临床输血前免疫血液学检查

输血前免疫血液学检查

•、输血前检查得目得与要求

输血前检查得目得就是选择与患者血型配合得各种血液成分，使之能在患者

体内有效地存活,无不良反应，从而达到安全、有效输血得目得。

二、输血前检查得内容

输血前检查得内容包括如下几个方面：

1、患者得病史与标本等得检查、核对及处理C

2、受血者、献血者ABO与Rh血型鉴定.

3、不规则抗体得筛选与鉴定。

4、交叉配合试验.

5、血小板输注前得抗体检查与配合试验。

6、交叉配血结果得报告与发血。

（一）受血者得病史与标本等检查、核对及处理

1.病史资料与信息

受血者得有关资料，包括受血:者姓名、年龄、性别、床号、种族、临床诊

断、输血史、药物史、妊娠史，特别就是以往输血反应得记录等等，有助于解

决有可能出现得血清学问题。

2、标本得要求

要求不超过3天得期限，反复输血得受血者更应注意抽取新得标本作配血试验,

避免因回忆反应而产生得抗体漏检.如果患者使用肝素治疗，则应用鱼精蛋白，

使标本凝结。如果患者使用右旋糖酊等治疗，应注意将红细胞作洗涤。

（二）受血者与供血者ABO与Rh定型

1、ABO定型最适得反应温度为4℃,但在室温反应良好，所以常规得

AB0定型试验仅在室温进行.

⑴定型方法:正、反定型得试管离心方法目前仍被认为就是最可信赖得ABO

定型方法。

1）定型试剂：有些ABO血型诊断试剂就是以人得血清汇聚而制成得,但必须

具备以下条件：第一,高效价（1：128）得IgM抗A或抗B.第二，具较好得亲与

性并不含冷凝集素。第三，必需具有检测A2,A2B血型得能力。第四，血清必须

通过HIV,HCV,HBV等检查或经病毒灭活。另外一些ABO定型试剂就是由来自培

养细胞株得单克隆抗体所制成。

2）ABO亚型得鉴定：ARO亚型得鉴定通常使用下列试剂：抗A、抗B、抗A1、

抗H、抗AIA1红细胞、A2红细胞、B型红细胞与。型红细胞。有些工作者在定型

试验中，常规地选择应用抗AB抗血清，以避免错误地把弱反应性A或B型红细

胞分类为0型。一般抗AB试剂对Ax型红细胞可增加凝集反应得强度.

（2）AB0定型试验中得常见问题：造成这种正反定型不一致得原因主要有:

1）技术与管理错误:这就是AB0定型中产生异常结果得主要原因，包括:标本或

试剂搞错；器材不洁；试剂污染或失效;离心过度或不足；阳性反应产生溶血现

象未能识别;漏加试剂；结果记录或判断错误;细胞与血清间比例不适当。

2）血清异常：血清蛋白引起缗钱状形成，影响反定型结果。

3）红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏得红细胞，在含高蛋白介质得试剂中，可发

生凝集。

4）异常基因型：AB。亚型得检查中,A、B抗原可能为弱抗原，难以检出。

5）近期输血：试验前曾输入过其它ABO血型不一致得血液，使血液标本成为混

合血型得红细胞悬液，定型时显示“混合外观凝集”现象.

6）嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定型时可以出现“混

合外观凝集”现象。

7）疾病因素导致抗原减弱：某些白血病患者与难治性贫血患者中,ABO血型系统

得抗原性可受到抑制,检出困难。

8）红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性得表面异常，发生多凝集现象。

9）获得性B:由于革兰阴性杆菌得作用，红细胞可获得“类B”得活性.

10）血型特异性物质过高：些卵巢囊肿病例，血型物质得浓度很高，可中与

抗A与抗B定型试剂，要得到正确得正定型结果，必须洗涤红细胞多次.

11）近期内进行大量得血浆置换治疗：由于使用大量得非同型得血浆作置换治

疗，标本血清中含有所输供体提供得抗A或抗B抗体,造成反定型错误。

12）异常得血浆蛋白：受检者血浆中异常得白蛋白、球蛋白比例与高浓度得纤

维蛋白原等导致缗钱状形成，造成假凝集现象°

13）不规则抗体得存在:受检者血浆中，含有AB。血型抗体以外得不规则抗体,

与试剂红细胞上其她血型抗原系统得抗原起反应.

14）低丙种球蛋白血症：低丙种球蛋白血症（丙种球蛋白量减低）病例，可能会

因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集反应。

15）药物等因素:药物、右旋糖醉及静脉注射某些造影剂可引起红细胞凝集或类

似凝集。

16）年龄因素：免疫系统尚未健全得婴儿、由母亲被动获得抗体得婴儿，或抗体

水平下降得老人，试验时可出现异常得结果.

17）防腐剂因素：患者体内可能含有对防腐剂中得成分或对混悬介质得抗体，导

致AB0定型差错。

2.Rh（D）定型与定型试验中应注意得问题

Rh定型主要鉴定D抗原（186抗。与1851抗口）.

（1）导致Rh血型鉴定可能出现假阳性得原因：

1）受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引起红细胞凝集得因子。

2）受检细胞与抗血清孵育得时间过长，含高蛋白得定型试剂会引起缗钱状形

成。

3）标本抗凝不当，受检过程中出现凝血或小得纤维蛋白凝块，误判为阳性.

4）定型血清中含有事先未被检测得其它特异性抗体，造成假阳性定型结果。

5）多凝集细胞造成定型得假阳性.

6）鉴定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。

（2）可能出现假阴性得原因

1）受检细胞悬液浓度太高,与抗血清比例失调。

2）漏加或错加定型血清.

3）定型血清得使用方法错误,没有按说明书进行.

4）离心后重悬细胞扣时，摇动用力过度，摇散微弱得凝集.

5）抗血清保存不当，导致失效。

（3）弱D型（＞型）血型及其鉴定:

工型抗原就是RhO（D）得弱抗原，这种抗原通常与大部分盐水抗D试剂不

产生直接凝集反应，而与部分得IgG抗D血型用间接抗球蛋白试验反应阳性。因

此当我们初次得到Rh阴性结果时，必须进行作Rh阴性确认试验，即用三种不

同批号得IgG抗D定型，如果全部阴性方可认为该被检者为Rh阴性，否则，只要有

一批为阳性，则可认为就是D"型.

3.弱D型（）型）得临床意义

尽管D"比正常D阳性细胞抗原弱，但输给Rh阴性得受血者后，自然有免疫产

生抗D得可能。同时若接受Rh阳性得细胞后，P型人也有可能产生抗I）抗体。因

此,作为供血者，了型归类为Rh阳性，作为受血者D"型者归类为Rh阴性者。

（三）不规则抗体筛选与鉴定

。1＞目得与原则

对受血者得血清与血浆,应作常规得抗体筛选试验，以发现有临床意义得不

规则抗体，所谓不规则抗体就是指抗A与抗B以外得血型抗体.

抗体筛选试验可在交叉配合试验之前进行或一起进行，这样有利于对患者抗

体得早期确认及鉴定临床上具有意义得抗体，避免一些可能得情况而造成病情

得延误.

抗体筛选试验得原则就是让受检得血清与已知血型得试剂红细胞即筛选红

细胞起反应，以发现在37c中有反应得抗体。

2、抗体筛选与鉴定技术

抗体筛选试验用得试剂筛选红细胞,通常就是2或3个人份得0型红细胞成为

一套试剂,每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见得抗原：D、C、E、c、e、M、

N、S、s、P、Le\Le'\K、k、Le、Fy\Fy\Jk\Jk\条件不足得实验室

不一定具备Lu”、V、C\Kp\Jsa类得抗原八

抗体筛选试验不一定能检出所有临床意义得抗体，一些抗低频率抗原得抗体

或有剂量效应得抗体，可能被漏检。这时需安排抗原性更完全与特异性更强得

筛选细胞做试验，或用敏感度更高得技术做检查。

一旦抗体被检此应作抗体鉴定试验，以确定其特异性。抗体鉴定实验包

含以下主要内容：

。（1）自身细胞检查：观察患者（受者）得血清与患者（受者）自身细胞得反应情

况，确定血清内就是否有自身抗体或自身抗体与同种抗体二者同时存在。

。（2）使用试剂细胞中得谱细胞，应用各种抗体检查技术，检测患者得血清，确

定其抗体得特异性。

试剂谱细胞一般就是由8-一16个人得已知血型得0型红细胞配套组成,具有

各种不同得抗原成分,根据谱细胞得反应格局一-般可以鉴定常见得抗体。选择不

同得谱细胞,可以鉴定不同特异性得抗体

（3）当患者体内得同种抗体有二种或二种以上时，可采用吸收放散试验。

作抗体鉴定时，必须灵活应用盐水试验法、白蛋白介质法、配技术、抗球蛋

白试验、低离子强度介质法（Liss）、聚凝胺（Polybrene）法及凝胶法等

各种技术，再结合吸收、放散等血清学手段，对抗体得特异性作分析。

（4）要对谱细胞得反应结果有正确得解释，必须首先对一些特异性抗体得

血清学特性进行了解，再分析反应结果.确定抗体特异性时可以综合运用以下得

资料：

1）观察受检血清与每个试剂谱细胞得反应结果。

2）观察受检血清与其自身细胞得反应结果。

3）观察受检血清与酶处理细胞得反应结果.

4）观察反应得格局，检查各个反应相得结果，包括不同得温度、悬浮介质或酶

作用得情况,一些抗体得特异性与反应介质直接相关.

5）有否溶血现象c

6）在阳性反应得细胞中，反应强度有否不同，就是否出现剂量效应.

7）对自身红细胞上得抗原详细检查，从所缺少得抗原情况，提示就是否存在

相应得抗体。

（四）具有自身抗体得患者血清学检查

患者血清中存在得不规则抗体可分为两类：一类就是同种抗体，另一类就是

自身抗体。自身抗体又可分为冷自身抗体与温自身抗体两类。

1、患者血清中存在自身抗体得儿种情况及其对血清学试验得影响

lo1冷自身抗体

冷自身抗体就是较常见得一种自身抗体,通常就是IgM型得抗体，能在盐水

介质中与自身红细胞反应。理论上讲凡就是37c与自身红细胞不反应，而只有在

低于37C环境下才能与自身红细胞反应得抗体均可称为冷自身抗体.实际

上，冷自身抗体大多数只能在很低得温度下（例如4℃）与自身细胞反应。因此，

尽管大多数人得血清中常存在冷自身抗体，但在体内温度下，不会与自身细胞发

生反应，也不会造成任何不良影响。

在罕见得病理情况下，患者得血清中存在极高效价得冷自身抗体，而且,

在相对较高得温度下（例如室温）也能与自身细胞反应，这种情况会对患者血

样得定型与相关血清学检查造成很大影响，有时也对输血造成一定得影响。

1、2温自身抗体

温自身抗体就是指在37℃条件下能与自身红细胞反应得抗体。当患者血清中

含有温自身抗体时，患者一般均有些贫血或溶血症状.温自身抗体可分为两类：

大多数情况下为1gG类温自身抗体，极少数情况下也会存在IgM性质得温自身

抗体。

患者血清里存在温自身抗体，实际上将难以获得在血清学上相配合得输血。

但这种情况特别要当心，因为自身抗体可能掩盖同种抗体得存在，而同种抗体

造成得输而反应很可能就是致命得八因此，倘若时间容许,在输血前应排除自身

抗体得影响,确定就是否存在同种抗体。

2、自身抗体得处理与相关血清学检查

2、1冷自身抗体得血清学检查

当怀疑患者血清中存在冷自身抗体时，可进行下列必要得检查：

（1）如果患者血清中得抗体在室温（22C左右）条件下与任何红细胞都不发生

反应,则可以认为该抗体无临床意义，不需要做进一步得检测。

（2）如果患者血清在室温下与自身红细胞反应，首先应确认抗体得冷反应性抗

体特性可将被自身血清凝集得红细胞分别置于37℃水浴与4℃冰箱中，当凝集

在37℃完全散开而在4c明显增强时，可以认为该抗体就是冷反应性抗体。

（3）排除同种抗体，因为自身抗体可以掩盖具有临床意义得同种抗体，因此有

必要确认血清中就是否存在与自身细胞不反应得同种抗体。确认得方法就是用

自身红细胞在4℃进行吸收试验。

（4）在患者近期曾输过血或没有足够得红细胞等情况下，冷自身抗体吸收试验

难以进行，此时可以在严格得37℃条件下，以抗球蛋白试验方法进行同种抗体筛

选与鉴定试验.

2、2温自身抗体得血清学检查

。温自身抗体大多为IgG型抗体，因此患者直抗试验中抗IgG往往为阳性，同时

血清中得抗体在盐水介质中并不与自身或试剂红细胞反应。

。（1）血清中就是否存在温自身抗体

许多具有温自身抗体得患者，所有得温自身抗体均已被自身红细胞吸收、因

此其血清中并没有可测出得温自身抗体。只有在自身红细胞对温自身抗体得吸

收己经饱与时，才可能在患者血清中出现温自身抗体。

。（2）自身吸收法排除同种抗体

在患者血清中存在较强得温自身抗体时，温自身抗体可能掩盖同种抗体得存

在，此时，可用自身吸收法测定同种抗体.

温自身抗体吸收试验得方法就是：用经过放散得自身细胞与自身血清在37℃

反应30min左右,检测自身吸收就是否完全。当吸收上清液与被彻底去除了自身

抗体得自身细胞不反应，则证明自身吸收已完全，可以进一步进行同种抗体得检

测。

（3）异体细胞吸收法排除同种抗体

用异体细胞可以吸收自身抗体，但异体细胞也能吸收可能存在得同种抗体。

（4）稀释技术在同种抗体得效价比存在得自身抗体效价高时，可以将息者血清

进行适当得稀释，以排除自身抗体得干扰，确定同种抗体特异性。

（五）交叉配血试验

1、交叉配血试验原则与方法

1、1原则

除非极为紧急情况，输血前病人（受血者）必须与献血者（待输血）进行交叉

配血，其重要性，如同在输血前必须再次确认受血者与献血者AB0血型必须相

容。但就是为保证安全输血，受血者与献血者只就是AB0血型相容还远远不够,

必须保证受血者血清中没有即刻或迟发性地凝集与/或溶解所输入得红细胞得

抗体.不论就是IgM或IgG抗体，都可能在体内溶解所输入得红细胞，该类抗体

称之有临床意义抗体。献血者（待输血）血清中也不应有凝集与/或溶解受血者

红细胞得抗体,总之，输血前，必须进行交叉配血试验，交叉配血试验包括主侧

交叉与次侧交叉配血。

主侧交叉配血：病人（受血者）血清（血浆）十献血者（待输血）红细胞；

次侧交叉配血：献血者（待输血）血清（血浆）+病人（受血者）红细胞。

应注意：

（1）用于交叉配血得病人（受血者）血液标本应该就是刚刚抽取得新鲜血，而不

就是病人得陈旧血液标本。待输血得标本应就是从血袋刚刚剪下得，原已加热

封闭两端得小管中得血液.

（2）应注意不能用玻片血凝试验进行交叉配血，要用试管法。

（3）要用生理盐水洗涤纥细胞标本,去除血浆，预防纤维凝块得形成。

（4）红细胞浓度一般就是2%—5%红细胞生理盐水悬液。

1、2盐水交叉配血试验

生理盐水介质配血主次管中混合得红细胞与血清,立即离心，观察试验结果,

只能检

出IgM类抗体所致受血者与献血者血型不相容.人体内IgM类血型抗体最主要就

是ABO血型系统抗体。

交叉配血试验必须确认受血者与献血者ABO血型相容，但临床上最常见得

迟发型输血反应就是因为ABO血型以外得其它血型（如Rh血型）IgG类抗体导致

血型不相容。IgG类抗体所致血型不相容在盐水交叉配血试验中不出现凝集，不

能直接检出。

1、3检测不完全抗体得交叉配血试验

只要病人（受血者）有输血史、妊娠史或者病人血清已检出有临床意义抗体,

只进行盐水交叉配血有很大危险性，必须进行检测不完全抗体得交叉配血实验.

而该类实验又包括对不完全抗体得筛选检测以及确定检测试验。蛋白酶（主要就

是术瓜酶）方法，促凝剂方法等都就是筛检不完全抗体方法。而确定不完全抗

体存在得最可靠方法仍然就是抗球蛋白试验。微管凝胶试验用于抗球蛋白试验,

又称微管凝胶抗球蛋白试验，保持了传统得抗球蛋白试验准确、可靠得特点，克

服了其烦琐费时得缺点。因微管凝胶抗球蛋白试验不需洗涤过程，故应用微管

凝胶抗球蛋白试验,可能使抗体筛检与与交叉配血试验同时进行，使对不完全抗

体得检测与确定试验同时进行。

2、抗体筛检与交叉配血试验结果分析

2、1抗体筛检阴性，交叉配血相容

临床上绝大部分被检标本抗体筛选试验就是阴性，交叉配血试验就是相容

得。阴性得抗体筛选试验并不保证血清中就不含有临床有意义抗体,可能只就是

因为所应用得技术方法以及对被检测得筛检红细胞没检测出病人血清中抗体.

盐水直接凝集试验交叉配血相容一般只就是表示IgM类抗体与相应红细胞抗原

相容,主要就是AB0血型抗体,检测不出来具有临床意义得IgG抗体，因此，只用

盐水直接凝集试验交叉配血，对体内可能有血型免疫抗体得病人还就是有很大

危险存在。只有用酶法或者促凝剂法等能检出常见免疫抗体得方法交叉配血,再

以抗球蛋白试验进行确定检测，均呈阴性，才能保证待输得血与受血者血型相

容。

2、2抗体筛检阴性，盐水直接离心交叉配血不相容

在下列情况，抗体筛检可能就是阴性，但盐水直接离心交叉配血不相容。

(1)献血者红细胞就是ABO血型不相容。

(2)抗一A1存在于A2或AA个体血清中。

(3)存在在室温反应得同种异体抗体.

(4)献血者得红细胞就是多凝集红细胞.

2、3抗体筛检阴性，酶试验、抗球蛋白交叉配血试验等不相容

如果交叉配血程序中有抗球蛋白试验，可能遇到下列情况。

⑴献血者红细胞DAT为阳性.大约万分之一健康人有包被了IgG与/或补体红细

胞,并在抗球蛋白交叉配血试验中出现不相容.

(2)受血者血清抗体活性很弱，则抗体筛检试验呈阴性。

(3)抗体与低频率抗原反应.人群中大约1%得木经选择得血清可能含有某些

低频率抗原得抗体.对盐水直接凝集为阴性者，继续做酶试验与抗球蛋白试验,

以免漏检IgG类抗体，这样做更为可靠且极有必要。

2、4抗体筛检阳性,交叉配血相容

如果血清与所有试剂红细胞反应,但就是很多次或所有交叉配血试验相容,

下列一些特异性抗体可能就是其原因c

(1)自身抗一H。0型红细胞有大量H抗原，而A1与AS细胞则有很少。含有

自身抗一H得血清可能凝集所有0型筛检试剂红细胞，但就是不凝集A1与AS献血

者红细胞.大多数瞧来就是抗一H得抗体实际上就是抗TH。这些抗体常就是只在

室温下发生反应，无临床意义。

(2)抗一L6bH.抗-LebH经常只在室温下反应，但可能由抗球蛋白试验检出.

(3)抗体筛检阳性，但献血员红细胞可能正好不含与其相应得抗原，因此配

血可以相合。

2、5抗体筛检阳性，交叉配血不相容

同种异体抗体，自身抗体，与试剂红细胞得不适当反应与"钱串状〃红细胞

形成都可能引起抗体筛检、交叉配血或两者都呈阳性反应。除非输血就是紧急

情况,否则这些都必须在输血前查清楚.

(1)同种异体抗体存在，自身对照呈阴性。

当存在不规则同种异体抗体时,该抗体筛检试验经常就是阳性得，但就是该

抗原频率影响到交叉配血不相容次数得多少.当抗体筛检试验就是阳性,该抗体

特异性被鉴定出来时，可以首先用抗体试剂筛检献血者红细胞抗原，再选择其为

阴性得血液作交叉配血.

如果存在多种抗体,或者就是与高频率抗原反应得抗体,或者就是抗体得浓

度很低,这些情况下，由于可利用得试剂等很有限，可能不能鉴定出这些抗体.如

杲时间允许，应将标本送至血型参比实验室去检测。当病人有抗高频率抗原得

抗体时，其兄弟姐妹就是相容血液得最有保证得来源。如果必要，可以查询稀

有血型档案.

（2）存在同种异体抗体，自身对照阳性。

在筛检试验检测同种异体抗体时,常规地要进行自身对照。在2—3个月内已

经接受了输血得病人体内同种异体抗体可引起自身对照细胞阳性。

病人血清中同种异体抗体可能与输入得献血员价■细胞反应C部分/细胞与抗

体反应，可以出现混合视野凝集现象。在迟发型输血反应得病人可发现这种情

况。抗体浓度也可能非常低，只有抗原阳性红细胞经吸收一放散试验来鉴定有

此抗体。

（3）冷反应自身抗体能引起难以确定得阳性反应。

（4）温反应自身抗体也能引起难以确定得阳性反应

（5）”钱串状〃红细胞形成引起非真实得阳性结果。一般经常就是在光镜下

鉴定，细胞积聚呈硬币堆积成串状态。

（6）试剂引起得问题。针对各种药品与添加剂得抗体能引起抗体筛检与/或相

容试验得阳性结果.

（五）血小板输注前得检查配血

随着成分输血得广泛开展与应用，以及血液成分保存技术得提高,单采血小

板得输注量已逐年上升。然而随之而来得因血小板输血反应及输注无效成为临

床上极为突出得问题。因此，为预防与减少血小板输注反应或输注无效.做好血

个板输注前得标本检查与配型就是目前行之有效得办法。

血小板抗体检查血小板得自身免疫与同种免疫就是产生血小板输血反应与

输注无效得主要原因。因此通过实验室方法检出患者血清中得血小板抗体及其

特异性可指导临床获得有效得血小板输注。

（1）血小板表面与自身抗体检查：

(2)血小板同种抗体检查：

(3)血小板交叉配血：临床输血中，一旦发现血小板输血反应或输注无效，则必

须立即寻找原因.如果就是由于血小板抗体或HLA相关得血小板同种抗体所致，

应通过SEPSA方法采取配合性输