数字 PCR 操作技师考试试卷及答案

数字PCR操作技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.数字PCR的核心是将样本分配到______中进行单分子扩增。2.微滴式数字PCR依赖______技术实现样本分区。3.数字PCR中常用的荧光报告基团包括FAM、______等。4.样本制备时需避免______，防止抑制酶活性。5.数字PCR结果通常以______表示目标分子绝对数量。6.微滴生成后需确保微滴______，避免交叉污染。7.数字PCR退火温度一般根据______确定。8.微滴检测时，信号分为______和阴性两类。9.质量控制需设置______对照，排除试剂污染。10.芯片式数字PCR的分区依赖______技术。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.数字PCR与qPCR的核心区别是（）A.无需引物B.无需探针C.无需标准曲线D.扩增效率更高2.微滴生成的关键试剂是（）A.水相B.油相C.酶mixD.模板3.导致假阳性的常见原因是（）A.NTC无扩增B.引物二聚体C.模板浓度过高D.微滴破裂4.拷贝数计算基于（）A.阳性微滴比例B.Ct值C.扩增斜率D.标准曲线5.肝素会抑制（）A.DNA聚合酶B.荧光染料C.引物结合D.探针水解6.微滴数一般要求至少（）A.1000B.10000C.50000D.1000007.数字PCR属于（）A.相对定量B.绝对定量C.半定量D.定性8.延伸时间由（）决定A.模板长度B.退火温度C.酶浓度D.微滴数9.阳性微滴比例>80%会导致（）A.拷贝数低估B.拷贝数高估C.无影响D.结果不可靠10.微滴检测核心是区分（）A.荧光强度B.微滴大小C.模板浓度D.酶活性三、多项选择题（每题2分，共20分）1.数字PCR应用领域包括（）A.病原体检测B.拷贝数变异分析C.基因表达D.突变检测2.操作关键步骤包括（）A.样本制备B.微滴生成C.PCR扩增D.微滴分析3.质量控制措施有（）A.NTC对照B.阳性对照C.内参基因D.微滴计数4.导致结果偏差的因素（）A.模板降解B.微滴不均C.污染D.扩增效率低5.分区技术包括（）A.微滴式B.芯片式C.毛细管式D.平板式6.引物设计要求（）A.特异性高B.Tm值相近C.无二聚体D.长度18-25bp7.PCR抑制物包括（）A.腐殖酸B.肝素C.血红蛋白D.EDTA8.结果分析参数（）A.阳性微滴数B.总微滴数C.拷贝数/μLD.95%置信区间9.油相作用（）A.生成稳定微滴B.防交叉污染C.维持体系D.增强荧光10.数字PCR优势（）A.绝对定量B.高灵敏度C.抗抑制物D.无需标准曲线四、判断题（每题2分，共20分）1.数字PCR需依赖标准曲线定量。（）2.微滴数越多，定量准确性越高。（）3.抑制物会导致拷贝数低估。（）4.NTC无扩增即可保证结果准确。（）5.芯片式分区是随机的。（）6.扩增条件与qPCR完全相同。（）7.引物二聚体不影响结果。（）8.可检测单拷贝目标分子。（）9.微滴生成后需立即扩增。（）10.结果只能用拷贝数表示。（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述数字PCR基本原理。2.样本制备注意事项有哪些？3.数字PCR质量控制内容包括什么？4.微滴式与芯片式数字PCR的主要区别？六、讨论题（每题5分，共10分）1.NTC对照阳性时，如何排查并解决？2.如何判断数字PCR结果的可靠性？---答案部分一、填空题1.大量独立微反应单元（微滴/芯片孔）2.油包水微滴生成3.VIC（或HEX、JOE）4.PCR抑制物（腐殖酸、肝素等）5.拷贝数（拷贝数/μL）6.稳定（无破裂）7.引物Tm值8.阳性9.无模板（NTC）10.微流控芯片二、单项选择题1-5:CBBAA6-10:BBADA三、多项选择题1-5:ABCDABCDABCDABCDAB6-10:ABCDABCDABCDABABCD四、判断题1-5:×√√××6-10:××√√×五、简答题1.数字PCR将样本分配到大量独立微反应单元，使每个单元含0或1个目标分子；扩增后阳性单元发荧光，阴性无信号；利用泊松分布计算目标分子绝对拷贝数。2.①避免模板降解（低温保存）；②去除抑制物（纯化）；③控制模板浓度（阳性率10%-80%）；④防交叉污染（无酶耗材/超净台）。3.①NTC对照（排除污染）；②阳性对照（验证扩增）；③微滴数≥10000；④阳性率10%-80%；⑤95%置信区间判断可靠性。4.①分区：微滴式随机，芯片式固定；②通量：微滴式更高（2万+）；③成本：微滴式耗材贵，芯片式仪器贵；④灵活性：微滴式可调微滴数，芯片式固定分区。六、讨论题1.NTC阳性提示污染：①更换新试剂/耗材；②超净台操作+紫外线灭菌；③清洁仪器污