制革酶化学课件

制革酶化学

酶通论1878年,Kuhne提出Enzyme酶的发现和提出：1897年，Buchner兄弟用不含细胞的酵母汁成功实现了发酵。提出了发酵与活细胞无关，而与细胞液中的酶有关。1903年，Henri提出了酶与底物作用的中间复合物学说。1913年，Michaelis和Menten提出了酶促动力学原理—米氏学说。1925年，Briggs和Handane对米氏方程做了修正，提出了稳态学说。1926年，Sumner从刀豆种子中分离、纯化得到了脲酶结晶，首次证明酶是具有催化活性的蛋白质。1930年Northrop分离得到胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶结晶并证实其均为蛋白质，酶的蛋白质本质确立。酶通论1969年，Merrifield等人工合成了具有酶活性的胰RNase。1982年，Cech和Altman对四膜虫的研究中发现RNA具有催化作用，从而发现核酶(ribozyme)，打破了以往酶是蛋白质的传统观念。近20年来，不少酶的作用机制被阐明，随着基因工程技术的广泛应用，使得酶的结构和功能的研究进入一个新的阶段。现在已鉴定出4000多种酶，数百种酶已经被结晶。近几十年来，不断有新理论和新概念出现。在分子水平上揭示酶和生命活动的关系，阐明酶在细胞代谢调节和分化中的作用，酶合成的遗传机制，酶的催化机制等。酶的应用——酶工程也得到快速发展。酶是活细胞产生的一类具有催化功能的蛋白质（核酸），亦称为生物催化剂Biocatalysts。绝大多数的酶都是蛋白质酶催化的生物化学反应，称为酶促反应Enzymaticreaction。在酶的催化下发生化学变化的物质，称为底物substrate。酶的概念

单体酶肽链寡聚酶多酶复合体多酶体系多功能酶以蛋白质肽链组成分：酶的分类多功能酶（multifunctionalenzyme）：一些多酶体系在进化过程中由于基因的融合，形成由一条多肽链组成却具有多种不同催化功能的酶。酶的分类多酶复合体：以酶分子的化学组成分：酶的分类以酶反应的催化类型分：酶的分类氧化-还原酶催化氧化-还原反应。如，乳酸(Lactate)脱氢酶催化乳酸的脱氢反应。1.氧化-还原酶Oxidoreductase2.转移酶Transferase转移酶催化基团转移反应，即将一个底物分子的基团或原子转移到另一个底物的分子上。例如，谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。酶的分类水解酶催化底物的加水分解反应。主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。例如，脂肪酶(Lipase)催化的脂的水解反应：3.水解酶hydrolase裂合酶催化从底物分子中移去一个基团或原子形成双键的反应及其逆反应。主要包括醛缩酶、水化酶及脱氨酶等。例如，延胡索酸水合酶催化的反应。4.裂合酶Lyase酶的分类异构酶催化各种同分异构体的相互转化，即底物分子内基团或原子的重排过程。例如，6-磷酸葡萄糖异构酶催化的反应。5.异构酶Isomerase6.合成酶LigaseorSynthetase合成酶，又称为连接酶，能够催化C-C、C-O、C-N以及C-S键的形成反应。这类反应必须与ATP分解反应相互偶联。酶的分类核酸酶是唯一的非蛋白酶。它是一类特殊的RNA，能够催化RNA分子中的磷酸酯键的水解及其逆反应。7.核酸酶（催化核酸）ribozyme酶的分类①能催化热力学上允许进行的化学反应，而不能实现那些热力学上不能进行的反应；②能缩短反应达到平衡所需的时间，而不能改变平衡点；③

一般情况下，对可逆反应的正反两个方向的催化作用相同。

酶的催化反应特征

酶与一般催化剂的共同点酶的催化反应特征(一)高效性酶能大幅度较低反应的活化能以摩尔为单位进行比较，酶的催化效率比化学催化剂高107～1013倍，比非催化反应高108～1020倍。酶催化的转换数巨大

酶的催化反应特征(二)反应条件温和凡能使蛋白质变性的因素如强酸、强碱高温等条件都能使酶破坏而完全失去活性。所以酶作用一般都要求比较温和的条件如常温、常压和接近中性的酸硷度。酶促反应一般在pH5-8水溶液中进行，反应温度范围为20-40

C。酶的催化反应特征(三)在体内受到严格调控（1）酶浓度的调节诱导或抑制酶的合成调节酶的降解（2）激素调节酶的活性（3）反馈抑制调节酶的活性（4）抑制剂和激活剂的调节（5）其他调节方式。共价修饰调节、别构调节、酶原激活、同功酶等。酶的催化反应特征(四)常需辅助因子酶的催化活力常跟辅酶、辅基和金属离子等辅助因子有关

辅助因子：金属离子或有机小分子辅酶：和酶蛋白结合疏松，可以用透析或超滤法除去辅基：和酶蛋白结合紧密，不能用透析或超滤法除去酶的催化反应特征(五)高度专一性酶的底物专一性即特异性（substratespecificity）指酶对它所作用的底物有严格的选择性。一种酶只能作用于某一种或某一类结构性质相似的物质。酶对底物和催化的反应有严格的选择性。酶的催化反应特征(五)高度专一性专一性结构专一立体（异构）专一绝对专一相对专一键专一基团专一旋光异构顺反异构酶的催化反应特征(五)高度专一性绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格，只作用于一个特定的底物。这种专一性称为绝对专一性相对专一性：有些酶的作用对象不是一种底物，而是一类化合物或一类化学键。这种专一性称为相对专一性基团专一性：对键两端的基团要求的程度不同，只对其中一个基团要求严格键专一性：有些酶只要求作用于底物一定的键，而对键两端的基团无严格的要求。酶的催化反应特征(五)高度专一性立体异构专一性：一种酶只能作用于一种立体异构体，或只能生成一种立体异构体，称为立体异构特异性。旋光异构专一性：酶的一个重要特性是能专一性地与手性底物结合并催化这类底物发生反应。即当底物具有旋光异构体时，酶只能作用于其中的一种。几何异构专一性：有些酶只能选择性催化某种几何异构体底物的反应，而对另一种构型则无催化作用酶作用专一性的假说认为整个酶分子的天然构象是具有刚性结构的，酶表面具有特定的形状。酶与底物的结合如同一把钥匙对一把锁一样。此学说可以较好的解释酶的立体异构专一性；但不能解释：酶的多底物现象、酶对正反方向的催化等。Fischer(费雪)——德国锁钥假说（1894）酶作用专一性的假说锁钥假说（1894）酶作用专一性的假说诱导契合学说（1964）Koshland——美国

该学说认为酶的活性部位并不是和底物的形状正好互补的，而是在酶和底物结合的过程中，底物分子或酶分子，有时是两者的构象同时发生了一定的变化后才互补的，这时催化基团的位置也正好在所催化底物键的断裂和即将生成键的适当位置。这个动态的辨认过程称为诱导契合。酶作用专一性的假说诱导契合学说（1964）酶作用专一性的假说诱导契合学说（1964）

酶与底物靠近

定向

酶与底物相互诱导变形

契合形成中间产物产物脱离A.靠近定向靠近电性吸引疏水作用定向酶底物活性中心催化基团进行催化诱导互补性结构变化能否契合——专一性的由来契合B.诱导契合酶作用专一性的假说诱导契合学说（1964）酶作用专一性的假说诱导契合学说（1964）C.产物脱离酶复原－催化剂酶的结构必需基团其它部分

活性中心活性中心以外的必需基团结合催化部位部位酶的结构与功能酶的结构与功能结合部位Bindingsite酶分子中与底物结合的部位或区域一般称为结合部位。催化部位catalyticsite酶分子中促使底物发生化学变化的部位称为催化部位。通常将酶的结合部位和催化部位总称为酶的活性部位或活性中心。结合部位决定酶的专一性，催化部位决定酶所催化反应的性质。酶的结构与功能调控部位Regulatorysite酶分子中存在着一些可以与其他分子发生某种程度的结合的部位，从而引起酶分子空间构象的变化，对酶起激活或抑制作用。酶的结构与功能酶的结构与功能酶的活性中心酶分子上具有一定空间构象的部位，该部位化学基团集中，直接参与将底物转变为产物的反应过程，这一部位就称为酶的活性中心。邻近效应：在酶促反应中，由于酶和底物分子之间的亲和性，底物分子有向酶的活性中心靠近的趋势，最终结合到酶的活性中心，使底物在酶活性中心的有效浓度大大增加的效应。定向效应：当专一性底物向酶活性中心靠近时，会诱导酶分子构象发生改变，使酶活性中心的相关基团和底物的反应基团正确定向排列，同时使反应基团之间的分子轨道以正确方向严格定位，使酶促反应易于进行。以上两种效应使酶具有高效率和专一性特点。1.邻近定向效应酶的高效作用机理1.邻近定向效应酶的高效作用机理普通化学反应—随机碰撞（受浓度、碰撞角度影响）相当于——社会上的自由恋爱酶的活性中心—相当于“婚姻介绍所”邻近作用提高了酶活性（“婚介”）中心的底物浓度（—非婚男女集中）定向作用缩短了底物与催化基团间（“男女”）的距离提高反应速度（成功率）108倍1.邻近定向效应酶的高效作用机理

当酶与底物靠近时，不仅酶构象受底物作用而变化，底物分子也常常受酶作用而变化，也就是酶使底物分子中的敏感键发生“变形”，从而促使底物中的敏感键更易于破裂。因而更容易形成一个互相契合的酶—底的复合物而提高催化效率。2.张力效应酶的高效作用机理酶底物同时形变产物底物分子发生形变2.张力效应酶的高效作用机理酸碱催化是通过瞬时的向反应物提供质子或从反应物接受质子以稳定过渡态，加速反应的一类催化机制。酶分子中可以作为广义酸、碱的基团

广义酸基团（质子供体）广义碱基团（质子受体）

3.酸碱催化效应酶的高效作用机理催化剂通过与底物形成反应活性很高的共价过渡产物，使反应活化能降低，从而提高反应速度的过程，称为共价催化。它包括两种类型：亲核催化和亲电催化亲核基团：

His的咪唑基，Cys

的硫基，Asp的羧基，Ser的羟基等；亲电子基团：H+

、Mg2+、Mn2+

、Fe3+某些辅酶，如焦磷酸硫胺素和磷酸吡哆醛等也可以参与共价催化作用。4.共价催化酶的高效作用机理酶活性中心处于一个非极性环境中，其介电常数较在水介质（极性介质）中的介电常数低，在非极性环境中两个带电基团之间的静电作用比在极性环境中显著增高。从而有利于同底物的结合。5.微环境效应酶的高效作用机理综上所述：酶与底物结合时，由于酶的变形（诱导契合）或底物变形使二者相互适合，并依靠离子键、氢键、范德华力的作用和水的影响，结合成中间产物，在酶分子的非极性区域内，由于酶与底物的邻近、定向，使二者可以通过亲核\亲电催化、一般酸\碱催化或金属离子催化方式进行多元催化，从而大大降低反应所需的活化能，使酶促反应迅速进行。酶的高效作用机理

在低底物浓度时：反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。酶促反应动力学底物浓度对酶促反应速度的影响随着底物浓度的增高反应速度不再成正比例加速；反应为混合级反应。酶促反应动力学底物浓度对酶促反应速度的影响

当底物浓度达到一定值反应速度达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。底物浓度对酶促反应速度的影响酶促反应动力学酶与底物的中间络合物学说1880年CAWurtz首先提出酶与底物的中间络合物1902年Henri.V对酶与底物的中间络合物进行了完善该学说认为当酶催化某一化学反应时，酶首先和底物结合生成中间复合物（ES），然后生成产物（P），并释放出酶。

Henri.V——法国CAWurtz——法国S+EESP+E酶促反应动力学

1913年Michaelis和Menten推导了米氏方程（Henri-Michaelis-Mentenkineticlaw）加拿大德国米氏常数酶促反应动力学酶促反应动力学在米氏方程推导中引入3个假设:

（1）P→0忽略这步反应

（2）∵[S]>>[E] ∴[S]－[ES]≈[S]（3）E+S ES平衡，要求k3<<k2。当[S]Km时，v=Vmax/Km[S]当[S]Km时,v=Vmax当[S]=Km时,v=Vmax/2所以，Km的物理意义是：米氏常数是当酶反应速率达到最大反应速率的一半时的底物浓度。因此,米氏常数的单位为mol/L。酶促反应动力学酶促反应动力学a.不同的酶具有不同Km值，它是酶的一个重要的特征物理常数,只与酶的性质有关，而与其浓度无关。b.Km值只是在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的Km值。C.一般情况下，1/Km可以近似地表示酶对底物的亲和力大小，1/Km愈大，表明亲和力愈大。D.同一种酶有几种底物就有几个Km值，其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物关于米氏常数Km的几点说明：酶促反应动力学米氏常数的应用可用来确定酶活性测定时所需的底物浓度：当[S]=10Km时，ν=91%Vmax，此时即为最合适的测定酶活性所需的底物浓度。Vmax可用于计算酶的转换数：当底物浓度和最大速度已知时，可计算出酶的催化反应速度酶促反应动力学Km和Vmax的求法斜率=Km/Vmax-1/Km1/Vmax双倒数法VmaxVmax/Km

酶促反应动力学Km和Vmax的求法V-V/S法pH对酶促反应速度的影响酶反应速度最大时的溶液pH，称为酶的最适pHpH值影响酶活力的原因：影响酶分子构象的稳定性。严重时可使酶变性失活影响酶分子（包括辅因子）极性基团的解离状态，使其荷电性发生变化影响底物分子的解离状态影响酶促反应的因素pH对酶促反应速度的影响影响酶促反应的因素酶的最适pH不是一个固定的常数，它受到底物的种类、浓度;缓冲液的种类、浓度;酶的纯度;反应的温度、时间等的影响例:碱性磷酸酶催化磷酸苯酯水解时影响。[s]为2.5x10-5M，最适pH为8.3[s]为2.5x10-2M，最适pH为10.0温度的影响使酶促反应速度达最大时的温度称为酶的最适温度。温度对酶促反应速度的影响：一方面是温度升高,酶促反应速度加快(温度系数Q10：反应温度提高10

C，其反应速度与原来的反应速度之比。Q10多为1-2)另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失，反应速度很快下降。酶对温度的耐受力与其存在状态有关。影响酶促反应的因素温度的影响影响酶促反应的因素最适温度与最适pH一样，也不是一个固定的常数，它随底物的种类、浓度,溶液的离子强度,pH,反应时间等的影响。

例:反应时间短，最适温度高。反应时间长，最适温度低。酶浓度对酶反应速度的影响在一定条件下酶促反应的速度与酶的浓度成正比。当底物浓度大大超过酶浓度时，反应达到最大速度。如果此时增加酶的浓度可增加反应速度，酶促反应的速度与酶的浓度成正比关系。影响酶促反应的因素激活剂对酶反应速度的影响影响酶促反应的因素凡能提高酶活性的物质，都称为激活剂激活剂的种类（1）无机离子：金属离子(K+Na+Mg2+Zn2+Fe2+Ca2+)、阴离子(Cl-Br-)、氢离子（2）简单有机分子：

某些还原剂、乙二胺四乙酸（EDTA）

(3)具有蛋白质性质的大分子物质主要是激活酶原无活性的酶原有活性的酶激活作用抑制剂对酶反应的影响影响酶促反应的因素使酶的活性降低或丧失的现象，称为酶的抑制作用。能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂。酶的抑制剂一般具备两个方面的特点：a.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相似。b.能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。a.不可逆抑制作用

b.可逆抑制作用

竞争性抑制非竞争性抑制反竞争性抑制专一性不可逆抑制作用非专一性不可逆抑制作用抑制剂对酶反应的影响影响酶促反应的因素抑制作用的类型定义：抑制剂与酶的活性中心的功能基团共价结合而抑制酶的活性,不能用透析或超滤等物理方法除去抑制剂而恢复酶活性（不可逆抑制作用）专一性不可逆抑制作用：这类抑制剂只作用于与酶活性部位有关的氨基酸残基或一类酶。非专一性不可逆抑制作用：这类抑制剂作用于酶分子上一类或几类不同的基团或作用于几类不同的酶。如：酰化剂酸酐和磺酰氯等可使酶蛋白的-OH、SH、NH2等发生酰化而使酶失活。抑制剂对酶反应的影响影响酶促反应的因素不可逆抑制作用定义：抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等物理方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为三类b1竟争性抑制b2非竟争性抑制b3反竞争性抑制可逆抑制作用抑制剂对酶反应的影响影响酶促反应的因素竟争性抑制某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外，其结果是酶促反应被抑制了。竟争性抑制通常可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞争能力来消除。I竟争性抑制1/Vmax竞争性抑制剂无抑制剂1/[s]1/v斜率=Km/Vmax

加入竞争性抑制剂后，Km

变大，酶促最大反应速度Vmax不变。当[I]→0时，方程还原成米氏方程。当[I]→∞时，

竟争性抑制琥珀酸延胡索酸草酸盐草酰乙酸丙二酸戊二酸竟争性抑制非竟争性抑制酶可同时与底物及抑制剂结合，即底物和抑制剂没有竞争作用。酶与抑制剂结合后，还可与底物结合；酶与底物结合后，也可再结合抑制剂，但是三元的中间产物不能进一步分解为产物，所以酶活性降低。非竞争性抑制剂与酶活性中心以外的基团结合。这类抑制作用不会因提高底物浓度而减弱

非竞争非竟争性抑制非竞争性抑制剂无抑制剂-1/km1/v1/Vmax

加入非竞争性抑制剂后，Km不变，而Vmax减小。1/[s]非竟争性抑制当[I]→0当[I]→∞反竞争性抑制酶只有与底物结合后才与抑制剂结合，形成的三元中间产物不能进一步分解为产物，所以酶活性降低。这类抑制作用最不重要。反竞争性抑制作用常见于多底物反应中，而在单底物反应中比较少见。

加入反竞争性抑制剂，使Km和Vmax均减小反竞争性抑制不可逆抑制和可逆抑制的动力学比较可逆抑制的动力学比较抑制类型VmaxKm无抑制剂VmaxKm竞争性抑制不变变大非竞争性抑制变小不变

反竞争性抑制变小变小

酶的活力与测定酶活力（enzymeactivity）：也称酶活性，指酶催化一定化学反应的能力。其大小可用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的反应速率（reactionrate）来表示。酶反应速度：用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。单位：浓度/单位时间产物浓度[P](t)引起酶反应速度降低的主要原因：1、底物浓度的降低；2、酶的部分失活；3、产物对酶的抑制；4、产物增加引起的逆反应速度的增加可以用初速度来测定制剂中酶的含量。酶的活力与测定

酶的活力单位：1961年，提出用“国际单位”（IU）表示酶活力，即：1个酶活力单位：是指在最适条件下，1分钟内能转化1u摩尔底物的酶量，或转化底物中1微摩尔有关基团的酶量。(25

C,最适底物浓度和最适pH）1IU=

mol/min1972年，提出新的酶活力国际单位：Kat单位：最适条件下，每秒钟能催化1mol底物转化为产物所需的酶量，定为1Kat=1mol/s所以：1Kat=60×106IU

另外还有一些习惯用法酶的活力与测定酶的比活力：代表酶的纯度，比活力用每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示，对同一酶来说，比活力愈大，表示酶的纯度愈高。用IU/mg蛋白、Kat/mg蛋白表示。比活力大小可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。比活力=活力IU/mg蛋白=总活力IU/总蛋白mg转换数每秒钟每个酶分子能催化底物发生变化的微摩尔数，用Kcat表示（

mol/S

）。酶的活力与测定测定酶活力时应注意（1）应测反应初速度（2）酶的反应速度一般用单位时间内产物的增加量来表示。（3）测酶活力时应使反应温度、pH、离子强度和底物浓度等因素保持恒定。（4）测定酶反应速度时，应使[S]>>[E]。产物浓度[P](t)酶的活力与测定酶活力的测定方法1.分光光度法利用底物和产物在紫外或可见光部分的光吸收的不同，选择一适当的波长，测定反应过程中反应进行的情况。优点：简便、节省时间和样品，可检测到nmol/L水平的变化。2.荧光法主要是根据底物或产物的荧光性质的差别来进行测定。3.同位素测定方法同位素标记底物，反应后经分离，检测产物的脉冲数，即可换算成酶的活力单位。灵敏度最高4.电化学方法

酶的活力与测定酶的活力与测定蛋白酶活力测定由于各种酶的性质及最适反应条件不同，无法规定一个统一的酶活力测定方法目前工业上蛋白酶制剂活力测定使用最广泛的方法有Folin法——福林法LVU法甲醛滴定法转化倍数法酶的活力与测定蛋白酶活力测定Folin法原理：酪素在蛋白酶的催化作用下，水解生成含有酚基的氨基酸（Tyr）。在一定条件下，生成的Tyr越多，说明该酶制剂的催化能力越强在碱性条件下，Tyr和Folin试剂反应生成钼蓝和钨蓝，蓝色的深浅与酚类化合物含量成正比，因此，通过比色测定，可确定出Tyr含量，从而计算出酶的活力定义：1g固体酶粉（或1ml液体酶），在一定温度和pH条件下，1min水解酪素产生1ugTyr为一个酶活力单位，以u/g（u/ml）酶的活力与测定蛋白酶活力测定LUV法原理：碱性酪素溶液在标准条件下（T：37℃，pH：8.2），进行酶解反应，一定时间后（一般60min），加入盐酸终止反应，未酶酪素以硫酸钠沉淀。滤液用标准NaOH溶液滴定，滤液中的酸包括加入的盐酸和酪素降解产生的酸，酪素降解越多，滤液中的酸就越多，沉淀就越少。滴定所耗NaOH的量直接反应酶活力大小定义：在标准条件下（T：37℃，pH：8.2），酶与酪素反应60min，水解1.725mg酪素所需的酶量为一个酶活力单位酶的活力与测定蛋白酶活力测定甲醛滴定法原理：蛋白酶与酪素在一定条件下发生水解，用甲醛固定水解产物的氨基，用NaOH溶液滴定羧基。根据样品滴定与空白滴定所耗0.1mol/LNaOH溶液体积之差，计算每1mL酶液所生成的氨基氮的毫克数即为酶活力1mL0.1mol/LNaOH相当于1.4mg氨基氮酶的活力与测定蛋白酶活力测定胰酶转化倍数法原理：胰酶于定量的酪素反应，水解一定时间后，用乙酸盐（或乙酸）调节反应溶液的pH至酪素等电点附近，使未水解的酪素沉淀析出，而水解的酪素则不会析出，酪蛋白被水解的量越大，表明胰酶的活力越高定义：1g胰酶完全转化酪素的克数为工业胰酶的转化活力制革常用酶制剂制革中常用的酶制剂，主要是蛋白水解酶，其次是脂肪酶从理论上说，酶可以用于准备工段的各个工序，如浸水、脱脂、脱毛、软化，也可用于鞣后蓝湿革的软化与脱脂工业用的蛋白酶一般纯度不高酶法鞣制是最近提出的一个新概念，尽管目前酶鞣制有点象天方夜谭不可预期，但这正好预示着酶一这种生物制剂在皮革工业中的应用方兴未艾。

制革常用酶制剂中性蛋白酶枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶主要用于脱毛，也可在软化工序作为辅助酶软剂和部位差处理剂用pH=7时最稳定，pH>10或pH<5.5失活；pH=7时最适反应温度为45-50℃，60℃以上失活Cu2+，Hg2+，Al3+，Pb2+，EDTA抑制，Ca2+无影响放线菌166中性蛋白酶主要用于脱毛及软化时的辅