临床 动物组织取材 实操实训｜手把手教学操作指南

一、实训前的系统准备演讲人2026-06-24目录01.实训前的系统准备02.不同类型动物组织的取材实操流程03.取材过程中的关键注意事项04.常见取材失误的规避与处理05.实训考核与能力提升路径06.实训总结临床动物组织取材实操实训｜手把手教学操作指南作为一名从事动物实验病理技术十余年的技术员，我见过太多新手在组织取材环节出错——要么取材量不合适导致固定不充分，要么粗暴操作破坏了靶组织的微观结构，甚至因为标识混乱导致后续实验数据失效。今天这套指南是我结合几十批实训学员的反馈、上千例实操样本的经验整理而来，从前期准备到收尾复盘全流程拆解，帮大家快速掌握这项病理实验的核心技能。01实训前的系统准备ONE实训前的系统准备这是整个取材流程的基础，任何环节的疏漏都会直接影响后续实验结果，我们按人员、物资、环境三个维度逐一梳理。人员防护与技能前置准备（1）标准防护装备穿戴：进入取材区域前必须完成二级防护，依次佩戴一次性医用外科口罩（接触感染性造模动物时更换N95口罩）、无粉乳胶手套（若接触高毒性样本则换用丁腈手套）、防水防渗透防护服、护目镜或防护面屏。我刚入行时曾因没戴护目镜，被飞溅的动物组织液溅到眼部，后续每次实训都会反复强调防护的必要性。（2）前置技能考核：所有参训人员需提前掌握动物解剖的基础流程，能准确识别常见实验动物的内脏结构，比如大鼠的肝脏分叶、小鼠的肾脏位置等，避免在取材时因解剖失误浪费标本。（3）器械预检查：提前清点所有取材器械，包括手术刀（10号刀片用于切割厚组织、15号刀片用于精细取材）、眼科镊（钝头镊用于托举组织，尖头镊用于剥离包膜）、组织剪、标本盒、标签纸等，并用75%酒精擦拭消毒操作台和器械托盘。实验物资与标本预处理（1）固定液配制：本次实训采用通用的4%多聚甲醛固定液，按10份固定液对应1份组织体积的比例提前配制，将多聚甲醛粉末溶解于0.01mol/L的PBS缓冲液中，加热至60℃完全溶解后冷却至室温，过滤后密封保存。需注意固定液不能反复冻融，且需提前分装为500ml/瓶，避免多次开盖污染。（2）动物标本预处理：对于刚处死的实验动物，先确认死亡状态（无呼吸、角膜反射消失），再用75%酒精喷洒体表消毒，随后按实验设计的解剖路径暴露术野：腹腔取材需先沿腹中线剪开皮肤，再剪开腹膜，避免皮肤毛发污染内脏标本；体表组织取材需先剥离皮肤，去除皮下脂肪后再切取目标组织。（3）标本分类标记：取材前需按动物编号、组织类型、取材日期提前制作标签，标签需包含“动物编号、组织名称、取材人、取材日期”四项核心信息，避免后续标本混淆。取材区域的规范布置（1）分区操作：将操作台划分为清洁区（摆放未使用的器械、固定液）和污染区（摆放已取材的标本、废弃物桶），两个区域间隔至少30cm，防止交叉污染。01（2）废弃物管理：在污染区旁放置两个专用废弃物桶，一个用于放置一次性耗材（手套、棉签），另一个用于放置沾染了感染性样本的器械和组织，所有废弃物需按医疗废物管理规范进行高压灭菌处理。02（3）环境消毒：取材前用含氯消毒剂擦拭操作台、地面和墙面，开启紫外灯照射30分钟，紫外灯关闭后需通风15分钟再进入操作区域。0302不同类型动物组织的取材实操流程ONE不同类型动物组织的取材实操流程这是本次实训的核心环节，我们先明确通用取材原则，再按不同组织类型拆解实操步骤。通用取材核心原则（1）靶组织优先+对照留存原则：必须精准获取实验设计要求的目标组织，同时留存至少1cm²的正常对照组织，比如取肿瘤组织时，需同时取肿瘤周围的正常组织，用于后续病理对照分析。（2）尺寸规范原则：取材组织的最大边长控制在1.5~2cm之间，厚度不超过3mm，这样才能保证固定液充分渗透，避免出现中心固定不全的情况。我见过不少新手为了省事取了5mm厚的组织，后续制片时中心区域出现染色不均的问题。（3）无挤压操作原则：严禁用锐器、硬质器械直接挤压组织，切割时需用手术刀沿组织长轴平滑切开，托举组织时需用钝头眼科镊轻轻托住组织底部，避免镊子挤压导致细胞变形。（4）包膜保留原则：对于带包膜的组织（如肝脏、肾脏、肿瘤），应尽量保留完整包膜，有助于维持组织形态，避免制片时组织崩解。常见组织取材实操示例肿瘤组织取材①操作步骤：先找到肿瘤组织的位置，观察肿瘤的边界、坏死区域和存活区域，用10号手术刀沿肿瘤边缘切开，切取包含肿瘤中心坏死区、存活区以及周围1~2mm正常组织的标本块，大小控制在1.5cm×1.5cm×0.3cm以内。01③个人实操经验：去年有个学员为了取到完整的肿瘤，用止血钳夹取肿瘤组织，导致肿瘤细胞大量挤压变形，后续HE染色根本看不到清晰的细胞结构，后来我带他用钝头镊托着肿瘤，用15号刀片轻轻切取，最终制片效果符合实验要求。03②注意事项：如果是多发肿瘤，需分别标记每个肿瘤的位置，避免混淆；对于体积较小的肿瘤（如小鼠皮下移植瘤），可直接完整切取肿瘤组织，再添加少量周围正常组织作为对照。02常见组织取材实操示例内脏组织取材（肝、肾、脾）①肝脏取材：取肝脏左外叶（无胆囊附着的肝叶），用手术刀切取1.5cm×1.5cm×0.3cm的组织块，避开胆囊和血管丰富的区域，避免组织出血影响固定效果。②肾脏取材：沿肾脏长轴切开，切取包含肾皮质、肾髓质和肾盂的组织块，大小控制在1.5cm×1cm×0.3cm以内，注意不要挤压肾皮质区域，因为肾皮质是病理观察的核心区域。③脾脏取材：切取脾脏的中上部组织，避开脾门血管区域，大小为1.5cm×1cm×0.3cm，因为脾脏的淋巴组织主要分布在中上部。常见组织取材实操示例皮肤组织取材①操作步骤：先确定皮肤病变的位置，比如溃疡、肿块等，用手术刀沿病变边缘切开，切取包含表皮、真皮、皮下组织的组织块，大小为2cm×1cm×0.3cm，同时标记皮肤的毛发方向，后续制片时需按毛发方向切片，才能保证观察结果的准确性。②注意事项：如果是皮肤溃疡标本，需同时取溃疡边缘的正常组织和溃疡中心的坏死组织，分别标记后放入不同的标本盒。常见组织取材实操示例神经系统组织取材①脑组织取材：先取出完整的大脑和小脑，用手术刀将大脑沿矢状面切开，切取包含大脑皮层、海马区、纹状体的组织块，大小为1.5cm×1cm×0.3cm；小脑则切取矢状面的组织块，包含小脑皮层和髓质区域。②注意事项：脑组织非常脆弱，取材时需用钝头镊轻轻托住组织，避免挤压导致皮层细胞脱落，同时需尽快放入固定液中，避免组织干燥变形。03取材过程中的关键注意事项ONE取材过程中的关键注意事项这部分是新手最容易忽略的细节，也是决定实验成败的关键环节。组织完整性保护STEP1STEP2STEP3（1）避免剪切损伤：严禁用组织剪直接剪切组织，因为剪刀的剪切力会挤压组织，导致细胞变形，需用手术刀切割组织。（2）避免脂肪污染：如果取材的组织带有较多脂肪，需用棉签轻轻擦去脂肪组织，避免脂肪滴附着在其他标本上，影响后续制片效果。（3）避免干燥：切取的组织需尽快放入固定液中，避免组织暴露在空气中时间过长导致干燥变形，一般要求在10分钟内完成取材并放入固定液。标识与溯源管理（1）标本盒标识：每个标本盒上需粘贴清晰的标签，包含动物编号、组织名称、取材人、取材日期，同时在标本盒内放入一张相同的标签，避免标签脱落导致标本混淆。（2）组织标记：对于多组织标本，需用记号笔在组织包膜上标记位置，比如“左肝叶”“肿瘤边缘”等，避免后续制片时无法确定组织的方位。生物安全防控（1）器械消毒：不同组织取材时需更换器械或用75%酒精擦拭消毒器械，防止交叉污染；如果接触了感染性样本，需立即将器械放入含氯消毒剂中浸泡30分钟，再进行高压灭菌处理。01（2）废弃物处理：所有接触过动物组织的耗材、器械，都要放入专用的感染性废弃物桶，严禁随意丢弃；取材结束后，需将废弃物桶密封后交由医疗废物处理机构处理。02（3）手部消毒：如果手套破损或接触了感染性样本，需立即更换手套，并用75%酒精消毒双手，再用流动水和洗手液清洗至少20秒。0304常见取材失误的规避与处理ONE常见取材失误的规避与处理在实训过程中，新手经常会出现以下几种失误，我们逐一讲解规避方法。组织挤压损伤010203（1）失误原因：主要是用尖头镊子夹取组织、用剪刀剪切组织、操作时用力过大导致组织变形。（2）规避方法：改用钝头眼科镊托举组织，用手术刀切割组织，操作时动作轻柔，避免用力挤压组织。（3）补救方法：如果已经出现轻微挤压损伤，可将组织放入4%多聚甲醛固定液中延长固定时间（从常规的24小时延长至48小时），后续制片时尽量避开挤压区域。靶组织遗漏（1）失误原因：没有准确识别靶组织的位置，或者在解剖过程中破坏了靶组织。（2）规避方法：取材前先观察动物标本的体表和内脏结构，标记靶组织的位置，再按标记位置取材；如果是造模的动物，可提前记录造模的部位和范围，方便快速找到靶组织。（3）补救方法：如果遗漏了靶组织，需重新解剖动物，再次取材，避免用错误的组织替代靶组织。固定不充分（1）失误原因：取材组织太厚、固定液比例不足（固定液与组织的比例低于10:1）、固定时间过短。（2）规避方法：严格按照尺寸规范取材，保证固定液与组织的比例不低于10:1，固定时间不少于24小时（室温下）。（3）补救方法：如果发现固定不充分，可将组织重新切薄至3mm以内，放入新鲜的4%多聚甲醛固定液中继续固定12~24小时，再进行后续制片。05实训考核与能力提升路径ONE实训考核与能力提升路径为了帮助参训人员快速掌握取材技能，我们设定了标准化的考核标准和课后练习方法。实训考核标准STEP1STEP2STEP3STEP4（1）规范性考核：取材组织的尺寸是否符合要求（边长1.5~2cm，厚度≤3mm）、是否留存了正常对照组织、是否标记了组织的方位。（2）完整性考核：组织是否有挤压损伤、是否有剪切损伤、是否保留了完整的包膜。（3）标识考核：标本盒和组织的标识是否清晰、完整，是否包含所有核心信息。（4）生物安全考核：是否遵守了防护规范、是否正确处理了废弃物、是否进行了手部消毒。课后练习方法（1）模拟练习：用猪的肝脏、肾脏等离体动物脏器进行模拟取材练习，反复练习切割组织的动作，掌握尺寸控制的技巧。（2）对比练习：将自己取材的组织与资深技术员取材的组织进行对比，找出差异，改进自己的操作方法。（3）复盘练习：每次取材后，记录自己的操作过程和出现的问题，每周进行一次复盘，总结经验教训。01030206实训总结ONE实训总结回头来