细菌质量控制流程

微生物实验室细菌质量控制流程

一、目的

规范微生物实验室管理程序，确保临床报告的质量。

二、适用范围

微生物实验室的细菌检测。

三、职责

实验室检验人员均必须熟知并遵守本程序。

四、程序：

（一）检验前的质量管理

1.检验申请单临床医生应按照《微生物检测项目申

请程序》申请临床微生物检测。

2.生成微生物检验标本标签护士应在核对医嘱、病

人信息和检验申请信息后，按照微生物标本检验标签

程序生成申请单和微生物检验项目标签，并将微生物

检验项目标签正确贴于容器上。

3.标本的采集手册实验室应制定样本采集手册，指

导正确采集和处理样本。

4.样本采集和运输样本采集应按照《标本采集、运

输程序》采集样本，并在规定的时间和温度范围内，

使用指定的运输培养基，安全运送到微生物室。

5.样本的接收样本接收人员应严格按照标本接收、

识别程序，标本拒收程序对标本接收或拒收，并记录。

6.微生物检验标本信息输入微生物实验室接种实验

室岗位检验人员严格按照微生物标本信息输入程序

录入、核对病人信息和标本信息等资料。

7.样本储存微生物实验室接种岗位检验人员按照微

生物标本检验前储存程序正确储存未能及时处理的

标本。已经检验的样本应在保证性质稳定的条件下，

将样本以适当的方式保留到规定时间内，以便能在出

具结果报告后可以复查，或做补充检验。

(-)检验中的质量管理

1.标本预处理、涂片及接种(微生物标本接种岗位检

验人员完成)

(1)严格按照《呼吸系统标本细菌学检验标准操

作规程》预处理呼吸道标本，涂片革兰染色以判

定痰标本是否合格，正确选择培养基接种。

(2)按照《血液及骨髓标本细菌学检验标准操作

规程》将血培养瓶放入全自动培养分析系统进行

培养。如仪器报阳性，应立即取瓶，涂片革兰染

色，同时接种血平板。如果涂片阳性，应按照《危

机值报告程序》将染色结果以初步报告形式电话

通知临床医生，并记录在《危机值报告登记表》

±o

(3)按照《脑脊液标本细菌学检验标准操作规程》

处理脑脊液标本，涂片革兰染色，正确选择培养

基接种。如果涂片阳性，应按照《危机值报告程

序》将染色结果以初步报告形式电话通知临床医

生，并记录在《危机值报告登记表》上。

(4)按照《尿液标本细菌学检验标准操作规程》

定量培养。

(5)按照《生殖标本细菌学检验标准操作规程》

正确选择培养基，处理、接种生殖道标本。阴道

炎病人标本须进行革兰染色；孕妇需进行B群

链球菌的筛查。

(6)根据医生的要求，按照《粪便标本细菌学检

验标准操作规程》正确选择培养基，处理、接种

粪便标本。有抗酸药物治疗史的严重腹泻病人(6

个月婴儿除外)，粪便常规培养无异常发现时，

可检测艰难梭菌毒素。

(7)按照《浓及伤口标本细菌学检验标准操作规

程》处理、接种伤口标本。深部伤口感染应至少

包括标本采集、需氧菌的培养及鉴定。最好进行

直接涂片革兰染色检查并报告结果。如果涂片阳

性，将染色结果以初步报告形式电话通知临床医

生。核对检验单与接种平板信息，确保无误后

并记录，按照检验要求将接种好的平板放置相应

条件孵育箱培养。

（8）菌落观察及鉴定（细菌鉴定岗位检验人员完

成）细菌鉴定岗位检验人员取出充分孵育的平

板按照标本标准操作程序，观察初步检测结果，

制定进一步鉴定及药敏试验方案。涂片染色、手

工或仪器判别细菌类型。根据按照《质量质控管

理程序》进行质控，并记录在《室内质控记录表》

上，确保试验质量。

2.试剂的质量控制

所有试剂用于检测标本前，必须做质控以评估质量并记

录质控结果，只有质控合格才可以使用。下列试剂每进一批

新批号或货号要求用阴、阳性标准菌株或质控菌株评估其质

量（见表1-1）。

表1-1常用实验试剂质量控制

试剂阳性对照阴性对照监测频率

每次新配制

氧化酶铜绿假单胞菌大肠埃希菌时及使用中

每个工作日

每次新配制

触酶金黄色葡萄球菌A群缝球菌

时及使用中

每个工作日

每次新配制

内酰胺普通变形杆

大肠埃希菌时及使用中

酶菌

每个工作日

每次新打开

草绿色链球

奥普托辛肺炎链球菌时及使用中

菌

每个工作日

每次新打开

表皮葡萄球

凝固酶金黄色葡萄球菌时及使用中

菌

每个工作日

每次新打开

杆菌肽A群链球菌粪肠球菌时及使用中

每个工作日

3.染液的质量控制（见表1-2）

表1-2常用染液的质量控制

染液阳性对照阴性对照监测频率

革兰染金黄色葡萄球菌大肠埃希菌每次新配制

液ATCC25923ATCC25922时及使用中

每周一次

4、培养基的质量控制

（1）购买的有质量保证标准的培养基实验室应保存

制造商所遵循的质量保证标准，以及每批号产品完

成无菌试验、生长试验、生化试验及质量控制性能

的合格证明等文件；无质量保证标准的培养基，每

批号和（或）每次购买的产品应检测相应的性能，

包括生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验

（适用时）、生化反应（适月时）等。

（2）外观检查合格培养基的标准：完整。琼脂附于

平板底部，血平板应不透明、没有溶血情况，平板

颜色好、湿润，无干裂、无污染、无浑浊或沉淀、

无冻伤、无过热现象，琼脂厚度至少3mm,如发现

与上情况不符的培养基，应不予使用。

（3）无菌试验抽检培养基数量：100块以内，随机

抽检5；100块以上可随机取10块平板或10支

试管培养基进行无菌试验。35度培养24小时后观

察是否有细菌生长，无细菌生长为合格。

（4）生长试验及生化反应试脸质控菌株35P培养

24小时，用无菌生理盐水配制1.5麦氏单位的细

菌悬液。无菌生理盐水1：100稀释，每块平板接种

10ul（浓度相当于1（T3-10MCFU/平板）。培养

24-48小时。符合生长，生化试验质控标准者方可

使用。失控者必须记录失控情况并有相应的纠正措

施

表1-3生化试验用培养基的质控

培养基质控菌株鉴定标准

大肠埃希菌

克氏双糖铁培养基

ATCC25922

半固体培养基

氧化发酵管

5、药敏试验质控

(1)药物敏感试验的准确度与精确度受多种因素

的影响，如细菌的接种量、试验稳定性、培养基

的质量和操作员的熟练程度等。培养基批号改变

或质量差，以及抗菌药物纸片在实验室操作和贮

存过程中活性下降或失效是常见的影响因素。

(2)4按美国NCCLS规定：质控菌株应按标准方法

与临床标本分离株同步进行药敏试验。更换药物

或培养基时必须用相应质控菌株试验。

(3)所有质控菌株在实行常规监控(一周一次质

控)前应连续监测30天。对每种药、每种菌，

30次试验中失控结果不能超过3天。如果30天

监控结果完全符合上述要求，可转为一周一次质

控。如果出现一个抑菌环直径超过允许的质控范

围时，需要采取纠正措施。当失控原因不明时，

可用相应质控菌株连续测试5大；并且证实对每

个药物/细菌组合，所有5个抑菌环直径(即每

个组合连续5天的抑菌环直径)都在可接受范围

内。如果问题不能马上解决(即至少一个抑菌环

直径仍在质控允许范围外)，就必须进行每日质

控直至最终得到解决。将来恢复每周质控前，必

须有记录实证又有连续30个试验日有满意表

现。

(4)质控菌株的保存：

(5)使用中的质控菌应贮存在胰大豆琼脂(非苛

养菌)，4〜8寸保存，每周传代一次。长期贮存,

可用含10〜15%甘油的胰大豆肉汤，脱纤维血或

脱脂牛奶，于-209甚至更低温度保存。应以不

明显改变菌株原有的抗菌谱为标准。

(6)每次使用前应把菌株传代到相应的平板上使

其获得单个的菌落。

(7)抗菌药物的贮存：

(8)装有纸片的容器应置于-2(rc以下低温保存。

使用前1〜2小时移出冰箱，平衡至室温后才能

打开。

(9)接种菌液浓度准备

(10)纸片扩散法：过夜培养的质控菌用生理盐

水配制成0.5麦氏单位，菌量为lX108CFU/mL。

(11)贴抗菌药物纸片：每两个纸片中心距离不

少于24mm,纸片一旦贴在某一位置上，不应变

动位置。贴完纸片后，应在15分钟内将平板反

转过来，置于35C孵箱培养16〜24小时。

(12)用游标尺量取抑菌环直径，以没有肉眼可

见生长区域为抑菌环边缘，极其细小菌落生长可

以忽略不计。由于培养基内胸腺喀唆和胸腺啥唉

核昔的影响，对于甲氧羊吟和磺胺甲恶嗖生长层

小于20%可忽略。

4.其他仪器设备质量控制

(1)培养箱的质量控制

每天第一个开箱和最后离开实验室的人员均应观察培养

箱的温度并作质量控制记录

(2)CO2培养箱的质量控制

每天应记录C02的含量，温度并作质量控制记录

(3)冰箱温度记录

按每一冰箱存放的物品不同设置不同温度范围，每天观

察并作质量控制记录

(4)低温冰箱质量控制

每天观察并记录一次，要求温度变化不超过设定范围的

上下2℃

(5)BDBACTEC9120血培养仪的质量控制

•不要使用过期培养瓶。

•不要使用出现裂缝或破损的培养瓶；将破

损培养瓶抛弃在适当地方。

•质量控制证书随同每箱培养瓶提供。质控

证书上列出测试所用微生物，包括按照

NCCLS标准及商业预制培养瓶质量保证进

行特异性培养的ATCCTM菌株。对于该培养

瓶，质控证书中列出的微生物的检测时间

W72小时。

•每批培养瓶进行阳性和阴性培养瓶试验以

检测其性能。阳性培养瓶中应接种

1.0ml0.5McFarland的大肠杆菌

ATCC25922或金黄色葡萄球菌ATCC29213V

此培养瓶和未接种培养瓶被同时放入仪器

中测试，在72小时内接种的培养瓶可被仪

器检测为阳性。阴性对照培养瓶应保挣阴

性。这表明这批培养瓶在储存条件和运输

方式上无不良影响。如果这两支培养瓶没

有出现预期的结果，在致电技术服务人员

前，不要使用该批培养瓶。

•每天上班开始工作前和下班离开前要检查

仪器的工作状态是否正常，仪器培养箱温

度内外是否一致；

•每天用中性的清洁液将仪器表面擦拭干

净；

•试剂批号更换需做质控；

•仪器检测数据每周星期六做备份；

•仪器每一个月做一次彻底的清洁保养，包

括清洁外壳、瓶孔、滤网等；

•仪器每年请工程师做一次检定工作。

（六）BDPHOENIX100全自动细菌鉴定和药敏分

析仪的质量控制

每天上班开始工作前和下班离开前要检查仪器的工作状态

是否正常；

每天用中性的清洁液将仪.器表面擦拭干净；

购买的新批号试剂都必须先做质控，质控合格后才能用于临

床检测；

仪器检测数据每周星期六做备份；

仪器每一个月做一次彻底的清洁保养，包括清洁外壳、卡片

架、滤网等；

仪器每年请工程师做一次检定工作。

表1-5常用细菌鉴定和药敏板的质控

板的类型质控菌株监测频率

每更换一批试剂和

金黄色葡萄球菌

阳性板更换定标板时做一

ATCC29213

次质控

每更换一批试剂和

大肠埃希菌

阴性板更换定标板时做一

ATCC25922

次质控

每更换一批试剂和

肺炎链球菌

链球菌板更换定标板时做一

ATCC49619

次质控

6、积极参加室间质评