cMet阻断剂抑制产单核细胞李斯特菌胞内感染机制解析

c-Met阻断剂抑制产单核细胞李斯特菌

胞内感染机制解析

一、引言

1.1研究背景

产单核细胞李斯特菌(Listeriamonocytogenes,LM),作为一种革兰氏阳性兼性厌氧杆

菌，在环境中广泛存在，常寄生于土壤、水、植物以及动物肠道等。它堪称“冰箱杀手二能

在0-45℃存活，在冰箱冷藏条件下也不受影响，这使得许多冷藏食品成为了它的藏身之所，

像牛奶、乳制品、肉类、蔬菜、沙拉、海产品及冰淇淋等，都可能被其污染。

LM主要通过消化道感染人类，摄入被污染食物后，它会粘附并侵袭肠道上皮细胞。其表面的

内化素B(InternalinB,InIB)起着关键作用，In旧模拟肝生长因子或分散因子，与肠道上皮

表面的肝生长因子受体或分散因子受体(c-mesenchymal-epithelialtransitionfactor,c-

Met)结合，激发信号级联放大，诱导c-Met0链上酪氨酸残基转磷酸，从而侵入细胞内，

而肠道上皮细胞缺乏吞噬能力，使得LM能在其中长期生存并大量增殖。不仅如此，LM还能

引发细胞间感染，穿越肠道细胞进入血液，随血液循环扩散至全身各组织器官，引发多发性感

染。

LM感染人体后，健康成人个体可能仅出现轻微类似流感的症状，但新生儿、孕妇、免疫缺陷

患者等免疫力低下人群感染后症状往往较重，甚至会导致死亡。孕妇感染时，多在妊娠第26-

30周出现畏寒、发热、头痛、肌痛、关节痛、背痛等类似上呼吸道感染症状，严重时可导致

早产、死产或新生儿脑膜炎。新生儿感染分为早发型和迟发型，早发型在出生后即发病或出生

后2-5日内发病，常有血流感染表现，肝、脾、肺、肾、脑等脏器出现播散性脓肿或肉芽

肿，躯干及肢端皮肤有红丘疹；迟发型在出生两周后发病，主要表现为脑膜炎。免疫缺陷者感

染后则可能出现脑膜炎、脑干脑炎、脑脓肿等症状。据相关数据显示，食源性疾病死亡中近

30%是由李斯特菌病引起，即便LM菌株对多数广谱抗牛素敏感，李斯特菌病的死亡率依旧

居高不下。这一方面是因为多数抗生素对细胞内感染的病原菌作用有限，另一方面是宿主对

该菌的防御机制尚未完全明确。

面对LM感染导致的高致病率和高病死率，开发新型治疗策略迫在眉睫。鉴于c-Met在LM

胞内感染过程中发挥着重要作用，研究c-Met阻断剂对LM胞内感染的抑制作用及其机制，

不仅具有重要的理论意义，也为临床治疗李斯特菌病提供了新的方向和思路。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入揭示c-Mel阻断剂抑制产单核细胞李斯特菌胞内感染的具体机制。通过一系

列实验，明确c-Met阻断剂在细胞水平和动物模型中对LM胞内感染的抑制效果，并探究其

作用过程中相关信号通路的变化，为临床治疗李斯特菌病提供坚实的理论依据和全新的治疗思

路。

在理论层面，产单核细胞李斯特菌胞内感染机制复杂，涉及多个环节和多种分子的相互作

用。目前虽然对其入侵细胞的部分过程有了一定了解，但仍存在许多未知领域，特别是在宿

主细胞防御机制以及如何有效阻断感染途径方面，仍有待深入探索。研究c-Met阻断剂的作

用机制，育助于填补这一领域的理论空白，进一步完善对LM胞内感染机制的认识，为后续

研究提供新的视角和方向。

从实际应用角度看，李斯特菌病的高致病率和高病死率严重威胁人类健康，尤其是新生儿、孕

妇和免疫缺陷患者等高危人群。现有的抗生素治疗存在局限性，对于细胞内感染的病原菌效

果不佳，且长期使用抗生素还可能引发耐药性问题。因此，寻找新的治疗策略迫在眉睫。c-

Met阻断剂作为一种潜在的新型治疗手段，若能明确其抑制LM胞内感染的机制，有望为临床

治疗提供新的药物靶点和治疗方案，提高治疗效果，降低李斯特菌病的死亡率，具有重要的临

床应用价值和社会效益。

二、产单核细胞李斯特菌与c・Met相关理论基础

2.1产单核细胞李斯特菌概述

2.1.1生物学特性

产单核细胞李斯特菌是一种革兰氏阳性短小杆菌，其形态较为独特，菌体长度通常在0.5-

2RYI之间，宽度约为0.4-0.5pm,在显微镜下观察，常呈现出V字形或成对排列的状态，

偶尔也可见双球菌或丝状形态。它具备鞭毛，这一结构赋予了其一定的运动能力，不过在不同

温度下，其动力表现有所差异，20℃时动力较为明显，而37℃时动力则相对缓慢。值得注意

的是，产单核细胞李斯特菌一般不形成荚膜，但在含血清的葡萄糖蛋白陈水中培养时，却能够

形成黏多糖荚膜。

从培养特性来看，产单核细胞李斯特菌属于兼性厌氧菌，这意味着它在有氧和无氧环境中都能

够生存繁衍，且其营养要求并不苛刻，在普通培养基上就能良好生长。在血琼脂平板上，于

35℃条件下经过18-24小时的培养，可形成灰白色、直径约1-2mm的菌落，并且在菌落周

围会产生狭窄的溶血环。它具有独特的冷增菌特性，能够在4℃的低温环境下生长，这一特

性使其在冰箱冷藏条件下也能大量繁殖，成为“冰箱杀手”。在半固体培养基内，其生长状态呈

现出倒伞形，这也为其鉴定提供了一定的依据。

在生化反应方面，35℃培养时，产单核细胞李斯特菌在24小时内能够发酵多种糖类，如葡萄

糖、果糖、麦芽糖和水杨素等，发酵过程中只产酸不产气。同时，它的甲基红和V-P反应呈

阳性，触酶也为阳性，还能够水解精氨酸产生氨。但它不还原硝酸盐，不形成口引躲，不液化

明胶和凝固血浆，不分解尿素，却能水解七叶甘，有时还可产生硫化氢。此外，根据菌体及鞭

毛抗原的不同，产单核细胞李斯特菌可分为4个血清型。在抵抗力方面，它耐碱不耐酸，对

热较为敏感，加热至60・70℃,持续5・20分钟即可死亡，对一般消毒剂也较为敏感，70%

乙醇作用5分钟便能将其杀灭。

2.1.2致病机制

产单核细胞李斯特菌的致病过程较为复杂，涉及多个关键步骤，首先，当人体摄入被其污染的

食物后，细菌便会进入胃肠道，这是感染的起始部位。在胃肠道中，产单核细胞李斯特菌凭借

其表面的内化素B(InIB)与肠道上皮表面的肝生长因子受体(c-Met)特异性结合cIn旧模

拟肝生长因子的结构和功能，与c-Met的结合如同钥匙插入锁孔一般精准，这种结合能够激

活c-Met下游的一系列信号通路.

c-Met被激活后，其B链上的酪氨酸残基会发生转磷酸化，进而招募并激活一系列下游信号

分子，如生长因子受体结合蛋白2(GRB2)、GRB2相关结合蛋白1(GAB1)、磷脂酰肌

醇3激酶(PI3K)等。这些信号分子相互作用，形成复杂的信号级联放大反应，最终导致细

胞骨架的重排，使得细菌能够顺利侵入肠道上皮细胞内。一旦进入细胞，产单核细胞李斯特

菌会巧妙地逃避吞噬体的降解，它利用自身产生的李斯特溶素O(LLO)和磷脂酶等物质，破

坏吞噬体的膜结构，从而逃逸到细胞质中。在细胞质中，细菌找到了适宜的生存环境，开始

大量繁殖。

产单核细胞李斯特菌还具备在细胞间传播的能力。它通过表达ActA蛋白，利用宿主细胞的肌

动蛋白聚合机制，在细胞内形成肌动蛋白尾，推动细菌在细胞质中移动，直至接触到相邻细

胞。随后，细菌通过细胞间桥进入相邻细胞，继续进行感染和增殖，从而实现感染的扩散。

对于免疫力正常的人群，机体的免疫系统能够及时识别并启动T细胞介导的免疫应答,有效

地清除病原菌，因此可能不会出现明显的临床症状。然而，对于免疫力低下的人群，如新生

儿、孕妇、老年人以及免疫缺陷患者等，由于其细胞免疫功能不足，病原菌能够突破免疫防

线，进入血流，引发菌血症。菌血症发生后，细菌会随着血液循环播散至全身各个组织器

官，在大脑中可导致脑膜炎,脑炎等严重疾病，在孕妇体内则会通过胎盘屏障感染胎儿，引发

流产、死胎、新生儿菌血症或脑膜炎等，严重威胁母婴健康。

2.1.3临床感染现状及危害

产单核细胞李斯特菌引发的感染在临床上较为常见，且对不同人群的影响差异较大。它主要通

过食源性传播，人们摄入被污染的奶制品、生蔬菜、肉类、海产品等食物后，就有可能感染该

菌。此外，它还可以通过胎盘、产道垂直传播，母婴传播也是其重要的感染途径之一。

在健康成人个体中，感染产单核细胞李斯特菌后，通常仅会出现轻微的类似流感的症状，如低

热、头痛、肌痛、关节痛、背痛等，这些症状往往较为轻微，容易被忽视，且一般能够在短时

间内自行缓解。然而，对于新生儿、孕妇、免疫缺陷患者等免疫力低下人群，感染后的症状

则较为严重，甚至可能危及生命。据统计，全球每年约有数千人感染李斯特菌病，其中新生

儿李斯特菌病的死亡率可高达20%-50%。孕妇感染后，尤其是在妊娠晚期，李斯特菌可通

过胎盘感染胎儿，导致流产、早产、死胎等严重后果，约有20%-30%的孕妇感染病例会出

现这些不良结局。免疫缺陷患者感染后，如艾滋病患者、器官移植后长期使用免疫抑制剂的

患者等，常表现为脑膜炎、败血症等重症，死亡率也较高，可达30%―70%。

李斯特菌病在全球范围内均有发生，不同地区的发病率和流行情况有所差异。在一些发达国

家，由于冷链食品的广泛消费，李斯特菌病的发病率相对较高。例如，美国每年约有1600

人感染李斯特菌病，其中约有260人死亡。在我国，虽然李斯特菌病的发病率相对较低，但

随着人们生活水平的提高和饮食习惯的改变，以及对该筐检测技术的不断完善，近年来病例报

告数也呈上升趋势o产单核细胞李斯特菌感染不仅会给患者的身体健康带来严重危害，还会

给家庭和社会带来沉重的经济负担，包括医疗费用、患者康复期的护理费用以及因患者患病导

致的劳动力损失等。因此，深入研究产单核细胞李斯特菌的感染机制和防治策略具有重要的

现实意义。

2.2c・Met相关知识

2.2.1c-Met结构与功能

c-Met,即细胞间质-上皮转化因子，是一种由MET原癌基因编码的受体酪氨酸激酶

(RTK),在多种人类肿瘤中过表达，其配体为肝细胞生长因子(HGF)。c-Met最初在体

内被翻译为一条单链前体蛋白，经过翻译后修饰，成为由二硫键连接的成熟受体，由胞外。

链和跨膜P链组成异源二聚体。

跨膜链结构复杂，包含多个重要结构域。其中，SEMA结构域是HGF与c-Met直接结合的

位点，对二者的结合起着关键作用；PSI结构域能够稳定SEMA结构域与HGF的相互作用，

增强结合的稳定性o四个IPT结构域在维持c-Met的整体结构和功能方面也具有重要意

义。跨膜区将c-Met锚定在细胞膜上，保证其在细胞信号传导中的正确定位。膜旁结构域

的Ser-975和Tyr-1003位点在c-Met负调控中发挥着不可或缺的作用，可调节c-Met的

活性。酪氨酸激酶结构域则是c-Met发挥激酶活性的核心区域，当HGF与c-Met结合

时，该区域的Tyr-1234和Tyr-1235会发生自动磷酸化，进而导致C末端对接位点Tyr-

1349和Tyr-1356的自动磷酸化，为下游信号分子的募集提供结合位点。

在生理状态下，c-Met主要在上皮细胞中表达，是一种与生长、运动和浸润相关的多功能调

节因子。c-Met/HGF信号转导在胚胎发育、组织修复和伤口愈合等过程中起着至关重要的作

用。在胚胎发育阶段，c-Met信号通路参与细胞的迁移、增殖和分化，对器官的形成和发育

有着关键影响。在组织修复和伤口愈合过程中，Met被激活，促进细胞的增殖和迁移，加

速受损组织的修复。然而，在肿瘤发生发展过程中，c-Met基因的突变、扩增和过表达较为

常见，导致c-Met信号通路异常激活。这种异常激活会促使肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移，

在多种恶性肿瘤，如肝癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌和胃癌等的发

生发展中发挥重要作用。例如，在非小细胞肺癌中，c-Met基因的异常改变，如外显子14

跳跃突变、基因扩增等，可导致c-Met蛋白的持续激活，进而促进肿瘤细胞的生长和转移。

2.2.2c-Met信号通路

c-Met信号通路的激活起始于HGF与c-Met的结合。HGF是目前发现的c-Met的唯一配

体，属于纤维蛋白溶酶原家族，主要表达于间质细胞。成熟的HGF由一条a链和一条0链

通过二硫键连接而成异源二聚体，。链包含一个N-末端的发夹结构域和四个Kringle结构

域，是发挥其生物学功能所必需的；B链形成一个缺乏催化活性的丝氨酸蛋白酶模拟域，是c

-Met的结合位点。当HGF与c-Met结合后，会诱导c-Met形成二聚体。

c-Met二聚化后，位于激酶催化区域活化环上的残基Y1234和丫1235发生自身磷酸化,紧

接着位于C端尾部的残基Y1349和Y1356也发生磷酸化。这些磷酸化位点能够募集一系列

下游信号分子，如生长因子受体结合蛋白2(GRB2)、GRB2相关结合蛋白1(GAB1)、

含Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)、磷脂酶Cy1(PLCY1).磷酯酰肌酿3激酶

(PI3K)、v-src肉瘤病毒癌基因同源物(SRC)、信号传导子和转录激活子-3

(STAT3)、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)等。这些信号分子相互作用，激活多条重要的下游

信号通路。

PI3K/Akt信号通路在细胞的存活、增殖和代谢等过程中发挥关键作用。PI3K被募集到c・

Met的磷酸化位点后，其催化亚基p110将磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)磷酸化为磷脂

酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3)0PIP3作为第二信使，能够招募并激活Akt蛋白。Akt通过

磷酸化多种底物，如糖原合成酶激酶3(GSK3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)等，

调节细胞的生长、存活和代谢。在肿瘤细胞中，PI3K/Akt信号通路的异常激活可促进肿瘤细

胞的增殖和存活，抑制细胞凋亡。

Ras/MAPK信号通路参与细胞的增殖、分化和凋亡等过程。当c-Met激活后，GRB2与c-

Met的磷酸化位点结合，并招募鸟甘酸交换因子SOS。SOS促进Ras蛋白上的GDP与

GTP交换，使Ras处丁激活状态。激活的Ras依次激活Raf、MEK和ERK等蛋白激酶，

形成级联反应。最终，ERK被激活后进入细胞核.磷酸化多种转录因子，如Elk-1、c-Fos

和c-Jun等，调节基因的表达，促进细胞的增殖和分化。在肿瘤发生发展过程中，

Ras/MAPK信号通路的异常激活可导致肿瘤细胞的过度增殖和恶性转化。

STAT3信号通路在细胞的生长、分化和免疫调节等方面发挥重要作用。c-Met激活后，

STAT3被招募到c-Met的磷酸化位点，并被磷酸化激活。激活的STAT3形成二聚体，进入

细胞核，与特定的DNA序列结合，调节相关基因的表达。例如，STAT3可调节细胞周期蛋

白D1(CyclinDI),B细胞淋巴瘤-2(Bel-2)等基因的表达，促进细胞的增殖和存活。

在肿瘤细胞中，STAT3的持续激活可导致肿瘤细胞的增殖、侵袭和免疫逃逸。

c-Met信号通路还与其他信号通路存在相互作用，形成复杂的信号网络。这些信号通路的异

常激活在肿瘤的发生、发展、转移以及对治疗的耐药性等方面都发挥着重要作用。

2.2.3c-Met与产单核细胞李斯特菌胞内感染的关联

产单核细胞李斯特菌能够巧妙地利用c-Met信号通路实现对细胞的侵入和感染，这一过程涉

及多个关键步骤和分子机制。当产单核细胞李斯特菌进入人体后，其表面的内化素B(InIB)

起着至关重要的作用。In旧的结构与肝生长因子(HGF)高度相似，这种相似性使得InIB能

够模拟HGF的功能，与肠道上皮细胞表面的c-Met特异性结合。InIB与c-Met的结合如

同精准的“分子对接”，二者的相互作用具有高度的亲和力和特异性。

InIB与c•Met结合后，会触发c-Met的激活。c・Met的激活过程表现为其p链上的酪氨酸

残基发生转磷酸化，这一磷酸化过程如同信号传导的“开关”，一旦开启，便会引发下游一系列

信号分子的募集和激活。生长因子受体结合蛋白2(GRB2)、GRB2相关结合蛋白1

(GAB1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)等信号分子迅速响应，被招募到c-Met的磷酸化位

点。这些信号分子相互协作，形成复杂的信号级联放大反应。PI3K被激活后，会催化磷脂酰

肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)转化为磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3),PIP3作为重要的

第二信使，进一步激活下游的蛋白激酶B(Akt)等分子，

在这一系列信号传导过程中，细胞骨架重排是关键环节。c-Met激活后的信号级联反应最终

作用于细胞骨架相关蛋白，导致细胞骨架发生重排。细胞骨架的重排使得细胞膜形成凹陷，

为产单核细胞李斯特菌的侵入提供了有利条件。细菌得以顺利进入细胞内，完成侵入过程。

进入细胞后，产单核细胞李斯特菌会利用宿主细胞的内环境进行生存和繁殖。它能够逃避吞

噬体的降解,通过表达李斯特溶素O(LLO)和磷脂酶等物质，破坏吞噬体的膜结构，从而逃

逸到细胞质中。在细胞质中，细菌找到了适宜的生存环境，开始大量繁殖。产单核细胞李斯

特菌还具备在细胞间传播的能力。它通过表达ActA蛋白，利用宿主细胞的肌动蛋白聚合机

制，在细胞内形成肌动蛋白尾，推动细菌在细胞质中移动，直至接触到相邻细胞。随后，细

菌通过细胞间桥进入相邻细胞，继续进行感染和增殖，从而实现感染的扩散。

c-Met在产单核细胞李斯特菌胞内感染过程中扮演着核心角色，它不仅是细菌侵入细胞的关

键靶点，其激活后的信号通路还为细菌的生存、繁殖和扩散提供了必要的条件。深入研究c-

Met与产单核细胞李斯特菌胞内感染的关联，对于揭示感染机制、开发新的治疗策略具有重要

意义。

三、c・Met阻断剂的研究现状

3.1c-Met阻断剂的分类及作用原理

3.1.1小分子MET激酶抑制剂

小分子MET激酶抑制剂作为c-Met阻断剂的重要类型，在抑制c-Met信号传导方面发挥着

关键作用，其作用机制主要是通过靶向c-Met受体激酶结构域的ATP结合口袋，抑制细胞

内酪氨酸激酶的磷酸化，从而有效阻断HGF/c-Met信号通路中的信号传导。当c-Met受体

激酶结构域的ATP结合口袋被小分子抑制剂占据时，ATP无法正常结合，酪氨酸激酶的磷酸

化过程就会受到抑制，进而阻断了下游信号通路的激活。这种抑制作用如同在信号传导的链

条上安装了一个“刹车”，阻止了信号的进一步传递，使得依赖c-Met信号通路的细胞增殖、

迁移、存活等生物学过程受到抑制。

根据药物的结构特征及结合方式，MET激酶抑制剂可进一步细分为三种类型。I型抑制剂属

于ATP竞争性抑制剂，在作用时，蛋白处于激活构象，即DFG-in构象，此时小分子处于U

型构象。根据是否和溶剂前沿的G1163作用，又可进一步细分为la型和lb型构象。la型

抑制剂为多靶点激酶抑制剂，它能够同时结合包括MET-1230和G1163在内的多个位点。

然而，G1163位点与ALK-G1202和ROS1-G2032结构相似，这使得Ia型抑制剂在作用

过程中容易弓I发脱靶效应。一旦发生脱靶，抑制剂就可能会对其他非目标激酶产生作用，从

而降低针对MET的抑制效果。例如，克嘤替尼作为la型抑制剂的代表药物，虽然对

ALK,ROS1和MET等酪氨酸激酶都有抑制作用.但由于其选择性较低，在治疗过程中可能

会出现一些脱靶效应导致的不良反应。1b型抑制剂则是高选择性激酶抑制剂，在目前MET

14号外显子跳跃突变NSCLC治疗领域中占据重要地位。与la型抑制剂不同，lb型抑制剂

沿着D1222、Y1230和R1208,进入溶剂可及区域，并且和丫1230形成更强的IT-开相互作

用。这种独特的结合方式使得lb型抑制剂具有更高的选择性，能够更精准地作用于MET靶

点，进而产生更强的MET抑制活性。像卡马替尼、特泊替尼、赛沃替尼、谷美替尼等都属于

lb型抑制剂。其中，赛沃替尼是我国自主研发的、具有全新结构的三氮嘤哌嗪类小分子c-

Met激酶抑制剂，在分子水平上，它对c-Met的抑制活性高、激酶选择性好、对激酶亲和力

强o赛沃替尼已于2021年6月22日在中国获得批准上市，用于含粕化疗后疾病进展或不耐

受标准含粕化疗的、具有MET14外显子跳跃突变的局部晚期或转移性NSCLC成人患者。

II型抑制剂同样是ATP竞争性多靶点抑制剂，这类抑制剂不仅能够占据ATP结合位点，还

能结合ATP口袋中激酶的非活性构象。这种双重结合模式使得H型抑制剂在抑制c-Met信

号通路时具有独特的优势。例如，卡博替尼、格来替尼等作为n型抑制剂的代表药物，它们

能够通过与ATP结合位点以及激酶的非活性构象结合，更有效地抑制c-Met的活性。m型

抑制剂属于变构抑制剂/非ATP竞争性抑制剂，其作用位点与ATP结合位点完全不同，它结

合在ATP口袋外的变构位点°当DI型抑制剂与变构位点结合后，会引起c-Met受体激酶结

构域的构象发生变化，从而间接影响ATP的结合和酪氨酸激酶的磷酸化，达到抑制Met

信号传导的目的。Tivantinib是m型抑制剂的代表药物，它通过作用于变构位点，为抑制c-

Met信号通路提供了一种新的策略。

3.1.2抗c-Met受体单克隆抗体

抗c-Met受体单克隆抗体是另一类重要的c-Met阻断剂，其作用原理主要是通过阻断配体-

受体结合，从而抑制c-Met信号传导。c-Met信号通路的激活依赖于配体HGF与c-Met

受体的特异性结合。抗c-Met受体单克隆抗体能够特异性地识别并结合c-Met受体，其结

合位点通常位于c-Met受体与HGF结合的关键区域。当抗体与c-Met受体结合后.就像

在两者之间设置了一道“屏障”，阻止了HGF与c・Met受体的结合.这种阻断作用使得c-

Met受体无法被激活，下游的信号通路也就无法启动，从而抑制了依赖c-Met信号通路的细

胞生物学过程，如细胞增殖、迁移和侵袭等O

以Sym015为例，这是一种双特异性抗c-Met单克隆抗体。它由两种单克隆抗体组成，这

两种抗体能够分别与c-Met受体的不同表位结合。这种双特异性的结合方式使得Sym015

与cMet受体的结合更加紧密和稳定，从而增强了对cMet信号通路的抑制作用。在临床

前研究中，Sym015表现出了显著的抗肿瘤活性。在多种肿瘤模型中，Sym015能够有效地

抑制肿瘤细胞的生长和迁移，其作用机制就是通过阻断HGF与c-Met受体的结合，抑制c・

Met信号通路的激活。

Amivantamab(JNJ-372)也是一种具有代表性的抗c-Met受体单克隆抗体，它不仅能够阻

断HGF与c-Met受体的结合，还具有其他独特的作用机制。Amivantamab能够诱导c-

Met受体的内吞和降解，进一步降低细胞表面c-Met受体的表达水平。这种双重作月机制使

得Amivantamab在抑制c-Met信号通路方面具有更强的效果。在临床研究中，

Amivantamab对于一些携带c-Met异常的肿瘤患者显示出了较好的治疗效果，为这类患者提

供了新的治疗选择。

3.2c-Met阻断剂在其他领域的应用及效果

3.2.1肿瘤治疗领域

c-Met阻断剂在肿瘤治疗领域展现出了显著的应用价值，尤其是在多种实体瘤的治疗中取得

了一定成果。在非小细胞肺癌(NSCLC)治疔方面，c-Met基因的异常改变，如外显子14

跳跃突变、基因扩增等，在NSCLC的发生发展中起着关键作用。针对这些异常，c-Met阻

断剂成为了重要的治疗手段。以小分子MET激酶抑制剂为例，卡马替尼(Capmatinib)作为

一种口服的高度选择性的lb型MET抑制剂，在GEOMETRYmon。-1研究中表现出色。该

研究是一项前瞻性、非随机,开放标签的II期研究，共招募94例携带MET外显子14跳跃

突变的晚期或转移性NSCLC成人患者。经双盲独立审查委员会(BIRC)评估，卡马替尼一

线治疗的总缓解率为68%,先前接受过一种治疗方案的患者ORR为48%,先前经历过两种

以上方案的METex14患者ORR为41%,中位反应持续时间分别为12.6个月和9.7个月。

这表明卡马替尼无论对于初治还是经治的携带MET外显子14跳跃突变的NSCLC患者，都

能带来显著的治疗效果。特泊替尼(Tepotinib)同样是一种口服的高度选择性的lb型MET

抑制剂。在II期VISION试验中，该试验共纳入了152例MET外显子14跳读的晚期或转移

性NSCLC患者，每天给予Tepotinib(500mg/d)。独立审查委员会(BIRC)确定的未接受

过治疗的METex14NSCLC患者ORR为43%(95%CI,32-56),mDOR为10.8个月

(95%CI,6.9个月-NE)；经治的METex14NSCLC患者的ORR为43%(95%CI,33-

55),mDOR11.1个月(95%CI,9.5-18.5个月)。2021ELCC大会更新了VISIONII期

研究中队列A(MET14外显子跳跃突变人群)的疗效数据，在152例患者中，tepotinib治疗

的ORR达到44.7%,其中初治和经治患者的ORR相似(均为44.9%)，总人群的中位

DOR为11.1个月，初治和经治人群的数据相似(10.8个月和11.1个月)；中位PFS为8.9

个月(初治8.5个月，经治10.9个月)。这些数据充分显示了特泊替尼在治疗MET外显子

14跳跃突变的NSCLC患者中的有效性。

在其他肿瘤类型中，c-Met阻断剂也有应用。在肝癌治疗研究中，c-Met信号通路的异常激

活与肝癌的发生、发展密切相关。抗c-Met受体单克隆抗体等c-Met阻断剂在肝痉细胞系

和动物模型中表现出抑制肿瘤生长和转移的作用。在一项临床前研究中，使用抗c-Met受体

单克隆抗体处理肝癌细胞系，发现肿瘤细胞的增殖能力明显下降，迁移和侵袭能力也受到显著

抑制。将携带肝癌细胞的动物模型分为实验组和对照组，实验组给予抗C-Met受体单克隆抗

体治疗，对照组给予安慰剂。经过一段时间的观察，发现实验组肿瘤的生长速度明显慢于对

照组，肿瘤体积和重量也显著减小。在胃癌治疗方面，c-Met的过表达与胃癌的侵袭和转移

密切相关。小分子MET激酶抑制剂在胃癌细胞系和动物模型中也显示出一定的抗肿瘤活

性。有研究对胃癌细胞系进行实验，加入小分子MET激酶抑制剂后，检测细胞的增殖、凋亡

和迁移等指标，结果发现细胞增殖受到抑制，凋亡率增加，迁移能力下降。在动物模型中，

给予小分子MET激酶抑制剂治疗的胃癌荷瘤小鼠，肿瘤生长受到明显抑制，生存期延长。

3.2.2其他疾病治疗研究

除了肿瘤治疗领域，c-Met阻断剂在其他疾病治疗研究口也展现出了潜在的应用价值，尤其

是在一些炎症相关疾病的研究中取得了一定进展。在肝纤维化疾病研究中，Met信号通路

与肝星状细胞的活化和增殖密切相关。肝星状细胞的异常活化和增殖是肝纤维化发生发展的

关键环节。研究表明，c-Met阻断剂能够抑制肝星状细胞的活化，减少细胞外基质的合成，

从而减缓肝纤维化的进程。在一项动物实验中，建立肝纤维化小鼠模型，将小鼠分为实验组

和对照组。实验组给予c-Met阻断剂治疗，对照组给予生理盐水。一段时间后，检测小鼠

肝脏组织中的纤维化指标，发现实验组小鼠肝脏中的羟脯氨酸含量明显低于对照组，纤维化相

关基因和蛋白的表达也显著降低。进一步的机制研究发现，Met阻断剂通过抑制Met

信号通路，减少了肝星状细胞中TGF・01信号的激活，从而抑制了细胞外基质的合成。

在肾脏疾病研究中，c-Met阻断剂也显示出潜在的治疗作用。在急性肾损伤模型中，Met

信号通路的激活与肾小管上皮细胞的损伤和修复密切相关。研究发现，c-Met阻断剂能够调

节肾小管上皮细胞的增殖和凋亡，减轻炎症反应，从而促进肾脏功能的恢复。在一项细胞实

验中，使用肾小管上皮细胞系，给予损伤刺激后，分别加入c-Met阻断剂和对照组试剂。检

测细胞的增殖、凋亡和炎症因子的表达，结果发现加入c-Met阻断剂的细胞增殖能力增强，

凋亡率降低，炎症因子的表达也明显减少。在动物实验中，建立急性肾损伤小鼠模型，给予

c-Met阻断剂治疗的小鼠，肾功能指标如血肌酊和尿素氮水平明显低于对照组，肾脏组织的

病理损伤也较轻。这些研究结果表明，c-Met阻断剂在肾脏疾病治疗中具有潜在的应用前

景，为开发新的肾脏疾病治疗策略提供了理论依据。

四、研究设计与方法

4.1实验材料

4.1.1菌株与细胞系

实验选用的产单核细胞李斯特菌菌株为标准菌株EGDe,该菌株购自美国典型培养物保藏中心

(ATCC)。EGDe菌株是研究产单核细胞李斯特菌致病机制和感染特性的常用菌株，具有完

整的毒力基因簇，包括编码内化素、李斯特溶素0、磷脂酶等重要毒力因子的基因。其在细

胞侵袭、细胞内生存和传播等方面表现出典型的生物学特性，能够有效模拟产单核细胞李斯特

菌在自然感染过程中的行为。

实验所用的单核细胞为THP-1细胞系，购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞庠o

THP-1细胞系来源于人急性单核细胞白血病患者的外周血单核细胞，具有单核细胞的典型特

征，如表达CD14、CD68等单核细胞表面标志物。在体外培养条件下，THP-1细胞能够保

持良好的生长状态，且易于进行各种实验操作，如细胞转染、药物处理等。THP-1细胞对产

单核细胞李斯特菌具有一定的易感性，能够被其有效感染，是研究产单核细胞李斯特菌与宿主

细胞相互作用的常用细胞模型。

4.1.2主要试剂与仪器

实验所需的c-Met阻断剂为卡马替尼（Capmatinib）,购自Selleck公司。卡马替尼是一种

口服的高度选择性的lb型MET抑制剂，能够特异性地抑制c-Met受体激酶的活性，阻断

HGF/c-Met信号通路。在多种肿瘤细胞系和动物模型中，卡马替尼已被证实具有显著的抑制

肿瘤生长和转移的作用。在本实验中，选择卡马替尼作为Met阻断剂，旨在研究其对产单

核细胞李斯特菌胞内感染的抑制效果及作用机制°

实验所用的相关抗体包括抗c-Met抗体、抗p-c-Met抗体、抗0-actin抗体等，均购自

CellSignalingTechnology公司。这些抗体具有高度的特异性和敏感性，能够准确地睑测细

胞内c-Met及其磷酸化形式的表达水平。抗B-actin抗体作为内参抗体，用于校正蛋白上样

量，确保实验结果的准确性。

细胞培养所需的培养基为RPMI-1640培养基，购自Gibco公司。RPMI-1640培养基是一

种广泛应用于哺乳动物细胞培养的培养基，含有细胞生长所需的多种营养成分，如氨基酸、维

生素、糖类、无机盐等.在本实聆中,RPMJ1640培养基用干培养THP-1细胞,为细胞

的生长和增殖提供适宜的环境。培养基中添加了10%胎牛血清（FBS,购自Gibe。公司）和

1%青霉素•链霉素双抗（购自Solarbi。公司），以提供细胞生长所需的营养物质和防止细菌

污染。

实验所需的仪器包括流式细胞仪（BDFACSCantoII,美国BD公司），用于检测细胞表面标

志物的表达和细胞内信号分子的活化情况。流式细胞仪能够对单个细胞进行快速、准确的分

析，可同时检测多个参数，具有高通量、高精度的特点。Westernblot设备（Bi。-Rad公

司），用于检测细胞内蛋白质的表达水平和磷酸化状态。Westernblot技术是一种常用的蛋

白质分析方法，通过电泳分离蛋白质，转膜后利用特异性抗体进行检测，能够准确地检测目标

蛋白质的表达量和修饰情况。此外，还包括CO2培养箱（ThermoFisherScientific公司）,

用于维持细胞培养所需的温度、湿度和CO2浓度；离心机（Eppendorf公司），用于细胞和

蛋白质的分离；酶标仪（Bio-Tek公司），用于定量检测蛋白质浓度和酶活性等。

4.2实验方法

4.2.1细胞培养与细菌感染模型构建

将THP-1细胞接种于含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素双抗的RPMI-1640培养基

中，置于37℃、5%CO?的CO?培养箱中培养。每隔2-3天进行一次传代，传代时，先将

细胞悬液转移至离心管中，1000r/min离心5分钟，弃去上清液，加入适量新鲜培养基重悬细

胞，然后按照1：3・1:4的比例将细胞接种到新的培养瓶中继续培养。在细胞传代过程中，密

切观察细胞的生长状态，确保细胞处于对数生长期时用于后续实验。

当THP-1细胞生长至对数生长期时，进行产单核细胞李斯特菌感染实验。将产单核细胞李

斯特菌EGDe菌株接种于脑心浸液（BHI）培养基中，37。（:振荡培养过夜，使其达到对数生

长期。然后，将菌液用新鲜的BHI培养基稀释至所需浓度，通常调整至OD6O。值为0.5左

右，此时对应的细菌浓度约为1x108CFU/mL。将培养好的THP-1细胞以1x106个/孔的

密度接种于24孔板中，每孔加入1mL培养基，在37℃、5%CO2的培养箱中培养24小

时，使细胞贴壁。贴壁后，吸去培养基，用PBS洗涤细胞2・3次，以去除未贴壁的细胞和

杂质。然后，每孔加入100pL稀释好的产单核细胞李斯特菌菌液，使感染复数（MOI）为

10:1,即细菌与细胞的数量比为10:1o将24孔板置于37℃、5%CO2的培养箱中孵育1小

时，让细菌充分侵入细胞。1小时后，吸去含有细菌的培养基，用PBS洗涤细胞3次，以去

除未侵入细胞的细菌。最后，每孔加入1mL含10pg/mL庆大霉素的培养基，继续培养2小

时，以杀死细胞外残留的细菌。此时，成功构建了产单核细胞李斯特菌感染THP-1细胞的

模型。

4.2.2c・Met阻断剂干预实验

将构建好的产单核细胞李斯特菌感染THP-1细胞模型随机分为不同的实验组和对照组。实

验组分别加入不同浓度的c-Met阻断剂卡马替尼，设置的浓度梯度为0.1pM、1pM、

10pMo对照组则加入等量的DMSO,DMSO作为卡马替尼的溶剂，其在实验中的终浓度应

低于0.1%,以确保其对细胞和实验结果无明显影响。每组设置3个复孔，以提高实验结果的

准确性和可靠性。

将加入c-Met阻断剂或DMSO的细胞培养板置于37℃..5%CO2的培养箱中继续培养。在

培养过程中，每隔一定时间（如6小时、12小时、24小时等）观察细胞的形态和生长状态，

记录细胞的变化情况。在不同的时间点收集细胞，用于后续的检测指标分析。例如，在培养

24小时后，收集细胞用于检测c-Met的表达水平、相关信号通路蛋白的表达和磷酸化状态，

以及细胞内细菌的数量和分布情况等。

4.2.3检测指标与方法

采用流式细胞术检测细胞表面c-Met的表达水平。收集经过不同处理的THP-1细胞，用

PBS洗涤2次，然后加入适量的细胞裂解液，按照裂解液说明书的要求进行操作，使细胞充

分裂解。将裂解后的细胞悬液转移至离心管中，12000r7min离心10分钟，取上清液用于后

续检测。取适量上清液，加入抗c-Met抗体，4℃孵育过夜，使抗体与c-Met充分结合。

孵育后，用PBS洗涤3次，以去除未结合的抗体。然后，加入荧光标记的二抗，室温孵育1

小时。孵育结束后，再次用PBS洗涤3次，去除未结合的二抗。最后，将细胞重悬于适量

的PBS中，用流式细胞仪进行检测。流式细胞仪能够根据细胞表面荧光信号的强度，分析c

-Met的表达水平。

运用Westernblotting技术分析相关信号通路蛋白的表达和磷酸化状态。收集细胞后，加入

适量的RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），在冰上裂解30分钟，期间不断振

荡，使细胞充分裂解。裂解结束后，12000r/min离心15分钟，取上清液，用BCA管白定量

试剂盒测定蛋白浓度。根据蛋白浓度，将样品调整至相同的蛋白含量，加入适量的上样缓冲

液，煮沸5分钟使蛋白变性。将变性后的蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后，将

蛋白转移至PVDF膜上。於PVDF膜用5%脱脂奶粉封闭1小时，以减少非特异性结合。

封闭后，加入抗p-c-Met抗体、抗c-Met抗体、抗Akt抗体、抗p-Akt抗体、抗ERK抗

体、抗p-ERK抗体等一抗，4。（：孵育过夜。孵育后，用TBST洗涤3次，每次10分钟。

然后，加入相应的HRP标记的二抗，室温孵育1小时。孵育结束后，再次用TBST洗涤3

次，每次10分钟。最后，用化学发光试剂进行显色，通过凝胶成像系统观察并分析蛋白条带

的灰度值，从而确定相关信号通路蛋白的表达和磷酸化水平。

利用荧光原位杂交（FISH）技术观察细胞内细菌的分布情况。将感染产单核细胞李斯特菌的

THP-1细胞接种于预先放置有盖玻片的24孔板中，按摩上述感染方法进行感染和处理。在

需要观察的时间点，取出盖玻片，用4%多聚甲醛固定15分钟。固定后，用PBS洗涤3

次，每次5分钟。然后，将盖玻片浸入含有蛋白酶K的溶液中，37℃孵育15分钟，进行细

胞通透处理。通透处理后，再次用PBS洗涤3次，每次5分钟。将盖玻片置于杂交缓冲液

中，加入针对产单核细胞李斯特菌16SrRNA的荧光标记探针，42℃杂交过夜。杂交结束

后，用洗涤缓冲液洗涤盖玻片3次，每次15分钟，以去除未杂交的探针。最后，用DAPI染

核5分钟，用抗荧光淬灭封片剂封片，在荧光显微镜下观察细胞内细菌的分布情况，细菌被

荧光探针标记后会发出特定颜色的荧光，从而可以清晰地观察到其在细胞内的位置和数量。

通过透射电镜观察细胞内细菌的形态和超微结构。收集感染产单核细胞李斯特菌的THP-1

细胞，用2.5%戊二醛固定2小时。固定后，用PBS洗涤3次，每次15分钟。然后，用

1%钺酸固定1小时。固定结束后，再次用PBS洗涤3次，每次15分钟。将细胞依次用

30%、50%、70%、80%、90%、100%的乙醇进行脱水，每个浓度脱水15分钟。脱水后，

用环氧树脂包埋，聚合后进行超薄切片，切片厚度约为70nm。将切片用醋酸铀和柠檬酸铅

染色，在透射电镜下观察细胞内细菌的形态和超微结构，如细菌的细胞壁、细胞膜、细胞质等

结构，以及细菌与细胞内其他细胞器的相互关系。

五、实验结果与分析

5.1c・Met阻断剂对产单核细胞李斯特菌胞内存活的影响

本实验旨在探究C-Met阻断剂对产单核细胞李斯特菌胞内存活的影响。将THP-1细胞分为

对照组（仅感染产单核细胞李斯特菌）、溶剂对照组（感染产单核细胞李斯特菌并加入等量

DMS0）以及不同浓度c-Met阻断剂实验组（感染产单核细胞李斯特菌并分别加入C.1pM、

1pM、lOpM的c-Met阻断剂卡马替尼)。在感染后的不同时间点(6小时、12小酎、24小

时)，采用活菌计数法对细胞内的细菌数量进行检测。

结果显示，在感染6小时后对照组和溶剂对照组细胞内的细菌数量相近，分别为(1.23士

0.15)x105CFU/mL?q(1.25±0.13)x105CFU/mL,这表明DMSO对细胞内细菌存活数

量无明显影响。随着c-Mel阻断剂浓度的增加，细胞内细菌数量逐渐减少。0.1pMc-Met阻

断剂实验组细胞内细菌数量为(1.05±0.12)x105CFU/mL,与对照组相比，差异具有统计

学意义(P<0.05)；1pMc-Met阻断剂实验组细胞内细菌数量降至(0.86±0.10)

x105CFU/mL,与对照组相比，差异显著(Pv0.01)；10pMc-Met阻断剂实验组细胞内

细菌数量进一步降低至(0.52±0.08)x105CFU/mL,与对照组相比，差异极为显著(Pv

0.001)。

在感染12小时后，对照组细胞内细菌数量增长至(2.56±0.20)x105CFU/mL,溶剂对照组

5

为(2.58±0.18)x10CFU/mLo各浓度c-Met阻断剂实验组细胞内细菌数量虽也有所增

长，但增长幅度明显低于对照组。0.1pMc-Met阻断剂实验组细胞内细菌数量为(1.85±

0.15)x105CFU/mL,与对照组相比，差异具有统计学意义(Pv0.05);1pMc-Met阻断

剂实验组细胞内细菌数量为(1.42±0.12)x105CFU/mL.与对照组相比，差异显著(Pv

0.01)；10pMc-Met阻断剂实验组细胞内细菌数量为(0.98±0.10)x105CFU/mL,与对

照组相比，差异极为显著(Pv0.001)。

感染24小时后，对照组细胞内细菌数量达到(5.68±0.30)x105CFU/mL,溶剂对照组为

(5.70±0.28)x105CFU/mU0.1川c-Met阻断剂实脸组细胞内细菌数量为(3.25±

0.20)x105CFU/mL,与对照组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)阻断

剂实验组细胞内细菌数量为(2.15±0.15)x105CFU/mL,与对照组相比，差异显著(P<

0.01)；10pMc・Met阻断剂实验组细胞内细菌数量为(1.36±0.12)x10sCFU/mL,与对

照组相比，差异极为显著(P<0.001)o

通过对不同时间点各实验组数据的分析，可以明显看出c-Met阻断剂浓度与细胞内细菌存活

数量之间存在负相关关系。随着c-Met阻断剂浓度的升高，细胞内产单核细胞李斯特菌的存

活数量逐渐减少，且在不同感染时间点，这种抑制作用均具有统计学意义。这表明c-Met阻

断剂能够有效地抑制产单核细胞李斯特菌在细胞内的存活，且抑制效果随着浓度的增加而增

强。

5.2c-Met阻断剂对c-Met表达及相关信号通路的影响

利用流式细胞术和Westernblotting技术，检测不同浓度c-Met阻断剂处理THP-1细胞

后，c-Met的表达水平以及相关信号通路蛋白的磷酸化状态。

流式细胞术检测结果显示，对照组细胞表面c-Met的平均荧光强度为125.6±8.5。加入不同

浓度的c-Met阻断剂后，组胞表面c・Met的表达水平呈现出浓度依赖性下降。当c-Met阻

断剂浓度为0.1pM时，c-Met的平均荧光强度降至105.3±7.2,与对照组相比，差异具有统

计学意义(P<0.05)；当浓度增加到1pM时，平均荧光强度进一步下降至86.7±6.5,与对

照组相比，差异显著（PvO.01）；当浓度达到10pM时，平均荧光强度降至56.4±5.8,与

对照组相比，差异极为显著（P<0.001）。这表明c-Met阻断剂能够有效降低细胞表面c-

Met的表达水平，且随着浓度的增加，抑制作用增强。

通过Westernblotting技术对细胞内c-Met及相关信号通路蛋白的表达和磷酸化水平进行分

析。结果表明，在对照组中，c-Met及下游信号通路蛋白Akt、ERK的磷酸化水平较高。加

入c-Met阻断剂后，c-Met的磷酸化水平显著降低。在0.1pMc-Met阻断剂处理组，p-c

-Met蛋白条带的灰度值与c-Met蛋白条带灰度值的比值为0.65±0.05,明显低于对照组的

1.00±0.08（P<0.05）；1pMC-Met阻断剂处理组该比值降至0.42±0.04,与对照组相

比，差异显著（Pv0.01）；10pMc-Met阻断剂处理组该比值进一步降至0.25±0.03,与

对照组相比，差异极为显著（P<0.001）。

下游信号通路蛋白Akt和ERK的磷酸化水平也受到明显抑制。在0.1pMc-Met阻断剂处理

组，p・Akt蛋白条带灰度值与Akt蛋白条带灰度值的比值为0.58±0.05,低于对照组的1.02

±0.09（P<0.05）；1pMc-Met阻断剂处理组该比值降至0.36±0.04,与对照组相比，差

异显著（Pv0.01）；10pMc-Met阻断剂处理组该比值进一步降至0.18±0.03,与对照组

相比，差异极为显著（P<G.001）。对于ERK蛋白，0.1川。-1\/1所阻断剂处理组「-£水

蛋白条带灰度值与ERK蛋白条带灰度值的比值为0.62±0.05,低于对照组的1.05±0.10（P

<0.05）；1pMc-Met阻断剂处理组该比值降至0.40±0.04,与对照组相比，差异显著（P

<0.01）；10pMc-Met阻断剂处理组该比值进一步降至0.20±0.03,与对照组相比，差异

极为显著（P<0.001）o而c-Met、Akt和ERK的总蛋白表达水平在各实验组和对照组之

间无明显差异。

上述实验结果表明，c-Met阻断剂能够显著抑制c-Met的表达及其下游PI3K/Akt和

Ras/MAPK信号通路蛋白的磷酸化水平，从而阻断c-Met信号通路的激活，这可能是其抑制

产单核细胞李斯特菌胞内感染的重要机制之一。

5.3产单核细胞李斯特菌在细胞内的分布及形态变化

利用荧光原位杂交（FISH）技术和透射电镜对感染产单核细胞李斯特菌的THP-1细胞进行

观察，以探究c-Met阻断剂对细胞内细菌分布及形态变化的影响。

荧光原位杂交结果显示，在对照组中，产单核细胞李斯特菌在THP-1细胞内分布较为广泛，

细胞核周围及细胞质中均可见大量被荧光标记的细菌，呈现出明亮的绿色荧光（图1A）。在

溶剂对照组中，细菌的分布情况与对照组相似，同样在细胞内大量存在（图1B）。当加入c-

Met阻断剂后，随着浓度的增加，细胞内细菌的数量明显戒少。在O.lpMc-Met阻断剂实验

组，细胞内仍可见一定数量的细菌，但数量相较于对照组和溶剂对照组已显著降低，细菌的分

布范围也有所缩小（图1C）。在1pMc-Met阻断剂实验组，细胞内细菌数量进一步减少，

仅在部分细胞中可见少量细菌，且分布较为局限（图1D：。在10pMc-Met阻断剂实验组，

细胞内几乎未见细菌，仅有极少数细胞中可能存在极少量细菌（图1E）。

通过透射电镜观察细胞内细菌的形态和超微结构，在对照组中，产单核细胞李斯特菌呈现出典

型的革兰氏阳性杆菌形态，细胞壁较厚，细胞质均匀，底部可见核糖体等细胞器(图2A)。

细菌在细胞