岛津SPD高效液相色谱仪确认方案

目录

1.概述........................................................1

1.1.仪器概况...................................................1

1.2.仪器用途......................................................1

2.目的............................................................3

3.范围............................................................3

4.验证小组成员与职责.............................................2

5.方案执行........................................................2

6.内容............................................................4

6.1.文件检查....................................................4

6.2.具体确认步骤............................................2

6.2.1.仪器与试剂............................................5

6.2.2.安装确认..............................................3

6.2.3.运行确认..............................................3

6.2.4.性能确认..............................................6

6.3.再确认.....................................................7

6.4.确认结论...................................................7

6.5.确认报告......................................................7

7.参考文件........................................................7

岛津SPD-15c高效液相色谱仪确认记录..............................8

岛津SPDT5c高效液相色谱仪确认报告...............................21

1.概述

岛津SPD-15C高效液相色谱仪为质量检测中心常用仪器，为确认该仪器各项

性能仍符合要求，制订本方案对该仪器进行确认。

1.1.仪器概况

本台岛津SPD-15C高效液相色谱仪是由输液系统、自动进样器、色谱柱

（柱温箱）、检测器和数据处理装置等部分组成，液相色谱仪利用样品中各组

分在色谱柱内固定相和流动相间分配或吸附特性的差异，由流动相将样品带

入色谱柱中进行分离，经检测器检测，依据组分的保留时间和响应值（峰面

积或峰高）进行定性和定量的分析。

仪器主要参数如

下：质量检测中心

仪器安装位置

检测器：

生产厂家/出厂

型号/设备编号SPD-15C/03Z130岛津/L20524931151

编号

光源笊灯量程0.0001—2.56AUFS

260(W)X140(H)X

波长范围190〜600nm体积（mm）

430(D)

输液泵：

型号/设备编号LC-15C/03Z131生产厂家/出厂岛津/L20514932222

编号

生产厂家/出厂

型号/设备编号LC-15C/03Z132岛津/L20514932205

编号

260(W)X140(H)X

类型双柱塞往复泵体积(mm)

420(D)

压力设定范围1.0—39.2MPa流速范围0.001,〜9.999mL/min

进样器：

生产厂家/出厂

型号/设备编号SIL-20AC/03Z133岛津/L20174805350

编号

260(W)X415(H)X

进样体积范围0.1-100uL体积(mm)

500(D)

柱温箱：

生产厂家/出厂

型号/设备编号DT-230AYUDTAN

编号

工作站：

浙江大学智达自动化

工作站N2000色谱工作站生产厂家

信息工程有限公司

1.2.仪器用途

该仪器用于样品含量、有关物质、聚合物等的检测。

2.目的

对该仪器进行安装确认、运行确认与性能确认，以确定仪器是否仍具

有良好的检测性能，是否仍能满足日常分析测试工作的需要。

3.范围

适用于岛津高效液相色谱仪SPD-15C的确认。

4.验证小组成员与职责

人员部门职责

负责确认方案的

起草

负责按确认方案

的要求参与并组

织实施确认

负责收集确认记

录，对确认结果

项目负责人质量检测中心

进行分析，起草

确认报告

负责对参与确认

的检验人员进行

确认方案与操作

规程培训

组员质量检测中心按确认方案，参

与确认实验的操

作

负责监督确认实

质量保证部

施的进展情况

5.方案执行

所有的空白记录都要被填写，如果项目不适用，用单线划掉，签名并注

明日期。

所有的测试项目都应完成，若未完成应记录，按偏差处理，并说明相关原因

和解决的措施。

所有的偏差均要求记录，并用适当的方法评估其影响，并证明采取的纠正措

施是可以被接受的。偏差记录见确认记录中“6.偏差处理记录”o

6.内容

6.1.文件检查

6.1.1.目的

确保与本次确认的相关文件都齐全。

6.1.2.程序

6.1.2.1.确定仪器使用说明书等相关原始资料和技术文件齐全。

6.1.2.2.相关人员接受了确认方案与相关操作规程的培训。

6.1.2.3.确认方案中涉与的所有仪器均经过校准，并在有效期内，且有必需

的相关证书。

6.1.3.可接受标准

根据确认记录中“1.文件检查记录”的要求，核对•相关文件，确保文件完整。

相关人员接受了确认方案与相关操作规程的培训。确保岛津SPDT5c高效液

相色谱仪与其他仪器经过校准，在有效期内，且有相应的证书。

6.1.4.原始记录

检查记录见确认记录“1.文件检查记录”与“2.仪器与试剂”。

6.2.具体确认步骤

6.2.1.仪器与试剂

6.2.1.1.要求

秒表：分度值不大于0.1s；

分析天平：最大称量不小于100g,最小分度不大于Img；

温度计：温度范围0〜100℃、最小分度值不大于0.1℃；

甲醇：HPLC用;

丙酮：分折纯；

紫外吸收标准溶液：取;20℃干燥至恒重的基准重铭酸钾约60mg,精密称定,

用0.005mol/l硫酸溶液溶解并稀释至1000ml,摇匀，即得重铭酸钾的硫酸溶

液；

lXlO'g/mL的蔡/甲醇标准溶液；

1X10qg/mL的蔡/甲醇标准溶液。

6.2.1.2.具体见确认记录“2.仪器与试剂”。

6.2.2.安装确认

6.2.2.1.目的

由于在初始安装岛津SPD-15C高效液相色谱仪时，未进行系统的安装确

认，故在本次确认中，重新对零配件和仪器的安装条件进行确认，保证各项

检查项目结果合格，仪器的安装正确，且能正常运行。

6.2.2.2.程序

对照使用说明书，确认环境、电源等是否符合要求，具体确认步喉按“3.安

装确认记录”进行。

6.2.2.3.可接受标准

实验室电源设计安装合理，环境良好，符合仪器安装要求。环境、电源

等符合仪器要求。

6.2.2.4.原始记录

运行确认结果见确认记录中“3.安装确认记录”。

6.2.3.运行确认

6.2.3.1.目的

确认岛津SPD-15C高效液相色谱仪的各项功能是否iA到设计要求，并能顺利

运行。

6.2.3.2.程序

6.2.3.2.1.运行确认开始前状态的确认

安装确认成功完成；设备与电源连接正常。

6.2.3.2.2.操作功能键确认

按"4.1操作功能键确认”，确认仪器的主耍操作功能键与其功能是否正常。

6.2.3.2.3.基本运行功能确认

按“4.2基本运行功能确认”，确认仪器的基本运行功能是否正常。

6.2.3.2.4.输液系统的确认

6.2.3.2.4.1.泵耐压的确认

将仪器各部分连接好，以10。%甲醇为流动相，流量为ImL/min,按说明书

启动仪器，压力平稳后保持lOmin,用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。卸下

色谱柱，堵住泵出口端〔压力传感器以下)，使区力达到最大允许值39.2MPa

的90%,保持5min无泄漏。

6.2.3.2.4.2.泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的确认。

按表1的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用

事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表1规定时

间流出的流动相，在分析天平上称重，按式(1)、式(2)计算SS和SR。

Ss二(Fm-Fs)/FsXlOO%(1)

SR=(广皿一Fini„)/FnXlCO%(2)

式中：m——(W2-W1)/(pt.t),流量实测值，mL/min；

W2---容量瓶+流动相的质量，g；

W1——容量瓶的质量，g；

Pt一一试验温度下流动相的密度，g/mL；

t——收集流动相的时间，min；

m——同一组测量的算术平均值，mL/min；

S—流量设定值，mL/min；

max---同一组测量中流量最大值，mL/min；

min---同一组测量中流量最小值，mL/mino

表1

流量设定值/(mL/min)0.51.02.0

测量次数333

流动相收集时间/'min1055

6.2.3.2.4.3.梯度误差

由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶剂为含

0.1%丙酮的水溶液，B经由5个阶梯从0变到100%,如图1所示。将

输液泵和检测器连接(不接色谱柱)，开机以后以A溶剂冲洗系统，基线

平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。求出A,B溶剂不同比例时的

输出信号值，重复测量2次，计算平均值。从B溶剂的含量与对应的输出信

号值，按式(3)计算梯度误差Gci,取Gci最大者作为仪器梯度误差。

Gci=(E-ZJ/'Z..X100%(3)

式中：Gci——第i阶段梯度误差(%)；

Zi——第i阶段输出信号值增量的平均值；ZZL(M)

(i=0,1,2,3,4,5)；

L——各段输出信号值增量平均值的平均值；Z„=

m5i=o

物

巴0%A

信

号100%B

值80%B//

或

记60%B/

录

仪40%B/

谈20%B/-

数/

100%A/

0%B

时间r*

图1

6.2.3.2.5.柱箱温度设定值误差△Ts和控温稳定性Tc的确认

将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35°。和45°。进行确认。按仪器

说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后

每隔lOmin记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差

为△TS,7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TCo

6.2.3.2.6.紫外-可见光检测器的确认

6.2.3.2.6.1.波长示值误差和重复性

用一节空管代替色谱柱将液路连通，以水为流动相流量为1.0mL/min,

采用步进进样方法，在235nm、257nm、313nm和350nm波长处检定仪器的波

长示值误差。从检测器波长较规定波长低5nm处开始到较规定波长高5nm处

（例如确认257nm时，从252nm开始到262nm）,从低于5nm开始，注入紫外

吸收标准溶液10uL,待色谱峰出来完毕后再将检测器波长调高Inm,再注入

紫外吸收标准溶液10uL,这样将得到一组不同波长的色谱峰，最高（或最

低）色谱峰对应的波长与标准溶液波长之差，即为波长示值误差，示意图如

图2；每个波长重复测量三次，其中最人值与最小值之差为波长重复性误差。

AU

披长/即

图2

6.2.3.2.6.2.基线噪声和基线漂移的确认

6.2.3.2.6.3.最小检测浓度的确认

在6.2.3.2.6.2.的色谱条件下，注入10UL或20口L1X10-7g/mL的蔡/

甲醇标准溶液，记录色谱图，按式(4)计算最小检测浓度cL。

式中：cL---最小检测浓度，g/mL；

Nd——检测器基线噪声峰高，mv；

c一一标准溶液浓度，g/mL；

H一一标准溶液的色谱峰高，mv；

V——进样体积，uLo

6.2.3.2.7.自动进样器进样量准确度误差的确认

取1.5ml进样瓶装入1nli水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进

样器上让其进样10次，每次10U1。进样完成后再精密称定其重量，按式(5)

由重量差计算进样量准确度。

进样准确度二型二^X100%(5)

IOxVxp(

式中：Ma一一进样前进样瓶重(mg)；

Mb---进样后进样瓶重(mg)；

V——进样体积，uL；

Pt一一试验温度下(自动进样器设置温度)流动相的密度，mg/uLo

6.2.3.3.原始记录

运行确认结果见确认记录中“4.运行确认记录”。

6.2.3.4.可接受标准

6.2.3.4.1.仪器的主要功能键与其功能正常，仪器的基本运行功能正常。

6.2.3.4.2.泵耐压的确认：输液管路接口紧密牢固，在5min内无泄漏。

6.2.3.4.3.泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR：流量为0.5mL/min时

SSW5%,SRW3%；流量为l.OmL/min时SSW3%,SRW2%；流量为2.OmL/min

时SSW2以SRW2%。

6.2.3.4.4.梯度误差GC:GC不超过±3%。

6.2.3.4.5.柱箱温度设定值误差ATS和控温稳定性TC:ATS不超过±2C；

TC不超过1℃。

6.2.3.4.6.波长示值误差和重复性：波长示值误差不超过±2nm；波长重复性

优于2nm。

6.2.3.4.7.基线噪声和基线漂移：基线噪声不超过5X10-4mv；基线漂移不超

过5X10-3mv/ho

6.2.3.4.8.最小检测浓度：最小检测浓度不超过1X10-7g/mL的蔡/甲醉溶

液。

6.2.3.4.9.自动进样器进样量准确度误差：进样误差不得过2%。

6.2.4.性能确认

6.2.4.1.目的

确认岛津SPD-15C高效液相色谱仪的整机性能是否符合规定，达到定性、定

量重复性的要求。

6.2.4.2.程序

6.2.4.2.1.性能确认开始前状态的确认

运行确认成功完成；仪器与电源连接正常。

6.2.4.2.2.性能确认（定性、定量重复性的确认）

将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，100%甲醇为流动相，流量为

1.0mL/min,检测波长为254nm,柱温设定为40C,待基线稳定后注入10uL

的1X10-4g/mL蔡/甲醇标准溶液；连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和

峰面积，以保留时间计算其定性测量重复性误差，以峰面积计算其定量测定

重复性误差。按式（6）计算相对标准偏差RSD。

RSDG定性（定即二位区-又）2/（6-DxLxioo%（6）

Vi=ix

式中：RSD6定性（定量）一一定性（定量）测量重复性相对标准偏差；

X.一一第i次测得的保留时间或峰面积；

X——6次测量结果的算术平均值；

i一一测量序号。

6.2.4.3.原始记录

性能确认结果见确认记录中“5.性能确认记录”。

6.2.4.4.可接受标准

定性测量重莫性（6次测量）RSD不超过1.5%；定量测量重复性（6次测

量）RSD不超过2.0%。

6.3.再确认

6.3.1.在一般正常情况下，每年再确认一次。

6.3.2.如遇任何重大变更：如更换重要零件或重大维修项目，完成后均需要

再次确认，以证明各种重大变更不会对现有使用效果产生影响。

6.4.确认结论

确认结论见确认记录中“7.确认结论”。

6.5.确认报告

确认报告见《岛津SPD-15C高效液相色谱仪确认报告》。

7.参考文件

本方案依据下面列出规范或资料的有关条款，结合本公司需求制定。

7.1.《药品生产质量管理规范（2010年修订）》

7.2.《中华人民共和国药典（2010版二部）》

7.3.《药品GMP指南-质量控制实验室与物料系统》

7.4.《岛津SPDT5c紫外-可见检测器说明书》

7.5.《岛津LC-15C溶剂输送泵说明书》

7.6.《岛津SIL-20AC自动进样器说明书》

7.7.《液相色谱仪检定规程JJG705-2002》

岛津SPD-l5c高效液相色谱仪确认记录

1.文件检查记录

1.1.仪器原始资料与操作规程检

查文件编号/档案号文件保存地点

文件名称

岛津SPD-15C高效液相色谱仪使用

说明书

岛津系列高效液相色谱仪操作规

程

岛津系列高效液相色谱仪维护保

养操作规程

岛津系列高效液相色谱仪清洁操

作规程

检查人检查日期

复核人复核日期

结论:

评价人：日期：年月日

评价人：日期：年月H

1.2.文件培训检查

培训讲是否有培训

培训内容参加人员日期

师记录

岛津系列高效液相色谱仪操作

规程

岛津系列高效液相色谱仪维护

保养操作规程

岛津系列高效液相色谱仪清洁

操作规程

岛津SPD-15C高效液相色谱仪

确认方案

高效液相色谱法操作规程

检查人检查H期

复核人复核日期

结论:

评价人：日期：年月日

评价人：日期：年月日

2.仪器与试剂

2.1.仪校准是否有是否

级别/生产

器型号编号有效校准报符合

规格厂家

仪器期告要求

秒表

分析天

平

温度数

据采集

仪

温湿度

计

检查人检查日期

复核人复核日期

结论：

评价人：日期：年月日

评价人：日期：年月日

2.2.试剂级别是否

批号供应商/来源有效期

品名（纯符合要求

度）

甲醇

丙酮

基准重铝酸钾

硫酸

1x10-7g/mL的蔡/

甲醇标准溶液

1XlO^g/mL的蔡/

甲醇标准溶液

检查人检查日期

复核人复核日期

结论：

评价人：3

期：年月日

评价人：日期：

年月口

3.安装确认记录

项目可接受标准结果

室内环境室内应清洁无尘，无易燃、

易爆和腐蚀性气体，无阳

光直射，排风良好。

环境温度室温在15〜30C,温度变

化不超过3C,室内湿度在

20%〜85%范围内。

安装位置仪器应平稳地放置在工作

台上周围无强烈的机械震

动和电磁干扰源。

电源电压为(220±22)V,

频率为(50±0.5)HZ,以

电源

稳压器输出。

接地仪器接地良好。

检查人检查日期

复核人复核日期

结论：

评价人：日期：年月日

评价人：日期：年月日

4.运行确认记录

4.1.操作功能键确认

项目可接受标准结果

输液泵[POWER]按下输液泵【POWER】输液

泵通电，输液泵显示屏

亮，等待约3秒输液泵显

示屏显示主界面。

输液泵排气阀可逆时针打开输液泵排气

[DRAIN]阀[DRAIN]1/2圈。

输液泵[purge]逆时电一打开输液泵排气阀

[DRAIN]1/2圈，按下

[purge]输液泵开始排

气。5分钟后自动停止。

按下输液泵【pump】键，输

输液泵[pump]液泵开始输液。

按卜输液泵【sleep】键，

输液泵控制面板灯灭，进

输液泵【sleep】

入睡眠状态。

按下输液泵[edit]进入

输液泵[edit]

梯度编辑界面。

输液泵（Enter]按下输液泵【edit】进入

梯度编辑界面，输入时间

5min,再按下【Enter】键，

即设置初始梯度执行时间

为5mino

按下输液泵【edit】进入

梯度编辑界面，输入时间

5min,再按下【Enter】键，

输液泵[del]即设置初始梯度执行时间

为5min,再按下[del]

键删除设置的时间。

在梯度编辑界面按下【CE】

输液泵[CE]键，返回上级菜单。

按下输液泵【func】键，进

入输液泵菜单，再次按下

输液泵[func][func]键，进入下一菜

单。

按下输液泵【cone】键，进

输液泵[cone]

入梯度初始比例设置界

面。

按下输液泵【run】键,输

液泵run指示灯亮，输液

输液泵【run】

泵开始执行梯度输液。

按下检测器（POWER］键，

检测器通电，显示屏亮，

进入自检界面，等待约3

检测器［POWER］

分钟，检测器显示屏显示

主界面。

按下检测器【func】键，进

入检测器菜单界面，再按

检测器［func］下检测器［func］键，进

入下一菜单。

按下检测器【func】键一

次，显示波长设置菜单，

检测器（enter］按下【enter】键，进入波

民设置界面，输入254nm

再按下【enter】键即设置

254nm为检测波长。

按下检测器【func】键一

次，显示波长设置菜单，

按下【enter】键，进入波

检测器［del］长设置界面，输入

254nm.再按下【del】键

即删除254nme

按下检测器【func】键一

次，显示波长设置菜单，

按下【enter】键，进入波

长设置界面，输入254nm

检测器［CE］

再按下［enter）键即设置

254nm为检测波长。再按

下【CE】键返回上级菜单。

在检测器工作状态下，按

下【zero】键，检测器显

检测器［zero］

示屏上显示0.OOAUo

检测器［sleep］按下检测器［sleep）键，

检测器控制面板灯灰，进

入睡眠状态。

按下自动进样器[POWER]

自动进样器键，自动进样器通电，显

[POWER]示屏进入主界面。

按下【purge】键，自动进

自动进样器样器进入自动清洗进样

[purge]口，25min后停止。

按下[edit]键，进入自

自动进样器

动进样程序编辑菜单。

[edit]

按下（edit]键，进入自

动进样程序编辑菜单，再

自动进样器

按下【enter】键进入进样

[enter]

程序编辑。

按下[edit]键，进入自

自动进样器

动进样程序编辑菜单，按

[del]

下【del】克对编辑好的程

序删除。

按下[edit]键，进入自

动进样程序编辑菜单，按

自动进样器下【del】克对编辑好的程

[CE]序删除，再按下【CE】键

返回上级菜单。

按下【start/stop】键，

自动进样器自动进样器开始按程序

【start/stop]设定进样。

按下自动进样器【sleep】

自动进样器键，检测器控制面板灯

[sleep]灭，进入睡眠状态。

按下电源开关键，电源键

指示灯亮，温度显示屏

柱温箱电源键

亮。

连续按下柱温箱

柱温箱[，]

键温度设置显示屏SV

光标在不同的温度位数

间闪烁。

按下柱温箱【▲】温度

柱温箱【▲】

设定值增加

按下柱温箱【▼】温度

柱温箱【▼】

设定值降低

检查日

检查人

期

复核日

复核人

期

结论：

评价人:日期：年月日

评价人:日期：年月日

4.2.基本运行功能确认

项目可接受标准结果

输液泵基按下输液泵【POWER】输液

本运行功泵通电，输液泵显示屏亮，

能确认等待约3秒输液泵显示屏显

示主界面，逆时针打开输

液泵排气阀［DRAIN］1/2

圈，按下［purge］输液泵

开始排气，5分钟后自动停

止，顺时针拧紧输液泵排

气阀再按下【func】键，进

入菜单界面，流速光标闪

烁，输入1.0,按下

［enter］即设置流速为

1.0mL/min,按下［CE］键

返回，按下【pump】键，输

液泵开始以1.0mL/min流

速运行。

检测器基按下检测器【POWER】键,检

本运行功测器通电，显示屏亮，进

能确认入自检界面，等待约3分

钟，检测器显示屏显示主

界面，按下检测器［func］

键一次，显示波长设置菜

单，按下【enter】键，进

入波长设置界面，输入

254nm再按下【enter】键即

设置254nm为检测波长，在

检测器工作状态下，按下

【zero】键，检测器显示屏

上显示0.OOOAUo

自动进样按下自动进样器【POWER】

器基本运键，自动进样器通电，显

行功能确示屏进入主界面，按下

认【purge】键，自动进样器

进入自动清洗进样口，

25min后停止,按下【edit】

键，进入自动进样程序编

辑菜单，依次输入进样盘

号、初始进样瓶号、结束进

样瓶号、重复进样次数、进

样量、进样时间，按下

【enter】键，再按下[CE]

键返回，待仪器显示屏显

示READY后，按下

【start/stop】键，自动进

样器开始按程序设定进样。

柱温箱基按下电源开关键，再按下

本运行功柱温箱键，再【▲】

能确认[▼）键设定目标温度

35℃,等待一段时间后，

柱温箱温度显示屏PV显示

温度35℃0

检查人

复核人

结论：

评价人：日期：年月日

评价人：日期：年月日

4.3.输液系统确认记录

4.3.1.泵耐压的确认

项目可接受标准结果

泵耐压测堵住泵出口端（压力传感器

试以下），使压力达到最大允

许值39.2MPa的90%,保持

5min无泄漏。

检查人检查日期

复核人复核日期

—

结论:

评价人：日期：年月日

评价人：口期：年月日

4.3.2.泵流量设定值误差入、流量稳定性误差SF

室密度

温：℃

流动相

户二尸

FsS1tFS2=t2=FS3=t3=

w.

w2

W2训

(w2-w.)/Pl

Fm

F

泵流量设定值

误差Ss

流量稳定性误

差SR

确认E

确认人

期

复核人复核E

期

结论：

评价人：日期：年月日

评价人：日期：年月日

4.3.3.梯度准确度确认

阶梯号i012345

B溶液浓度变化0%20%40%60%80%100%

1

2

读数(mv)

平均

值

li

Li—Lm

Gci

Ge

确认人确认日期

复核人复核U期

结论:

评价人：日期：年月B

评价人：日期：年月0

4.4.柱箱温度设定值误差△Ts和控温稳定性Tc

序号1234567平均值

△Tsi与To

的设定值

35℃

△TS2与TC2

的设定值

45℃

柱箱温度ATs.ATS2

设定值误

差ATs

控温稳定TC2

TC1

性Tc

确认日

确认人

期

复核口

复核人

期

结论：

评价人：日期：年月0

评价人：日期：年月日

4.5.检测器确认

项目结果

待确认波长最高(或最低)色谱峰对应波长示值误差

(nm)的波长(nm)(nm)

波长示值误差235

(nm)257

313

350

待确认波长最大值(nm)最小值(nm)波长重复性

(nm)(nm)

波