大量制备单一抗体的思路：一个B淋巴细胞克隆细胞群抗体单克隆抗体1、科学家发现：1)体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上

2)每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体如何获得大量、单一的抗体?2、需解决问题：3、遗憾：

体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖如何解决这一难题?【资料】1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒在前人工作的基础上，充分发挥想象力，设计了一个极富创造性的实验方案：单克隆抗体为何不使用浆细胞与骨髓瘤细胞融合呢？动物细胞融合杂交细胞动物细胞培养单克隆抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体杂交瘤细胞既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体单克隆抗体的制备注射特定抗原从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞的培养小鼠脾脏获取多种已免疫的B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合多种细胞获得产生特定抗体的B淋巴细胞阶段一：动物细胞融合【思考1】只考虑两两融合，B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经诱导融合后，培养基中共出现几类细胞？其中融合的细胞有几类？阶段二：筛选杂交瘤细胞单克隆抗体的制备【思考2】①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。如何制备培养基，筛选出杂交瘤细胞呢？思考：只考虑两两融合，B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经诱导融合后，培养基中共出现几类细胞？其中融合的细胞有几类？阶段二：筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞（多种）第一次筛选B细胞自身融合未融合的B淋巴细胞骨髓瘤细胞自身融合未融合的骨髓瘤细胞B1-瘤B2-瘤B3-瘤单克隆抗体的制备【思考1】只考虑两两融合，B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经诱导融合后，培养基中共出现几类细胞？其中融合的细胞有几类？阶段二：筛选杂交瘤细胞单克隆抗体的制备【思考2】①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。如何制备培养基，筛选出杂交瘤细胞呢？阶段二：筛选杂交瘤细胞（第一次筛选）单克隆抗体的制备【资料2】筛选出杂交瘤细胞方法？培养基中加入氨基喋呤（HAT选择培养基）B淋巴细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡骨髓瘤细胞及同型融合细胞不能合成DNA，死亡杂交瘤细胞能无限增殖，生长①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。第一次筛选可以得到所需要的杂交瘤细胞吗？二单克隆抗体及其应用将这些杂交瘤细胞进行培养并稀释阶段三：筛选分泌专一抗体的杂交瘤细胞（第二次筛选）二单克隆抗体及其应用将这些杂交瘤细胞进行培养并稀释稀释到之后将培养液滴入96孔板的每个孔中，每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞。阶段三：筛选分泌专一抗体的杂交瘤细胞（第二次筛选）二单克隆抗体及其应用阶段三：筛选分泌专一抗体的杂交瘤细胞（第二次筛选）二单克隆抗体及其应用阶段三：筛选分泌专一抗体的杂交瘤细胞（第二次筛选）二单克隆抗体及其应用抗原1阶段三：筛选分泌专一抗体的杂交瘤细胞（第二次筛选）二单克隆抗体及其应用抗体检测呈阳性阶段三：筛选分泌专一抗体的杂交瘤细胞（第二次筛选）补充：若不是滴入每个孔中的不是一个杂交瘤细胞，可再进行多次稀释并检测！阶段四：动物细胞培养抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞体外培养体内培养(注射到小鼠腹腔内)单克隆抗体从细胞培养液中提取从小鼠腹水中提取优点：可大规模培养，大量生产缺点：需要人为控制培养条件，成本相对较高优点：易于控制培养条件，成本较低缺点：规模小，产量少——获得大量单克隆抗体单克隆抗体的制备培养杂交瘤细胞的方法有哪些？从哪里收集产物？方法的优缺点？单克隆抗体制备过程中两次筛选的比较项目第一次筛选第二次筛选筛选原因目的

筛选方法

筛选出杂交瘤细胞筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞用特定的选择培养基（HAT培养基）筛选：未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。克隆培养、抗体检测：用多孔细胞培养板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。诱导融合后得到的细胞中，除杂交瘤细胞之外，还有未融合的亲本细胞，也有融合的具有同种核的细胞【拓展】

抗体的人源化

利用小鼠获得的单克隆抗体，能直接用于人体吗？为什么？不能，单克隆抗体会被人体当做抗原，发生免疫反应。将非人源（如鼠源）抗体的关键功能区域移植到人类抗体框架中，以降低免疫原性并提高治疗效果。单克隆抗体第二次筛选杂交细胞杂交瘤细胞体外或体内培养第一次筛选骨髓瘤细胞

诱导融合分泌特异抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞群提取已免疫的B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术既能大量繁殖又能产生抗体注射抗原单克隆抗体制备的过程中，应用到的技术手段单克隆抗体的制备细胞膜的流动性细胞增殖小结：单克隆抗体制备过程相关知识点检测（1）该过程中应用到的技术_______________________________________（2）原理_______________________________________（3）注射特定抗原的目的______________________________________________（4）诱导融合的方法______________________________________动物细胞特有的诱导融合方法为_______________________（5）第一次筛选的目的______________________

第一次如何筛选___________________________

筛选原理____________________________________________________（6）杂交瘤细胞的特点__________________________________动物细胞融合、动物细胞培养细胞膜具有一定的流动性、细胞增殖用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法灭活病毒诱导法筛选获得杂交瘤细胞用特定的选择培养基进行筛选在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长既能迅速大量增殖，又能产生抗体（7）第二次筛选的目的________________________________________________如何筛选________________________________________________________选择抗体检测呈___性的杂交瘤细胞，即__________________________________（8）抗体检测原理_______________________________________（9）如何获取大量所需杂交瘤细胞__________________________________________（10）如何获取单克隆抗体①体外培养___________________________②小鼠腹腔内培养_________________________（11）单克隆抗体的优点_____________________________获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测（进行多次筛选）分泌的抗体能与特定的抗原结合抗原和抗体能够特异性结合(分子水平的鉴定）在体外条件下大规模培养（接种于培养液中）或注射到小鼠腹腔内增殖从细胞培养液中获取从小鼠腹水中获取能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备阳单克隆抗体制备过程相关知识点检测一、概念检测1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（

）A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要为了获得细胞产品，后者主要为了获得杂种植株C

2.