枯草杆菌肠球菌菌粉质量标准HS20020016

加拿大INSTITUTROSELLINC枯草芽孢杆菌、屎肠球菌菌粉质量标准FermalacSBJS20020055本品系枯草芽孢杆菌、屎肠球菌分别培养后收集菌体，冷冻干燥成菌粉。按一定比例混合制成，用于制备枯草芽孢杆菌、屎肠球菌活菌制剂。1．鉴别试验按附录1进行。菌粉中两种菌的生长特性，柒色镜检和生化反应，应符合枯草芽孢杆菌R-179株和屎肠球菌R-026株的特征。2．外观本品为乳白色或浅灰黄色粉末。3．干燥失重在105℃干燥至恒重，减失重量不得超过3.5%。4．活菌数测定按附录2规定的方法进行。分别测定二种菌的活菌数，每克含枯草芽抱杆菌活菌数不低于4.0×108CFU，含屎肠球菌活菌数不低于3.6×109CFU。5．杂菌检查按附录3规定方法进行。不得检出大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌等致病菌。非致病性杂菌不得超过1000个/g，真菌数不超过100个/g。【规格】每克含枯草杆菌4.0×108CFU，屎肠球菌3.6×109CFU。包装规格为10Kg/桶【效期】保存于2-8℃下，自菌粉检定合格之日起效期二年【生产国及生产厂】加拿大，RosellInstituteInc.【复核单位】中国药品生物制品检定所

枯草芽孢杆菌、屎肠球菌菌粉质量标准起草说明根据进口生物制品质控要求及参照国内同类微生态制剂质量标准的要求，对该制品的质量标准进行了修订，其修订内容如下：鉴别试验。应区别菌粉所含两种菌的特征（生长特性，染色镜检和生化反应）是否符合两种生产用菌种R-179株和R-026株的特征。活菌数测定。活菌数测定方法应与国内外同类制品的方法一致。增加了“杂菌检测”项目。

附录1鉴别试验1.屎肠球菌R-26株特征：在MRS琼脂培养基上生长为乳白色或淡灰白色，中央隆起、园形光滑菌落，直径约1－2mm。革兰氏染色阳性，菌体呈卵园形，散在成对或短链状排列。发酵L－阿拉伯糖、果糖、半乳糖、蕈糖和蜜二糖，不发酵松三糖、山梨醇和菊糖。2.枯草芽孢杆菌R－179株特征:在普通营养琼脂培养基上生长为灰白色扁平粗糙菌落。革兰氏染色阳性，菌体呈杆状，两端稍平，散在或短链状排列。有的菌体中央有芽孢，但不肿胀。发酵L－阿拉伯糖、D－甘露醇，水解淀粉，液化明胶，可将硝酸盐还原成亚硝酸盐，石蕊牛奶还原试验阳性，触酶阳性。

附录2活菌数测定方法无菌称取3g制剂，加入27ml稀释液中，充分摇匀，作10倍系列稀释（最后稀释度根据不同制品的指标要求而定）。取最后稀释度100μl，滴入选择性琼脂培养基平皿上，共做3个平皿，并以“L”棒涂布均匀，于37℃培育24小时，到期观察每个平皿菌落生长情况，并计数。但必须注意当平皿菌落数小于10或大于300时，应重新调整最后稀释度，重新测定。根据3个平皿菌落总数按下列公式计算活菌数。3个平皿菌落数之和————————————×10×稀释度=CFU/g3注：1.活菌数用“CFU”表示，即为细菌集落单位。2.稀释液采用1％蛋白胨水。3.屎肠球菌活菌数测定采用MRS琼脂培养基。4.枯草芽孢杆菌活菌数测定采用2％NaCl营养琼脂培养基。⑴1％蛋白胨水蛋白胨10.0g加蒸馏水至1000ml，121℃高压灭菌15分钟⑵MRS琼脂培养基蛋白胨10.0g牛肉浸膏10.0g酵母浸粉5.0g葡萄糖20.0g吐温801.0g柠檬酸铵2.0g碳酸钠5.0g硫酸镁0.1g硫酸锰0.05g磷酸氢二钾2.0g琼脂15.0g加蒸馏水至1000ml调pH至6.8，121℃高压灭菌15分钟⑶2％NaCl营养琼脂培养基肉浸膏3.0g蛋白胨5.0g