生物制药工艺学复习资料 考试要点 名词解释

1、生物制物：是一门从事各种生物药物的研究、生产、和制剂的综合性应用技术学科。

2、生物药物的特点：（I）在化学构成上十分接近于体内的正常生理物质，容易为机体吸收

利用，药理活性高；（2）治疗针对性强，治疗的生理生化机制合理，疗效可靠；（2）毒

性低、副作用小，营养价值高；生理副作用常有发生；（4）生物材料中的有效物质含量

低，杂质种类多且含量相对较高。（5）化学与生物学性质不稳定，对各种理化因素敏感,

生物活性易受影响。（6）生物材料易染菌，腐败.（7）生物药物制剂的特殊要求。

3、生物药物根据其化学本质和化学特征分为：微生物药物、天然生化药物、生物制品、基

因工程药物、基因药物。

4、抗生素：由生物（包括微生物、植物和动物）在其生命过程中所产生的一类在微量浓度

下就能选择性抑制它种生物或细胞生长的次级代谢产物。（在低微浓度卜即可对某些生物

的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称）

5、生物材料的选择的基本原则：有效成分含量高，原料新鲜、无污染：来源丰富、易得：

原料产地较近，价格低廉；原料中杂质含量少，便于分离纯化。

6、生物材料的选择：a.有效成分的含量（1）生物品种（2）合适的组织器官（3）生物的生

长期；b.杂质情况：难于分离的杂质会增加工艺的复杂性，严重影响收率、质量和经济

效益。c.来源：应选来源丰富的原料，最好能一物多用。

7、生物材料的采集与保存

a.采集：必须快速、及时速冻、低温保存。

b.保存方法：①冷冻法：速冻、冻干；②有机溶剂脱水，制成“丙酮粉”，③防腐剂保鲜

法：常用乙醇、苯酚.

8、有机溶剂提取的注意事项：

（I）pH值酸性物质在酸性条件下萃取；碱性物质在碱性条件下萃取；氨基酸等两性

电解质，则采用在等电点进行提取。

（2）盐析在提取液中加入适量中性盐，促使生化物质转入有机相，从而提高萃取率。

并且，盐析作用能减少有机溶剂在水中的溶解度，使提取液中的水分含量减少。

（3）温度室温或低温下操作

（4）乳化乳化层出现使有机相与水相分层困难。

9、消除乳化的方法：：过滤、离心、轻轻搅动、改变两相的比例、加热、加电解质（NaCI,

NaOH.HC1）、加吸附剂（CaCO3）o

10、活性物质的保护措施：1.采用缓冲系统2.添加保护剂3.抑制水解酶的作用4.其他

避免紫外光、强烈搅拌、过酸、过碱或高温。

II、生化制药中分离、制备方法的特点：

（1）生物材料组成复杂；（2）含量极微：（3）活性成分离开生物体后，易变性，破坏:

（4）分离几乎都在溶液中进行；（5）分离多采用温和的“多阶式”方式进行，即“逐级分

离操作时间长，手续繁琐。（6）生物产品最后均一性的评估，要采用多种方法。

12、浓缩是从低浓度的溶液除去水或溶剂，使之变为高浓度的溶液的过程。

13、干燥是使物质从固体或半固体状经除去存在的水分或它种溶剂，从而获得干燥物品的过

程。

14、常用自然选育的方法是单菌落分离法。

15、诱变育种：凡是利用诱变剂处理分散而均匀的微生物群体，促进其基因发生突变的育种

技术就称为诱变育种，

16、诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质称为诱变剂。

17、菌种退化的防止措施：①防止基因突变；②采用双重缺陷型；③制定科学管理制度；④

分离单菌落；⑤选择培养条件

18、菌种保藏的注意事项：

①整个保存处理过程中要防止杂菌污染，并一定要做无菌检查；

②保藏所用的菌种要在新鲜的斜面上生长丰满，生长时间不宜过长；

③保藏过程中要防止菌种退化现象的发生，要及时采用有效方法复壮，传代次数过多容

易退化；

④菌种制备过程是保持菌种优良特性的一个重要环节。

19、深层培养法的方式：⑴分批发酵⑵补料分批发酵⑶连续发酵

20、发酵的基本过程：

①培养基的配置、灭菌②大规模有活性、纯种的种子培养物的生产

③发酵罐中微生物在优化条件下大规模生产目的产物④发酵产物的分离提取

⑤发酵废液的处理

21、泡沫的影响及控制：

①筛选不产生流态泡沫的菌种；②调整培养基中的成分；

③改变某些物理化学参数；④改变发酵工艺；⑤采用机械消沫或消沫剂消沫

22、载体：是指一个能够进行自我复制的复制子，它必须能携带外来DNA进入指定的受体

细胞、并在受体细胞为稳定保存、复制、扩增。常用载体：质粒、噬菌体、病毒。

23、外源DNA与载体分子的连接方式：⑴黏末端连接⑵平端连接⑶同聚物加尾法

（4）人工接头连接

24、转化：将质粒DNA或以质粒为载体构建的重组DNA导入细胞的方法。

25、转染：噬菌体、病毒或以其为载体的重组DNA导入细胞的过程。

26、动物细胞培养法微载体培养的微载体需具备的条件：

①微载体表面性质与细胞有良好的相容性；②微载体的材料无毒性；③微载体的材料是

惰性的；④具有良好的光学透明性；⑤基质的性质最好是软性的；⑥可耐120C高温；

⑦原料充分，价格低廉，可重复使用。

27、酶的分子修饰：通过各种方法使酶分子的结构发生改变，从而改变酶的某些特性和功能

的技术过程。

28、酶的固定化是指将睡固定在载体上升在一定的空间范围内进行催化反应。

29、酶的固定化方法：⑴吸附法⑵包埋法⑶交联法⑷共价结合法

30、怎样减少酶活力的损失？

答：反应条件温和；加入抑制剂、底物或产物保护酶的活性中心。

31、（1）必需氨基酸：苏氨酸、缴氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、

蛋氨酸

（2）半必需氨基酸：精氨酸、组氨酸

（3）赖氨酸是幼儿所必需的。

32、氨基酸类药物的生产方法：水解法、发酵法、酶转化法、化学合成法。

33、三种水解法的比较

名称水解条件优点缺点注

酸水解法用6〜10mol/LHQ（或1.8-水解完全彻色氨酸全被破工业生产常

2倍工业HC1或4mol/L底，全部是L坏：丝氨酸部采用

），在110〜120°C一氨基酸，不分被破坏；腐

下，水解12〜24h引起氨基酸蚀设备；劳动

消旋作用条件差；产生

大量废酸

碱水解法用6mol/LNaOH或水解完全，色氨基酸发生消一般很少采

2mol/L,氨酸不被破旋作用;丝氨用

在100°C水解6h坏，不腐蚀设酸、精氨酸、

备苏氨酸、胱氨

酸等大部分被

破坏

酶水解法用胰酶或胰浆、微生物蛋白反应条件温水解不彻底；用于制造蛋

酶等，在适宜的PH、温度、和；氨基酸不中间产物多肽白陈、水解蛋

一定的时间和酹浓度下水波破坏；不发类较多；一般口、氨基酸生

解蛋白质生消旋作用；时间较长；易产比较少用

设备简单；劳污染菌

动条件较好

34、天冬氨酸与丙氨酸的酶转化反应:

CH-COOHH（X）C-CH2~CH-C（）（）H上上但脱灯L

NH,

CH3-CH-C（X）H+C（）2f

NH）♦

35、酶拆分法制备L・苯丙氨酸的原理：

DL-Phe与醋酸酊反应生成Ac-DL-Phe,氨基酰化酶可专一性水解Ac-L-Phe的酰氨键生

成L-Phe,而不水解Ac-D-Phe酰氨键，再利用L-Phc与Ac-D-Phe在水中的溶解度的差

异进行分离，Ac-D-Phe又可经消旋生成Ac-DL-Phe,再进行水解和分离。如此反复进

行，可将DL-Phc全部转化为L-Phc。

36、氨基酸输液：多种结晶L-氨基酸依特定比例混合制成的静脉内输注液称氨基酸输液。

37、蛋白质提纯的一般方法：

（I）根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质。（2）根据蛋白质分子形状和大小不同来

纯化蛋白质。（3）根据溶解度的不同来纯化蛋白质（4）根据电离性质的不同来纯化

蛋白质。（5）根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质（6）根据蛋白质疏水基团与

相应的载体基团结合来纯化蛋白质。（7）根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋

白质（8）根据蛋白质的选择性吸附性质来纯化蛋白质。（9）根据酶对蛋白质的作用来

纯化蛋白质。

38、基因工程法制备蛋白质多肽类药物的优点：

①可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽；②提供足够数量的生理活性物

质，以便对其进行深入研究，扩大应用范围；③生理活性物质作为药物使用时存在的

不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；④利用基因工程可获得

新型化合物，扩大药物来源。

39、干扰素的工艺过程：①分离灰黄层②NH4C1处理，溶解残存的红细胞。③起动诱

生，加入人a-IFN④正式诱生，加入仙台病毒（在鸡胚中培养）⑤收获，将培养物

离心，上清液即为粗制a-IFN⑥纯化

40、胰岛素的基本性质：胰岛素为白色或类白色的扁斜形六面体结晶粉末，难溶于水，易

溶于稀酸或稀碱溶液，也易溶于80%以下的乙醉或丙酮。在90%以上乙醇或80%以上

丙酮中难溶。在高浓度锌的溶液中pH6〜8时胰岛素溶解度急剧下降。pl为5.30-5.35

分子量5733。易与Zn2+,Cd2+,Co2+等2价金属离子结合。在锌盐存在下，胰岛素的

pl可增至6.0左右。

41、核酸类药物：是指具有药用价值的核酸、核甘酸、核甘及碱基.

42、核酸类药物分类：第一类为具有天然结构的核酸类物质，如：ATP、GTP、CTP、UTP、

IMP、CoA、CoI（NAD+）、CoII（NADP+）；第二类为自然结构核酸类物质的类似物和

聚合物，主要有叠氮胸甘、阿糖腺首、阿糖胞甘、聚肌胞等。

43、工业用DNA的提取：从冷冻鱼精中提取。鱼精中主要含有核蛋白、酶类以及多种微最

元素。核蛋白的主要成分是脱氧核糖核酸（DNA）和碱性蛋白质（鱼精蛋白），其中DNA占

大约2/3。

44、具有生物活性DNA的制备：

可从动物内脏（肝、理、胸腺）中提取制备，操作条件0〜3℃。

动物内脏加4倍量生理盐水经组织捣碎机捣碎I分钟，匀浆于2500rpm离心30分钟，

沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次，每次洗涤后因心，将沉淀悬浮于20倍量的冷生

理盐水中，再捣碎3分钟，加入2倍显5%十二烷基磺酸钠，并搅拌2〜3小时，在0℃

2500rpm离心，在上层液中加入等体积的冷乙醇，离心即可得纤维状DNA,再用冷乙

醇和丙酮洗涤，减压低温干燥得粗品DNA。

45、叠氮胸昔（AZT）是世界上第一个治疗艾滋病的药物。

46、对医用抗生素的评价应包括以下要求：

（1）它应有较大的差异毒力，即对宿主人体组织和或正常细胞只是轻微毒性而对某些

致病菌或突变肿瘤细抱有强大的毒害。（2）它能在人体内发挥其抗生效能、而不被人体

中血液、脑脊液等所破坏，同时它不应大量与体内血清蛋白产生不可逆的结合。（3）在

给药后应较快地被吸收，并迅速分布至被感染的器官或组织中。（4）致病菌在体内对该

抗生素不易产生耐药性。（5）不易引起过敏反应。（6）具备较好的理化性质和稳定性，

以利于提取、制剂和贮藏。

47、氯霉素：第一个应用全化学合成法生产的抗生素。

48、影响需氧和供氧的因素：

（1）影响需氧的因素：①微生物的种类和生长阶段②培养基的组成和浓度@CO2

（2）影响供氧的因素：①搅拌②空气流速③发酵液的物理性质④泡沫

49、生物制品：凡是从微生物及其代谢产物、原虫、动物毒素、人或动物的血液或组织直接

加T制成，或用现代生物技术、化学方法制成，作为预防、治疗.、诊断特定传染病或其

他有关疾病的免疫制剂。

50、疫苗：细菌，病毒，螺旋体，立克次体和类毒素等抗原性生物制品统称为疫苗。

51、减毒活疫苗：用人工定向变异或从自然界筛选得到的毒力高度减弱或基本无毒的病原微

生物制成的预防制剂，

52、类毒素：细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处理，使其毒性减弱而保留其免疫原性。

53、新型疫苗：（1）亚单位疫苗（2）合成肽疫苗（3）基因工程疫苗

54、抗毒素：利用类病毒注射动物，产生特异性抗体，经采血、分离、纯化后制成的产品。

如：破伤风抗毒素，白喉抗毒素等。

55、抗毒血清：用病毒作抗原免疫动物制备的含有抗体的血清生物制品。如：抗蛇毒血清。

56、疫苗：一切通过注射或黏膜途径接种，可以诱导机体产生针对特定致病原的特异性抗体

或细胞免疫，从而使机体获得保护或消灭该致病原能力的生物制品统称为疫苗，包括蛋

白质、多糖、核酸、活载体或感染因子。

57、疫苗按生物来源一般分：细菌及类毒素疫苗、病毒性疫苗、蛋白疫苗、核酸疫苗四大类。

考试要点

1.抗生素：由生物在其生.命过程中产生的一类在低浓度下能选择性抑制他种生物或细胞生长

的生理活性物质及其衍生物。

2.生物制品：用微生物及其代谢产物、原虫、动物病毒素、人、或动物血液或组织等直接加

工制成，或用现代生物技术方法制备的，用于预防、治疗、诊断特定传染病或其他有关疾病

的药品。疫苗、抗血清、抗毒素、类毒素、免疫制剂、诊断制剂等。

3.生化制药技术基本原理：一、利用，混合物中几个组分分配系数的差异，把它们分配到两

个或几个相中（盐析、有机溶剂提取、层析、结晶）二、将混合物置于单一物相中，通过物

理力场的作用使各组分分配于不同区域（离心、超滤、电泳）

4.生化制药基本工艺：材料的选择及预处理，组织与细胞的破碎及细胞的分离，活性物质的

提取和纯化，活性物质的浓缩、干燥和保存。

5.胰脏：“酶库”

6.放线菌是抗生素生产菌

7.生物材料选择的基本原则：有效成分高、原料新鲜。（动物：年龄与性别。采集后立即出

去结缔组织、脂肪组织，速冻。）（植物：生长季节最佳采集时间。择时采集并就地去除不需

要部分，有用部分保鲜处理）（微生物：对数生长期，酶和核酸含量最高。以微生物为材料

时的两种情况：一、利用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶。二、利用菌体含

有的带白纸、核酸和胞内酶。及时将菌体细胞与培养液分开。）

8.机械破碎：组织捣碎法、匀浆器破碎、研磨器破碎

9.物理：超声波破碎（降温）、渗透压法、温度差法

10.化学：1）溶剂处理，丙酮、甲苯、丁醇、氯仿。

2）表面活性剂处理：十二烷基硫酸钠、氯化十二烷基毗咤、吐温和胆酸盐。

11.酶学：1）自溶法，在定PH和适当的温度下，利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎的方

法。此过程需较长时间，常用少量防腐剂如甲苯、氯仿等防止细胞的污染。

2）酶溶法利用各种水解酶，如溶菌睑、纤维素的、蜗牛酶、半纤维素酶、脂酶等，将细胞壁分

解，使细胞内含物释放出来

12.细胞器分离：差速离心。离心介质：蔗糖、葡聚糖、聚乙一醇。

13.提取：在一定条件下，用一定的溶剂处理样品，使被提取的生物大分子充分释放出来。

固液提取、液液提取。溶解度大小（相似相容、少量多次）、固相扩散到液相的难易程度。

14.提取方法：水溶液。表面活性剂（SDS提取核酸）水盐系统难以提取的蛋白质、酶、核

酸。有机溶剂（乙醇、丙酮、丁醇〉脂类、脂蛋白、膜蛋白结合酶

15.生物活性物质的分离纯化：1沉淀法：盐析、等电点、有机溶剂。2.膜分离法：透析、超

滤。3.层析：吸附、离子交换、凝胶、亲和。4.电泳：纸、薄膜、薄层、凝胶、等电聚焦。

5.离心：差速、等密度（浮力密度差。离心介质：氯化钠）、密度梯度（颗粒大小不同而密

度相近的组分:DNA与RNA的混合物、核蛋白体亚单位及线粒体、溶酶体及过氧化物酶体）。

16.浓缩：粗分离：盐析、有机溶剂法、减压薄膜浓缩、超滤法。精制分离纯化：吸收法、

超滤法、有机溶剂沉淀。

17.干燥：真空干燥、冷冻干燥

18.保藏：干粉保藏、液态保藏

19.菌种保藏：①斜面低温保藏：菌种接种在固体斜面培养基上，充分生长后，置2~8'C冰箱

保藏。霉菌、放线菌和有芽狗细菌、酵母菌②液体石蜡俣藏：斜面菌种加入液体石蜡高出斜

面顶端1cm,使隔绝空气。直立、低温保存。霉菌、放线菌、芽泡细菌、酵母菌、无芽抱细

菌、脑膜炎球菌。③沙土管保藏法：一份黄土三分沙混合均匀装入安吸管，灭菌烘干，无菌

水洗下培养成熟的菌种，制成狗子悬液，加入管中搅匀，使抱子吸附在沙土中，真空泵抽干。

能产抱子的霉菌、放线菌。④液氮冷冻保藏：用保护剂将菌种制成菌悬液密封于安瞰管，经

控制速度冷冻后，置于一196~—150C的液氮保藏器或液氮超低温冰箱中保存。防止菌种退

化。支原体、衣原体、氢细菌、难以形成胞子的霉菌、噬菌体及动物细胞。⑤冷冻干燥保藏

法：用保护剂将菌种制成菌悬液，快速冷冻，真空干燥、低温避光保存。生命力强的微生物

及其抱子以及无芽胞菌、摘膜炎球菌、淋病。

20.前体：在产物的生物合成中。被菌体直接用于合成产物而自身结构没有显著改变的物质。

21.接种量：移入种子液的体积和接种后培养液体积的比例。

22.预处理的目的：使发酵液中的蛋白质和杂质沉淀，增加过滤速度，有利于后续工作，并

尽可能地使产物转入便于以后处理的相中。（酸化、加热、加絮凝剂）

23.诱导剂：使代谢途径或代谢强度改变的物质。调节代谢进程的某些酹活性，并能对某些

关键酶在转录水平上进行调节，包括一些无机盐、真菌提取液、葡聚糖。

24.反义技术：根据碱基互补原理，通过人工合成或者是生物合成的特定互补的DNA或RNA

片段，抑制或封闭某些基因表达的技术。

25.多肽与蛋白质类药物材料•：动物脑垂体制造的生长素对人体无效，幼年动物胸腺发达。

26.有机溶剂沉淀法：利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度不同，从而使不同

的蛋白质得到分离。

27.前单位：1分钟内能转化Iuml底物的能量。

28.多肽类药物p72、酶类药物p95

29.低聚糖的生理功能：①低热值、能防肥胖②一直腐败菌生长繁殖③促进肠道中有益菌群

双歧杆菌的增殖④抗踽齿、抗肿瘤。

30.多糖的纯化：乙醇沉淀法、分级沉淀法、季筱盐络合法、离子交换层析法。

31.W-3,不饱和键自脂肪酸碳链甲基端的第3位碳原子开始。

32.牛黄为病牛胆囊、胆管及肝管中结石。

33.真菌产抗生素：青霉素、头抱菌素

34.斯巴德疫苗之父

35,类毒素：有关细菌产生的外毒素经脱毒后制成。白喉、破伤风、肉毒素及锚萄糖球菌类

毒素

36.人工主动免疫：人为给机体输入疫苗、类毒素等抗原性生物制品。使免疫系统因抗原的

刺激而产生类似感染时所发生的免疫过程，从而产生特异性免疫力。

37.人工被动免疫：人为将抗毒素、正常人免疫球蛋白等现成免疫效应物质输入机体，是机

体立即获得特异性免疫力，以达到某些疾病防治的目的。

38.体液免疫：B细胞产生抗体。细胞免疫：淋巴细胞执行免疫功能。

39.灭活疫苗：用物理或化学方法将病原微生物杀死或灭活后制备的生物制品，如霍乱南苗、

百日咳菌苗。多次接种，注射量大,

40.减毒活疫苗：人工筛选或诱导变异制备的使毒力高度减弱或基本无毒的活生物制品，

41.亚单位疫苗：提取病原微生物体内能刺激机体产生保护性免疫的有效抗原成分制备的疫

苗。乙肝亚单位疫苗。

42.合成肽疫苗：依据有效免疫原性肽段的氨基酸序列设计与合成免疫原状性多肽。

43.基因工程疫苗：将编码免疫原的基因进行克隆、修饰、改造并借助载体转移至另一生物

体基因组中，使之表达并产生所需抗原肽而制成的疫苗。

44.病毒的繁殖：动物培养、鸡胚培养、组织培养、细胞培养、

疫苗的灭活：甲醛溶液（乙型脑炎疫苗）、酚溶液（狂犬病疫苗）

45.冻干：将疫苗冷冻至共熔点以下;在真空状态下将水分直接由固态升华为气态;缓慢升温，

不使疫苗在任何时间下有融解情况发生：冻干好的疫苗在真空或充氮后密封保存，是其残留

水分不超过3%

46.杀菌：热杀菌法、甲醉溶液杀菌、丙酮杀死伤寒杆菌

47.MLD：minimallethaldose最小致死剂量。MID：minimalinfectiousdose最小感染最。

ED50.ID50：50%有效免疫剂量。LD5O:5O%致死剂量

48.保护指数（免疫指数）：动物经制品免疫后，其耐受毒菌或活毒攻击量相当于未免疫动物

耐受量的倍数为保护指数，

49.絮状单位（L1）：能喝一个单位抗毒素首先发生絮状沉淀反应的（类）毒素量，即为一个

絮状单位。表示类毒素或抗毒素的效价。

50.卡介苗：Calmette和Guerin经历十三年，传了231代

5LDNA重组药（基因工程药物）：利用DNA重组技术研制和生产的药物，主要包括重组蛋

白质药物、多肽药物、反义核酸药物、DNA药物和基因工程抗体等。

52.基因治疗:p201

53反义RNA：与mRNA互补后，能抑制与疾病发生直接相关基因表达的RNA。

54.手性化合物分子空间构型的标记一半采用D、L或R、S命名法

55.不对称合成法：化学：在手性试剂、手性催化剂或手性溶剂的作用下，利用化学反应动

力学和热力学的差异合成单一-对映异构体。生物：利用酶或生物细胞为催化剂不对称合成手

性药物或手性中间体。

56.手性源合成法；以光学活性化合物为原料合成另一种新的光学活性化合物。

57.生物催化剂：以酶或整体细胞为生物催化剂所进行的化学反应。

名词解释

1药物：用于预防，治疗或诊断疾病或调节机体生理功能，促进机体

康复保健的物质，有4大类:预防药，治疗药,诊断药和康复保健药.

2生物药物：是以生物体,生物组织或其成份为原料（包括组织,细胞,

细胞器,细胞成分,代谢,排泄物）综合应用生物学、微生物学与免疫

学、物理化学与现代药学的原理与方法加工制成的药物.

3基因药物：是以基因物质（RNA或DNA及其衍生物）作为治疗的物

质基础，包括基因治疗用的重组目的DNA片段，重组疫苗，：反义药

物和核酶等.

4反义药物：是以人工合成的十至几十个反义寡核甘酸序列，它能与

模板DNA或mRNA互补形成稳定的双链结构，抑制靶基因的转录和

mRNA翻译，从而达到抗肿瘤和抗病毒作用

5生物制品:是应用普通的或以基因工程,细胞工程,蛋白质工程,发酵

工程等生物技术获得的微生物，细胞及各种动物和人源的组织和液

体等生物材料制备的,用于人类疾病预防,治疗和诊断的药品。

6RNA干涉：是指在生物体细胞内，dsRNA引起同源mRNA的特异性

降解，因而抑制相应基因表达的过程.

7siRNA:是一种小RNA分子（~21是5核甘酸）,由Dicer（RNAaseIII

家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成.siRNA是siRISC

（RNA-inducedsilencingcomplex由核酸内切酶，核酸外切酶，解旋

酶等构成，作用是对靶mRNA进行识别和切割）的主要成员，激发与之

互补的目标mRNA的沉默.

8酶工程：是从应用目的出发，研究酶和应用酶的特异催化功能，并通

过工程化过程将相应原料转化成所需产物的技术.

9固定化酶：是指借助于物理和化学的方法把酶束缚在一定空间内并

具有催化活性的酶制剂，酶经固定化以后稳定性有所提高，：而且可

以反复使用，并能实现反应连续化，自动化,简化产品的纯化工艺.

10原生质体融合：用脱壁醐处理将微生物细胞壁去除，制成原生质，

再用聚乙二醇（PEG）促进原生质体发生融合，从而获得融合子的技术.

11杂交育种：杂交育种一般指将两个基因型不同的菌株通过接合使

遗传物质重新组合,再从中分离和筛选出具有新性状的菌株.杂交后

的杂种不仅能克服原有菌种活力衰退的趋势，而且,杂交育种使得遗

传物质重新组合,扩大了变异范围，改善了产品的质量和产量.

12诱变育种：诱变育种是指有意识地将生物体暴露于物理的，化学的

或生物的一种或多种诱变因子下，促使生物体发生突变，进而从突变

体中筛选具有优良性状的突变株的过程.

13感受态细胞：在分子克隆过程中，宿主细胞需经过人工处理成能吸

收重组DNA分子的敏感细胞才能用于转化，此时的细胞称为感受态

细胞.

14原代细胞：是直接取自动物组织器官，经过分散，消化制得的细胞

悬液.

15二倍体细胞系：原代细胞经过传代,筛选,克隆,从而由多种细胞成

分的组织中挑选强化具有一定特性的细胞株，其特点是：1）染色体组

织仍然是2n的模型⑵具有明显贴壁依赖和接触抑制特性;3）具有

有限的增殖能力;4）无致癌性.

16盐析法:是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向

溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析此达到

纯化目的的方法.

17Ks盐析:在一定的pH和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析,

称作Ks盐析法,Ks盐析法多用于提取液的前期分离工作.

18B盐析:在一定离子强度下仅改变pH和温度进行盐析，称作8盐

析法.在分离的后期阶段，为了求得较好的分辨率，或者为了达到结晶

的目的,有时应用B盐析法.13盐析法由于溶质溶解度变化缓慢且变

化幅度小,沉淀分辨率比KS盐析法好.

19亲和沉淀：利用亲和反应原理,将配基与可溶性的载体偶联后形成

载体-配基复合物（亲和沉淀剂），该复合物可选择性地与蛋白质结合,

在一定条件下沉淀出来.

20吸附法:指利用吸附作用，将样品中的生物活性物质或杂质吸附于

适当的吸附剂上,利用吸附剂对活性物质和杂质间吸附能力的差异，

使目的物和其它物质分离,达到浓缩和提纯目的的方法.

21大网格高聚物吸附剂：在合成树脂时，加入一种惰性组分，它不参

与聚合反应，但能和单体互溶,称为致孔剂.待网络骨架固化和桂结

构单元形成后，用溶剂萃取或水洗蒸镭的方法将致孔剂去掉，就留下

了不受外界条件影响的永久孔隙，其孔径远大于2〜4n叫可达到

100nm甚至lOOOnn以上，故称〃大孔〃.与大孔网状离子交换树脂相

比,它不含离子交换树脂的功能团，仅保留了多孔的骨架,其性质与

活性炭,硅胶等吸附剂相似,称为大孔网状聚合物吸附剂.

22全排阻：当具有一定分子量分布的高聚物溶液从柱中通过时,较大

的分子完全不能进入颗粒内部，只能从颗粒间隙流过,称〃全排阻〃.其

流经体积最小,等于外水体积V0.

23类分离:将分子量极为悬殊的两类物质分开,如蛋白质与盐类,称作

类分离或组分离.选择凝胶时,应使样品中大分子组的分子量大于其

排阻限，而小分子组的分子量小于渗入限,大分子的分配系数Kd=O,

小分子的Kd=l.

24分级分离:将分子量相差不大的大分子物质加以分离，如分离血清

球蛋白与白蛋白，分级分离应尽量使待分离各物质的Kd值相差大些,

并使分子量分布不在凝胶分离范围的一侧.

25柱比:层析柱的长度与直径的比值一般称作〃柱比〃.

26操作压:凝胶层析柱由于进出口之间液位压力差形成的对凝胶颗粒

的压力称作〃操作压〃.石皮石卒整理第11页

27全渗入:被分离组分的分子量小于该种凝胶的渗入限,其分子可以

自由进出凝胶颗粒,这叫做〃全渗入〃.其流经体积最大，等于外水体

积与内水体积之和,V0+Vi.2（VelVe2）VelVe2Ve

28分离度Rs:Rs===W1+W22（o1+。2）4。式中Vel,Ve2

----对应于两个峰的淋出体积;Wl,W2和。1,o2两个峰宽度和

标准偏差.

29蛇笼树脂：由丙烯酸或甲基丙烯酸在季胺型阴离子交换树脂（如

Dowex）中聚合而成的一类树脂称蛇笼树脂.它是一种两性树脂，它适

宜于从有机物质（如甘油）水溶液中吸附盐类,再生时用水洗,就可将

吸着的离子洗下来.1Z1ml1Z2m21Z2C21Z1Cl

30尼柯尔斯基方程式：=K,即1Z1ml1Z2m2=K1Z1Cl1C2

2Z其中ml,m2及C1,C2分别代表树脂上和溶液中的两种离子的

浓度.K值的大小取决于树脂和交换离子的性质，以及交换条件.K>1

时说明离子A1比离子A2对树脂有较大的吸引力;反之,KG时树

脂对A2的吸引力大于A1.

31偶极离子排斥作用：许多生化物质都是两性物质.其中有些是偶极

离子.因为它们即使净电荷为零时,正电中心和负电中心并不重叠,遂

成偶极.偶极离子在离子交换过程中的行为是很特殊的.现以氨基酸

的离子交换为例.+S03Na++H3NRCCO+SO3H3NRCOO+Na

+式中由于使用了钠型树脂，被吸附氨基酸的竣基所带的负电荷与树

脂磺酸基之负电荷产生排斥力.这就是所谓偶极离子的排斥作用.因

此使树脂对氨基酸的吸附量大大降低.

32亲和反胶团萃取:是指在反胶团相中除通常的表面活性剂（如AOT）

以外,添加另一种亲水头部为目标分子的亲和配基的助表面活性剂，

通过亲和配基与目标分子的亲和结合作用，促进目标产物在反胶团相

的分配,提高目标产物的分配系数和反胶团萃取分离的选择性.

33亲和膜:利用亲和配基修饰微滤膜为亲和吸附介质亲和纯化目标蛋

白质，是固定床亲和层析的变型.将一张微滤膜比喻为一个固定床,则

膜厚即为床层高度.优点是传质阻力小，达到吸附平衡的时间短,配

基利用率高;压降小,流速快，设备体积小,配基用量低

34二次作用亲和沉淀:利用在物理场（如pH,离子强度，温度和添加

金属离子等）改变时溶解度下降,发生可逆性沉淀的水溶性聚合物为

载体固定亲和配基，制备亲和沉淀介质,亲和介质结合目标分子后，通

过改变物理场使介质与目标分子共同沉淀的方法成为二次作用亲和

沉淀.

35亲和萃取:利用聚乙二醇（PEG）/葡聚糖（Dx）或聚乙二醇/无机盐等

双水相系统萃取分离蛋白质等大生物分子，特别是胞内酶的双水相萃

取法.利用偶联亲和配基的PEG为成相聚合物进行目标产物的双水

相萃取，可在亲和配基的亲和结合作用下促进目标产物在PEG相（上

相）的分配,提高目标产物的分配系数和选择性.

36亲和吸附剂：由载体及配基偶联构成,在亲和层析中起可逆结合的

特异性物质称为配基（Ligand）,与配基结合的层析介质称为载体

(Matrix).

37负洗脱:在双底物反应中，与配基互补的酶的亲和吸附,如果吸附取

决于A物的存在与否，则洗脱液中除去A物时，吸附在配基上的互

补分子也会洗石皮石卒整理第17页脱下来，这种洗脱方法也称

负洗脱.

38相对离心力：由于各种离心机转子的半径或者离心管至旋转轴中心

的距离不同，离心力而受变化,RCF就是实际离心场转化为重力加速

度的倍数.

39离心力：在一定角度速度下作圆周运动的任何物体都受到的向外

的力.离心力(Fc)的大小等于离心加速度32r与颗粒质量m的乘积,

即：F=m32r.

40沉降速度：即在离心力作用下,物质粒子于单位时间内沿离心力方

向移动的距离.

41沉降系数:在单位离心力场中，颗粒的沉降速度谓之〃沉降系数〃.

42不对称膜:又称各相异性膜,该类膜正反两方面不一样,膜质分为两

层,其功能层是具有一定孔径决定膜的选择性透过，另一层是孔径大

得多的支持层，它增大了膜的机械强度，又使膜不易堵塞.对称膜易

于堵塞.

43超滤:超过滤(简称超滤)是一项分子级膜分离手段，以压力差为推

动力将不同分子量的物质进行选择性分离.一般用于液相分离，也可

用于气相分离.

44浓差极化现象:外源压力迫使分子量较小的溶质通过薄膜,大分子

被截留于膜表面,并逐渐形成浓度梯度,这就是浓差极化现象.

45容量因子:是色谱分析中的重要参数,定义为溶质在固定相中的总

摩尔数与流动相中总摩尔数之比.当色谱柱,溶剂和分离温度一定时，

容量因子为常数.

46分离度：在色谱分析中，表示各组份之间分离程度的参数.其定义

为相邻两色谱峰保留值之差与峰底宽之和一半的比值.R二tr21t

rl21(W2=)2(tr21t+Wrl2)+WW

填空题

1我国药物的三大药源指的是(1)化学药物(2)生物药物(3)中

药

2现代生物药物已形成四大类型包括1基因重组多肽和蛋白质2基因

药物3天然生化药物4合成与部分合成的生物药物.

3请写出下列药物英文的中文全称：lIFN(Interferon)干扰素

IL(Interleukin)2白介素3CSF(ColonyStimulatingFactor)集落

刺激因子4EPO(Erythropoietin)促红细胞生成素5EGF(Epidermal

GrowthFactor)表皮生长因子6NGF(NerveGrowthFactor)神经生长

因子7rhGH(RecombinantHumanGrowthHormone)重组人生长激素

8Tns(Insulin)9腹岛素10HCG(HumanChoriogonadotrophin)人绒

毛膜促性腺激素11LI1促黄体生成素12SOD超氧化物歧化酶13tPA

14组织纤溶酶原激活物

4常用的内酰胺类抗生素有青霉素，头泡菌素，氨基糖甘类抗生

素有链霉素，大环内酯类抗生素有红霉素；四环类抗生素土霉素有；

多肽类抗生素有杆菌肽；多烯类抗生素有两性霉；慈环类抗生素有

阿霉素.

5嵌合抗体是指用人源抗体恒定区替换鼠源抗体恒定区，保留抗体

可变区；；人源化抗体是指抗体可变区中CDR(决定簇互补区)仅

FR(骨架区)为鼠源，其及恒定区均来自人源.

6基因工程技术中常用的基因载体有1质粒2噬菌体(phage)3黏粒

(cosmid)4病毒载体.等.

7从生物材料中提取天然大分子药物时，常采用的措施有1采用缓冲

系统2添加保护剂3抑制水解酶作用等.

8生化活性物质浓缩可采用的方法有1盐析浓缩2有机溶剂沉淀浓缩

3超滤浓缩4真空减压浓缩或薄膜浓缩5用葡聚糖凝胶浓缩6用聚乙

二醇浓缩.

9生化活性物质常月的干燥方法有1减压干燥2喷雾干燥3冷冻干

燥.

10冷冻干燥是在低温,低压，条件下，利用水的升华性能而进行的

一种干燥方法.

11微生物菌种的分离和纯化可以用的方法有1平板划线法2稀释后

涂布平板法.

12微生物菌种的自然选育是指利用微生物在一定条件下产生自发突

变的原理，通过分离，筛选排除衰变型菌落，选择维持原有生产水平

的菌株.

13诱变时选择出发菌株时应考虑出发菌株的稳定性,选用具备某种

优良特性,对诱变剂敏感,菌种的生理状态及生长发育时间等问题.

14目前常用的诱变剂可分为1物理诱变因子2化学诱变剂3生物诱

变因子三大类.

15常用的菌种保藏方法有：1斜面低温保藏法2液体石蜡封藏法3冷

冻干燥保臧法4液氮超低温保藏法5甘油保藏法6沙土管保藏碳源

等.

16微生物生长需要的六大营养要素是1氮源2能源3生长因子4无

机盐5水6碳源

17生物药物制备过程中，常用的灭菌及除菌方法有1加热灭菌2辐射

灭菌（紫外杀菌）3介质过滤除菌4化学灭菌法

18获得具有遗传信息的目的基因的方法有1鸟枪克隆法（DNA文

库）cDNA文库法2化学合成法3PCR法

19PCR由高温变性、低温退火、适温延伸3个基本反应组成

20基因工程中原核表达常用的宿主有大肠杆菌，枯草杆菌；等;常用

的真核表达系统有酵母，动物（植物）细胞，等.

21,大肠杆菌表达系统的缺点是不能进行翻译后加工（糖基化），因

而像EP0等基因的表达需使用真核（酵母）表达系统.

22分泌表达是指将目的基因嵌合在信号肽基因下游进行表达，从而

使目的基因分泌到细胞周质或培养基中.

23固定化酶常采用的方法可分为1吸附2包埋3交联4共价键结合

四大类

24下面酣固定化示例图分别代表哪种固定化方法：.A.吸附B.共

价键结合C.交联D.包埋

25.固相析出法主要包括1盐析法2有机溶剂沉淀法3等电点沉淀法

4结晶法5淀方法等.

26按照一般的习惯,析出物为晶体时称为结晶法，析出物为无定形固

体则称为沉淀法.

27.影响盐析的因素有：1无机盐的种类2溶质的种类3蛋白质的种

类4温度5PH的影响

28结晶包括三个过程：（1）形成过饱和溶液（2）晶核形成（3）晶体生

长.

29影晶体大小的主要因素,归纳起来与1过饱和度2温度3搅拌速度

4晶种.等直接有关

30.晶体的质量主要是指晶体的大小，形状，纯度等3个方面

31吸附剂按其化学结构可分为两大类:一类是有机吸附剂，如如活

性炭,淀粉,另一类是无机吸附剂大孔吸附树脂，白陶土,氧化铝,硅胶,

硅藻土.

32,常用的吸附剂有1活性炭2硅胶3白陶土等.

33大孔网状聚合物吸附剂是在树脂聚合时加入惰性致孔剂,待网格

骨架固化和链结构单元形成后，用溶剂萃取或蒸储水洗将致孔剂去掉,

形成不受外界环境条件影响的，其孔径远大于2〜4nm,可达孔

隙，100nm.,故称〃大孔〃.

34,大孔网状聚合物吸附剂按骨架的极性强弱，可分为1非极性2中

等极性3极性4强极性等吸附剂四类

35,凝胶层析的分离原理有1平衡排除理论2扩散分离理论3流动分

离理论.这三种分离原理是互相补充的，在通常情况下平衡排除理论

起主导作用；扩散分离理论的作用随流速增加而加强；只有在流速很

高时流动分离理论才起作用.

36琼脂糖凝胶的一个特征是分离的分子量范围非常大,其分离范围随

着凝胶浓度上升而下降,颗粒强度随浓度上升而提高

37凝胶粒度的大小对分离效果有直接的影响.一般来说,细粒凝胶柱

流速低，洗脱峰窄，分辨率，多用于等.粗粒凝胶柱流速高，洗脱峰

平坦,分辨率高，多用于精制分离等.

38在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大25倍以

上的柱体积，25以上的柱比，较大吸液量，较细粒的凝胶固定相.

39溶质通过色谱柱时造成的峰加宽效应包括分子扩散,涡流扩散,流

动相中传质阻力，固定相中传质阻力.，

40葡聚糖凝胶的孔径大小取决于交联度，其越小，凝胶孔径越大；

而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于琼脂糖浓度.•

41离子交换剂由，惰性的不溶性载体，功能基团和，平衡离子组成.

平衡离子带，正电荷为阳离子交换树脂，平衡离子带负电荷.称阴

离子交换树脂.

42,常见的离子交换剂有离子交换树脂，离子交换纤维素，葡聚糖凝

胶离子交换剂等.

43,离子交换树脂的基本要求有有尽可能大的交换容量，有良好的交

换选择性,化学性质稳定，化学动力学性能好和物理性能好•・・

44,影响离子交换选择性的因素主要有离子价与离子水合半径,离子

价与离子浓度，交换环境，树脂结构，偶极离子排斥，等.

45,请写出下列离子交换剂的名称和类型:CM-C的名称是竣甲基纤

维素，属于弱酸型阳离交换纤维素；DEAE-C的名称是二乙基氨基乙

基纤维素，属于子强碱型阴离子交换纤维素；.46,色谱聚焦

（chromatofocusing）是一种高分辨的新型的蛋白质纯化技术.它是根

据蛋白质的等电点，，结合离子交换技术的大容量色谱，能分离几百

毫克蛋白质样品,洗脱峰被聚焦效应浓缩,分辨率很高,操作简单.

47,写出下列离子交换剂类型:732强酸型阳离子交换树脂,724弱酸

型阳离子交换树脂,717强碱型阴离子交换树脂,CM-C阳离子交换纤

维素，DEAE-C,阴离子交换纤维素，PBE94,阴离子交换剂..

48,在采用多缓冲俄离子交换剂作固定相的离子交换聚焦色谱过程中,

当柱中某位点之pH值下降到蛋白质组分PI（等电点），值以下时，它

因带正电荷而下移,如果柱中有两种蛋白组分,pl值较大（高）

者会超过另一组分,移动至柱下部pH较高的位点进行聚焦.

49,影响离子交换选择性的因素有影离子水合半径,离子价与离子浓

度,交换环境,树脂结构，偶极离子排斥.

50亲和层析洗脱方法有非专一性洗脱，特殊洗脱，专一性洗脱.，

51亲和力大小除由亲和对本身的解离常数

52亲和层析中常用作分离酶的配基有酶抑制剂，辅酶，底物，底物结

构类似物.4,亲和层析中非专一性吸附有离子效应,疏水基团，复合亲

和力.

53亲和过滤指的是将亲和层析和膜过滤技术亲和纯化技术，.决

定外，还受许多因素的影响，其中包括，亲和错流过滤，亲和膜分

离.，，，，结合运用

54制备型离心机的转子有角度转子，水平转子，垂直转子，区带转

子.

55密度梯度的制备方法有,亲和错流过滤,亲和膜分离.反复冻融法，

56梯度的取出和收集方法：取代法，穿刺法,切割法，虹吸法.

57微孔滤膜孔径检测方法有气泡压力法，细菌过滤法，水流量法，

58克服浓差极化现象的措施有震动，搅拌，错流，切流，

59实验用超滤器的类型有，无搅拌式装置，搅拌或振动式装置，

小棒超滤器，浅道系统超滤装置（中孔纤维系统超滤器）.

60制备型高效液相色谱的重要参数:分离度，分离速度，回收率，样品

载量.

61色谱介质按分离机理分为反相色谱,正相色谱,离子交换色谱,凝胶

过滤色谱，亲和色谱.

62蛋白质分离的主要依据有分子量,等电点,疏水性,结构特异性

简答题

1基因重组药物与基因药物有什么区别？答:基因重组药物是指应用

重组DNA技术（包括基因工程技术和蛋白质工程技术）制造的重组多

肽，蛋白质类药物和疫苗，单克隆抗体与细胞因子等，药物的化学成

分属于多肽或蛋白质；基因药物是以基因物质（RNA或DNA及其衍生

物）作为治疗的物质基础，包括基因治疗用的重组目的DNA片段，

重组疫苗,反义药物和核酶等,药物的化学成分为核酸或其衍生物.

2,生物药物有那些作用特点？答：1）药理学特性有：药理活性高;治

疗针对性强;毒副作用较少，营养价值高；生理副作用常有发生等.2）

理化特性有:生物材料中的有效物质含量低,杂质种类多且含量相对

较高;生物活性物质组成结构复杂，稳定性差；生物材料易染菌，腐败;

生物药物制剂有特殊要求.

3,基因工程药物主要有哪几类?试举例说明.答:基因工程药物是指

应用基因工程或蛋白质工程技术制造的重组活性多肽，蛋白质及其修

饰物，包括：1）重组细胞因子类：如干扰素［IFN）白介素，（IL）和

肿瘤坏死因子（TNF）2）重组生长因子类：如表皮生长因子（EGF）;,

神经生长因子（NGF）,以及促进造血系统的生长因子：如促红细胞生

成素（EPO）,集落刺激因子等（CSF）3）重组多肽与蛋白质类激素:如

重组人胰岛素（rhlnsulin）;，重组人生长激素等（rhGH）4）心血管病

治疗剂及酶；制剂：如水蛭素，tPA（组织纤溶酶原激活物），天冬酰

胺酶，超氧化物歧化酶（SOD）等.5）重组疫苗及单抗制品：如重组乙肝

表面抗原疫苗（酵母），肿瘤疫苗等.

4生物药物分离制备的基本特点有哪些？答：1）生物材料组成非常复

杂；2）有些化合物在生物材料中含量极微;3）生物活性成分离开生物

体后，易变性破坏，因而须注意保护其生理活性;4）生物制药中的分

离方法常带有很大的经验成分⑸生物制药中的分离方法多采用温和

的〃多阶式〃方法进行;6）生物产品最后均一性的证明与化学上纯度

的概念不完全相同.

5简述单克隆抗体（monoclonalantibody）的制备原理.答:B细胞群

受抗原刺激后能产生针对抗原决定簇的特异性抗体，一个集体可产生

多达100万种特异性不同的抗体,但一个B细胞却只能分泌一种特

异性抗体.将B细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后，用有限稀释法把产

生不同抗体的杂交瘤细胞分开，挑选出单个杂交瘤细胞，每个杂交瘤

细胞只分泌一种特异性抗体.培养单个杂交瘤细胞，使之无性繁殖形

成细胞集落（称之为克隆），同一个克隆的杂交瘤基因相同，合成并分

泌的特异性抗体质地均一，这种抗体称为单克隆抗体.

6简述生物活性物质分离纯化的主要原理.答：生物大分子分离纯

化的主要原理是：1）根据分子形状和大小不同进行分离，如差速离心

与超离心，膜分离，凝胶过滤等⑵根据分子电离性质（带电性）差异

进行分离，如离子交换法，电泳法,等电聚焦法⑶根据分子极性大小

及溶解度不同进行分离,如溶剂提取法,逆流分配法,分配层析法，盐

析法，等电点沉淀及有机溶剂分级沉淀等;4）根据物质吸附性质的不

同进行分离，如选择性吸附与吸附层析等⑸根据配体特异性进行分

离，如亲和层析法等.

7什么是盐析作用?盐析的原理是什么？答:盐析作用：向蛋白质溶液

中逐渐加入中性盐,在高盐浓度时，蛋白质溶解度随之减小，发生了盐

析作用.产生盐析作用的一个原因是由于盐离子与蛋白质表面具相

反电性的离子基团结合，形成离子对，因此盐离子部分中和了蛋白质

的电性，使蛋白质分子之间电排斥作用减弱而能相互靠拢，聚集起来.

盐析作用的另一个原因是由于中性盐的亲水性比蛋白质大，盐离子在

水中发生水化而使蛋白质脱去了水化膜，暴露出疏水区域，由于疏水

区域的相互作用，使其沉淀.

8.如何选择盐析所用中性盐？（1）盐析作用要强.一般来说多价阴离

子的盐析作用强，有时多价阳离子反而使盐析作用降低.（2）盐析用

盐要有足够大的溶解度，且溶解度受温度影响应尽可能小.这样便于

获得高浓度盐溶液,有利于操作，尤其是在较低温度下的操作，不致造

成盐结晶析出，影响盐析效果.⑶盐析用盐在生物学上是惰性的,不

致影响蛋白质等生物分子的活性,最好不引入给分离或测定带来麻烦

的杂质.（4）来源丰富，经济.

9.有机溶剂沉淀的原理是什么？答:亲水性有机溶剂加入溶液后降低

了介质的介电常数，使溶质分子之间的静电引力增加，聚集形成沉淀；

水溶性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度，压缩了亲水

溶质分子表面原有水化层的厚度，降低了它的亲水性,导致脱水凝集.

10机溶剂沉淀影响沉淀效果的因素有那些？答：（1）有机溶剂种类及

用量（2）pH的影响（3）温度无机盐的含量（4）某些金属离子的助沉

淀作用（5）样品浓度

11简述吸附法的定义和特点.答:吸附法（adsorptionmethod）指利

用吸附作用，将样品中的生物活性物质或杂质吸附于适当的吸附剂上,

利用吸附剂对活性物质和杂质间吸附能力的差异，使目的物和其它

物质分离,达到浓缩和提纯目的的方法.吸附法具有下列特点：（1）设

备简单,操作简便,价廉,安全.（2）少用或不用有机溶剂，吸附与洗脱

过程中pH变化小，较少引起生物活性物质的变性失活.（3）天然吸

附剂（特别是无机吸附剂）的吸附性能和吸附条件较难控制，吸附选择

性差，收率不高，难以连续操作.

12,影响吸附的因素有哪些？答：①吸附剂的特性:吸附现象在界面

发生，因此吸附剂比表面积愈大,吸附量愈多.通过活化的方法也可增

加吸附剂的吸附容量.另外还要求吸附剂的机械强度好,吸附速度快

②吸附物的性质：能使表面张力降低的物质，易为表面所吸附；一般

极性吸附剂易吸附极性物质，非极性吸附剂易吸附非极性物质；溶质

从较易溶解的溶剂中被吸附时，吸附量较少；对于同系列物质，吸附

量的变化是有规则的；吸附物若能与溶剂形成氢键，则吸附物极易溶

于溶剂之中.③吸附条件：温度:吸附热越大,温度对吸附的影响越

大.PH值：溶液的pH值溶液pH值可控制吸附剂或吸附物解离情

况,进而影响吸附量,对蛋白质或酶类等两性物质，一般在等电点附近

吸附量最大.盐浓度：溶剂的影响：单溶剂与混合溶剂对吸附作用有

不同的影响.④吸附物浓度与吸附剂用量：一般情况下吸附物浓度

大时，吸附量也大.

13式Ve=VO+KdVi各字母的物理意义.答：公式Ve=VO+KdVi中Ve

代表被分离组分的流经体积,VO代表外水体积,Vi代表内水体积.Kd

称作〃排阻系数〃或〃分配系数〃，它反映了物质分子进入VV0凝胶

颗粒的程度.对一定种类规格的凝胶，物质的Kd值为该物质的特征

常数.排阻系数：Kd=eVi当Kd=1时，洗脱体积Ve二VO+Vi,为全

渗入.当Kd=O时，洗脱体积Ve=V0,为全排阻.0<Kd<l时，洗脱体

积Ve=Vo+KdVi,为部分渗入.

14用凝胶层析如何测定蛋白质的分子量？答：当具有一定分子量分布

的高聚物溶液从柱中通过时，较小的分子在柱中停留时间比大分子停

留的时间要长，于是样品各组分即按分子大小顺序而分开,最先淋出

的是最大的分子.对于一个特定体系（凝胶柱），待测定物质的洗脱体

积与分子量的关系符合公式:Ve=-KlogM+C先以3个以上（最好更

多些）的已知分子量的标准蛋白过柱，测取各自的Ve值.以Ve作纵

坐标，logM作横坐标制作标准曲线.在同一测定系统中测取未知物

质的Ve值便可由标准曲线求得分子量.

15层析的应用主要有哪些?并说明其原理.答：当具有一定分子量分

布的高聚物溶液从柱中通过时，较小的分子在柱中停留时间比大分子

停留的时间要长，于是样品各组分即按分子大小顺序而分开,最先淋

出的是最大的分子.应用：一,脱盐:脱盐用的凝胶多为大粒度的，高

交联度的凝胶.此时溶液中蛋白质等大分子的Kd=0,盐类的Kd=l.由

于交联度大，凝胶颗粒的强度较好，加之凝胶粒度大,柱层操作比较

便利，流速也高.二，分子量测定：对于一个特定体系（凝胶柱），待测

定物质的洗脱体积与分子量的关系符合公式:Ve二-KlogM+C先以3

个以上（最好更多些）的已知分子量的标准蛋白过柱，测取各自的Ve

值.以Ve作纵坐标，logM作横坐标制作标准曲线.在同一测定系统

中测取未知物质的Ve值便可由标准曲线求得分子量.三，分离纯

化:根据分子量不同流出先后顺序不同，收集单一洗脱峰的物质，得以

纯化.

16简述离子交换纤维素的特点有哪些？答:离子交换纤维素的特点是:

离子交换纤维素为开放的长链骨架,大分子物质能自由地在其中扩散

和交换，亲水性强,表面积大，吸易附大分子；交换基团稀疏,对大分

子的实际交换容量大;吸附力弱，交换和洗脱条件缓和，不易引起变性;

分辨力强,能分离复杂的生物大分子混合物.

17请以CM-C为例说明离子交换纤维素分离纯化蛋白质时的洗脱方

法有哪些？并说出各种方法的洗脱原理.答：无论是升高环境的pH

还是降低pH或是增加离子强度都能将被吸附物质洗脱下来.现以致

甲基纤维素为例加以说明，图中H2N-P表示蛋白质，C表示纤维素.

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