检验科在医院感染管理工作中的职责

检验科在医院感染管理工作中的职责

一、负责感染病人相关化验，对送检的样本及时进行病原微生物的培

养、分离、鉴定、药敏试验及特殊病原体的耐药性监测.

二、定期总结、分析病原微生物分布及其药敏试验结果，向临床医师

和医院感染管理科反馈，并向全院发布.

三、负责医院感染常规微生物学监测，积极配合感染管理专职人员工

作，反馈和上报有关信息，严格执行无菌操作技术和消毒隔离制度。

四、负责医院感染控制培训中相关微生物学知识的培训。

五、严格执行医院感染监控制度，按照国家法规要求做好生物安全工

作。

六、发生医院感染流行或者暴发时，承担相关检测工作.

七、负责医院感染科研工作中的实验室检测工作。

检验科医院感染微生物学监测制度

为了合理规范我院消毒灭菌效果、环境卫生学监测工作，提高监

测结果的准确性、真实性、可靠性，特作如下规定及要求：

一、按规定开展环境微生物学监测项目，严格遵守规定的监测时限,

真实规范采样，完整填写监测报告单，每月25号前报感染管理科，

科室监测登记备案保存3年。

二、严格执行无菌技术操作原则，操作前衣帽整洁，戴口罩，洗手，

必要时戴手套.

三、严格执行医疗机构消毒技术规范，培养基制作间使用前严格进行

环境消毒，空气紫外线照射消毒时间不少于60分钟，开灯5—7分钟

开始计时,物表消毒配置500mg/L含氯消毒液进行擦拭消毒，拖布、

抹布、消毒桶固定使用，标记清晰，不许混用。

四、严格执行手卫生规范，制作培养基和采样操作前严格洗手和手消

毒，培养基制作间配备手消毒液，手消开瓶使用期限为1个月。

五、细菌室每月对采样试管、培养皿做无菌试验，按要求做到培养时

限准确、中和剂添加正确、报告结果规范.

六、监测中对不合格项FI要认真进行原因分析，排除制作和操作中污

染的可能性,并对不合格项目如实上报。

七、重点科室、重点部位每月进行监测,其它科室不定期进行抽查，

如有感染可能性随时配合医院进行监测调查。

八、各科室（部门）监测项目、监测时限、采样方法、评价（合格）

标准，详见附件。

附件：

A。4手和皮肤消毒效果监测

A.4.1手的消毒效果监测

应遵循WS/T313的要求

A。4。2皮肤的消毒效果监测

Ao4o2.1采样时间

按照产品使用说明规定的作用时间，达到消毒效果后及时采样。

Ao4o2.2采样方法

用5cmx5cm的灭菌规格板，放在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂的无菌

洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，

剪去手接触部位后,将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内，及

时送检，不规则的皮肤可用棉拭子直接涂擦采样。

A.4.2o3检测方法

将采样管在混匀器上振荡20s或者用力振打80次，用无菌吸管吸取1。

0mL待检样品按种于灭菌平皿，每一样本接种2个平E1,平皿内加入己溶化的

45℃~

48c的营养琼脂15m门8ml,边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培

养48h,计数菌落数.

细菌菌落总数计算方法见式(Ao1)：

细菌菌落总数(cfu/cm?):平板上菌落数x稀释倍数采样面积(cm?)…(A。1)

A.4o2o4结果判定

皮肤消毒效果的判定标准遵循WS/T313中外科手消毒卫生标准。

A.4o2.5注意事项

采样皮肤表面不足5cmx5cm,可用相应面积的规格板采样.

A.5物体表面的消毒效果监测

A.5o1采样时间

在消毒处理后或者怀疑与医院感染暴发有关时进行采样.

Ao5o2采样方法

用5cmx5cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03mol/L磷酸盐

缓冲液(PBS)或者生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹

5次,并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积，被采表面V100cm2.取全

部表面；被采面积2100cm2,取100cm2o剪去手接触部份，将棉拭子放入装

有10ml无菌检验用洗脱液的试管中送检.门把手等小型物体则采用棉拭子宜接

涂抹物体表面采样。采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂.

A。5.3检测方法

充分震荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1。0ml接种平皿，将冷至4

0C~45c的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15m卜20mI,36c±1℃恒温箱培养4

8h,计数菌落数。怀疑与去院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测.

A।5c4结果计算

A.5.4.1规则物体表面

物体表面菌落总数计算方法见式(A。2)：

物体表面菌落总数(cfu/ent)=平均每皿菌落数X洗脱液稀释倍数采样面

积(cm2)……(Ao2)

A.5o4.2小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。

A。5。5结果判定

A.5.5.1洁净手术部、其他洁净场所，非洁净手术部(室)、非洁净骨髓移

植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、

血液病病区等；物体表面细菌菌落总数V5cfu/cm2。

Ao5o5.2儿科病房、母婴同室、妇产科检杳室、人流室、治疗室、注射

室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心(室)、急诊室、化验室、

各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房等；物体表面细菌菌落总数410cfu/c

m2。

A.6空气的消毒效果监测

Ao6.1采样时间

采用洁净技术净化空气的房间在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样;未

采用洁净技术净化空气的房间在消毒或者规定的通风换气后与从事医疗活动前

采样；或者怀疑与医院感染暴发有关时采样.

Au6„2监测方法

A.6o2。1洁净手术部（室）及其他洁净用房可选择沉降法或者浮游菌法，

参照GB50333要求进行监测。浮游菌法可选择六级撞击式空气采样器或者

其他经验证的空气采样器。监测时将采样器置于室内中央0。8m~1。5m高度,

按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min.房间面积＞10m2者，

每增加10m2增设一个采样点.

Ao6。2。2未采用洁净技术净化空气的房间采用沉降法：室内面积$30m2,

设内、中、外对角线三点，内、外点应距墙壁1m处；室内面积＞30m2,设四

角及中央五点，四角的布点位置应距墙壁1m处。将普通营养琼脂平皿（①90mm）

放置各采样点，采样高度为距地面0。8m“1o5m；采样时将平皿盖打开，扣

放于平皿旁，暴露规定时间后盖上平皿盖及时送检。

A。6。2.3将送检平L1L置36c±1℃恒温箱培养48h,计数菌落数。若怀疑

与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。

A.6o3结果计算

A。6。3。1沉降法按平均每皿的菌落数报告：cfu/（皿.暴露时间）

A.6.3o2浮游菌法计算公式见式（A.3）：

空气中菌落总数（cfu/m」）二采样器各平皿菌落数之和（cfu）采样速率（L

/min）x采样时间（min）x1000......（A.3）

A.6.4结果判定

A.6.4.1洁净手术部（室）和其他洁净场所,空气中的细菌菌落总数要求

应遵循GB50333.

A.6.4.2非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、

新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌

菌落总数W4cfu/（15min•直径9cm平皿）。

A.6.4.3儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注

射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、

各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数W4cfu/（5mi

n•直径9cm平皿）。

A.6.5注意事项

采样前，关闭门、窗，在无人走动的情况下，静止：Omin后采样。

A.7消毒液的监测

A.7.1常用消毒液有效成份含量测定

库存消毒剂的有效成份含量依照产品企业标准进行检测;使用中消毒液的有

效浓度测定可用上述方法，也可使用经国家卫生行政部门批泄的消毒剂浓度纸

（卡）进行监测。

A.7.2使用中消毒液染菌量测定

A.7.2.1。1用无菌吸管按无菌操作方法吸取1.0mL被检消毒液，加

入9mL中和剂中混匀。醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、

含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含0。1%硫代硫酸钠中和剂，洗必泰、季钱盐

类消毒剂用含0。3%吐温80和0.3%卵磷脂中和剂，醛类消毒剂用含0。3%甘

氨酸中和剂，含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加入吐温80至3%;

也可使用该消毒剂消毒效果检测的中和剂鉴定试验确定的中和剂。

A.7.2.1.2用无菌吸管吸取一定稀释比例的中和后混合液1.0mL接种平

皿,将冷至40c、45°C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15m「20mL,36℃±

1C恒温箱培养72h,计数菌落数；怀疑与医院感染爆发有关时，进行目标微生物的

检测.消毒液染菌量计算见式（Ao4）：

消毒液染菌量（cfu/ml）=平均每皿菌落数x10x稀释倍数.....（A.4）

A.7.2.2结果判断

使用中灭菌用消毒液：无菌生长：使用中皮肤黏膜消毒液染菌昂::vlOcfu/ml,

其他使用中消毒液染菌量不OOcfu/ml。

A.7.3注意事项

采样后4h内检测.

A8清洁用品的消毒效果监测

A.8.1采样时间消毒后、使用前进行采样。

A.8.2采样方法布巾、地巾等物品可用无菌的方法剪取1cmx3cm,直

接投入5ml含相应中和剂的无菌生理盐水中，及时送检.

A.8.3检测方法将采样管在混匀器上振荡20s或者用力振打80次，取

采样液检测致病菌。

A.8.4结果判定未检出致病菌为消毒合格。

A.9致病菌的检测

当怀疑被某致病菌污染时，或者怀疑医院感染与某致病菌有关时，致病菌的

检

测依据污染情况进行相应指标菌的检测。检测方法参考相关标准。

附录B

(资料性附录)

消毒试验用试剂和培养基配方

B.1磷酸盐缓冲液(PBS.0.03mol/L.pH702)

无水磷酸氢二钠2。83g

磷酸二氢钾1o36g

蒸镭水加至1000mL

将各成份加入到1000mL蒸僧水中，待彻底溶解后，调pH至7.2~7.4,于1

21℃压力蒸气灭菌20min备用.

B.2无菌检验用洗脱液

吐温一801g

蛋白脓10g

氯化钠8.5g

蒸僧水1000mL

将各成份加入到lOOOmLO.O3moi/LPBS液中，加热溶解后调pH至7.2~7。

4,与121℃压力蒸汽灭菌20min备用。

B.3营养琼脂培养基

蛋白腺10g

牛肉膏5g

氯化钠5g

琼脂15g

蒸储水1000mL

除琼脂外其他成份溶解于蒸饰水中，调pH至7.2~7.4,加入琼脂，加热溶

解，分装，于121c压力蒸气灭菌20min备用。

B.4澳甲酚紫蛋白陈培养液

蛋白月东10g

前萄糖5g

可溶性淀粉1g

滨甲酚紫乙醇溶液10mL

蒸储水1000mL

将蛋白陈、葡萄糖溶解于蒸储水中，调pH至7.0、7。2,加入1%澳甲酚

紫酒精溶液，摇匀后，分装，每管5mL，于115c压力蒸汽灭菌30mino置4℃

冰箱备用。

B。5营养肉汤培养基

蛋白陈10g

牛肉膏5g

氯化钠5g

蒸储水1000ml

将各成份溶解于蒸储水中，调pH至7。2~7.4,分装，于121c压力蒸汽

灭菌20min备用。

B.6嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基

蛋白陈10g

牛肉膏3g

可溶性淀粉1g

葡萄糖1g

琼脂20g

蒸储水1000ml

以上各成份蒸储水溶解，调pH至7。0~7.2,装瓶，经115c压力蒸汽灭菌

30min后使用.

B.70.5%葡萄糖肉汤培养基

蛋白陈iog

氯化钠5g

葡萄糖5g

肉浸液1000ml

取蛋白陈与氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调pH至弱碱性，煮沸、加

入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调pH至7.0、7。4,分装，于115℃压力蒸汽

灭菌30min。

B.8稀释液：胰蛋白陈生理盐水溶液(TPS).

胰蛋白月东1o0g

氯化钠8.5g

先用900ml以上蒸馀水溶解，并调节pH值在7o0±0.2(20℃),最终用蒸馀

水加至1000ml,分装后，经121C压力蒸汽灭菌后使用。

B。9需氧一厌氧菌琼脂培养基

酪陈(胰酶水解)15g

牛肉膏3g

葡萄糖5g

氯化钠2.5g

L•胱氨酸0.5g

硫乙醇酸钠0。5g

酵母浸出粉5g

新鲜配制的0.1%刃天育溶液1.0ml

（或者新配制的0。2%亚甲蓝溶液0。5ml

琼脂0.5g~0o7g

蒸僧水1000ml

除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成份加入蒸馀水中,微温溶解后，调pH至

弱碱性，煮沸、滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调pH至6.9、7。3,分装

于115c压力蒸汽灭菌30mino

B。10无菌试验用真菌培养基

磷酸二氢钾（KH2POJ根

硫酸镁（MgSO/7H0）0.5g

蛋白陈5g

葡萄糖10g

蒸储水1000ml

除葡萄糖外，上述各戌份加入蒸储水内，微温溶解后，调节pH约6。8,煮

沸，加葡萄糖溶解后，摇匀嘘清，调pH使灭菌后为6.4±0o2,分装,115℃压力

蒸汽灭菌20min备用.

B.11血琼脂培养基

营养琼脂100ml

脱纤维羊血（或者兔血）10ml

将营养琼脂加热熔化特冷至50c摆布，以无菌操作将10ml脱纤维血加

入后摇匀，倒平皿置冰箱备用.

B。12注意事项

配制培养基注意事项如卜.：

a）配制培养基的容器不宜用铜锅或者铁锅，以免影响细菌生长；

b）培养基用的试管口和锥形烧瓶口应用普通棉花制成的棉塞，再用牛皮纸

包好；

c）试剂与培养基配制好后应置清洁处保存，常温下不超过1个月。附件:

1空气消毒效果的监测

采样时间：在消毒处理后、操作前进行采样。

（1）采样方法

1）布点方法；室内面积W30cm2,设内、中、外对角线3点，内、外

点布点部位距墙壁IM处;室内面积＞30cnt,设4角及中央5点，4角

的布点部位距墙壁1m处。

2）平板暴露法：将普通营养琼脂平板（直径为9cm）放在室内各采样

点处，采样高度为距地面0.8nTl。5m,采样时将平板盖打开，扣放

于平板旁，暴露5min,盖好即将送检。

3）检测方法：将送检的平板置37c温箱培养48h,计数菌落数，若

怀疑与医院感染暴发有关时,进行目标微生物的检测。

⑵结果判定I类区域：细菌总数W10cfu/m3,未检出致病菌为消毒合格：H类区域:细菌总

数W200cfu/m3,未检出致病菌为消毒合格;HI类区域：细菌总数W500cfu/m3,未检出致病

菌为消毒合格。注意事项：采样前，关闭门、窗，在无人走动的情况下，静止10分钟后进

行采样。

2物品和环境表面消毒效果监测采样时间：在消毒处理后进行采样。

⑴采样方法：用5cmX5cmd标准灭菌规格板，放在被检问题表面，采样面积2100cm2,

连续采样4个，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均

匀涂擦各5次，并随之转棉拭子,剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml含有相应中和剂的

无菌洗脱液试管内，即将送检把手等不规则物体表面用棉拭子宜接涂擦采样。

（2）结果判定I、H类区域：细菌总数W5CFU/cm3并未检出致病菌为消毒合格.IH类区域：

细菌总数W10CFU/cm3并未检出致病菌为消毒合格。N类区域：细菌总数W15CFU/cm3

并未检出致病菌为消毒合格。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表

面不得检出沙门氏3手的消毒效果监测采样时间:在消毒后即将采样。

（1）采样方法1）手的采样：被检人五指并拢，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭

子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30cm3）,并随之转动采样

棉拭子，剪去操作者手接触部位,将棉拭子投入10ml含有相应中和剂的无菌洗脱液试管内,

即将送检.2）结果判定【、II类区域工作人员：细菌总数W5CFU/cm3,并未检出金黄色葡

萄球菌、大肠杆菌、铜绿假的抱菌为消毒合格JH类区域工作人员:细菌总数W10CFU/cm

3并未检出金黄色葡萄球加、大肠杆菌为消毒合格.N类区域T.作人员：细菌总数W

15CFU/cm3并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。母婴同室、婴儿室、新生儿

室及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球

菌为消毒合格。

4压力蒸汽灭菌效果监测方法

（1）化学监测法1）化学指示卡（管）监测方法：将既能指示温度，乂能指示温度持续时间的

化学指示管（卡）放入每•待灭菌的物品包中央，经•个灭菌周期后，取出指示管（卡），根

据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。2）化学指示胶带监测法：将化学指示胶带粘

贴于每一待灭菌物品包外，经一个灭菌周期后，观察其颜色的改变，以指示是否经过灭菌处理。

3）结果判定:检测时，所放置的指示管（卡）的性状或者颜色均变至规定的条件，可认为该包灭

菌合格。4）注意事项:监测所用化学指示剂须经卫生部批准，并在有效期内使用。

（2）生物监测法1）指示菌株：指示菌株为嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC7953或者SSIK31株），

菌片含菌量为5,0X105-5.0x106cfu/片，在121c±0.5C条件下,D值为13-1.9min,

杀灭

时间（KT

佰）W19min,存活时间（ST侑）为23.9min.2）培养基:试验用培养基为溟甲酚紫蛋白陈水

培养基。

（3）检测方法：将两个嗜热脂肪杆菌芽胞菌片分别装人灭菌小纸袋内,置于标准试验包中心

部位。灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包（由3件平纹长袖手术衣，4块小手

术巾,2块中手术巾，1块大手术中,30块10cmx10cm8层纱布敷料包裹成25cmX30cmx

30cm大小）.手提压力蒸汽灭菌霜用通气贮物盒（22cmx13cmx6cm）代替标准试验包，盒

内盛满中试管，指示菌片放于中心部位的两只灭菌试