输血科临床技术操作规程汇编

输血科临床技术操作规程汇编

一、室内质控操作规程

一、目的

建立仪器和试验每口的室内质量控制的操作规程，以确保试验的准确性和精确性。

二、适用范围

适用于输血科对血型血清学实验室检测的全过程质控。

三、操作程序

（一）试剂：

1.单克隆抗-A/B试剂

a）观察试剂外观：清澈、透明、无沉淀、颗粒或絮状物

b）取I滴反定型标准红细胞试剂A、B、O细胞分别与1滴单克隆抗-A/B试剂混合、生理盐水，

离心1500g*15s轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞悬浮起来，先以肉眼观察有无凝集或溶

血现象，如肉眼观察未见赣集现象，将反应物倒于玻片上，用显微镜观察。

c）结果判断：符合下列反应格局的，判定试剂合格

抗血清

抗-A抗-B盐水

红细胞

Ac4+——

Be—4+—

Oc———

2.反定型试剂红细胞：

1）观察试剂外观：上清透明、无溶血、无缗钱状凝集

2）1滴ABO血型标准血清、生理盐水与1滴反定型试剂混匀，离心1500g*15s轻轻摇动试管，

使沉于管底的红细胞悬浮起来，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象，如肉眼观察未见凝集现

象，将反应物倒于被片上，用显微镜观察。

3)结果判断：符合下列反应格局的,

抗血清

判定试剂合格抗-D盐水

红细胞

3.单克隆抗-D试剂：

1）观察试剂外观：清澈、透明、无沉淀、颗粒或絮状物

2）I滴Rh血型标准血清+1滴生理盐水与1滴反定型试剂0c混匀，离心1500g*15s轻轻摇动

试管，使沉于管底的红细胞悬浮起来，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象，如肉眼观察未见

凝集现象，将反应物倒于玻片上，用显微镜观察。

3）结果判定：符合下列反应格局的，判定试剂合格

抗血清

抗-A抗-B盐水

红细胞

Ac4+——

Be—4+—

Oc———

4.红细胞不规则抗体箭选外细胞：

1）观察试剂外观：上清透明、无溶血、无缗钱状凝集

2）红细胞不规则抗体筛选红细胞I、n、IH各1滴+1滴生理盐水与1滴抗-D混匀，离心1500g*15s

轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞悬浮起来，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象，如肉眼

观察未见凝集现象，将反应物倒于玻片上，用显微镜观察。

3）结果判定：符合下列反应格局的，判定试剂合格

抗体筛选细胞I4+--

抗住筛选细胞II4+—

抗体筛选细胞III4+—

（三）室内质控失控处理

1.检查试剂的生产口期，严格按照试验条件重新检测，如在控，人为因素。

2.如仍失控，开启新的试剂，重新检测，如在控，试剂因素

（四）质控操作，于每天试验前按常规试验条件进行，反应结果符合既定反应格局时，判定

为试剂“合格”，填写《输血科室内质控记录表》。

二、室间质评标准操作规程

e）目的

输血科通过参加全国和大连市血液中心的室间质评，提高实验检测结果的准确度，依据

《输血实验室管理程序》4.2.2（10）条款的要求制定本规程。

f）适用范围

适用于医疗机构输血科参加血型血清学参比实验室的室间质评。

g）职责

医疗机构输血科技术人员负责室间质评技术工作。

h）原理

室间质评（externalqualityassessment.EQA）是本实验室以外的某机构所执行的客观地

评价实验室测定结果的一种体系。由第三方机构采用一系列的办法连续地、客观地评价各实

验室的试验结果，并发现实验室本身不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异,

帮助其校正。这种评价是一种回顾性评价，旨在建立实险室间结果的可比性。

i）所需设备和试剂

5.1设备普通离心机，血型血清学专用离心机，电热恒温水浴箱，水浴振荡仪，普通

显微镜。

5.2试剂凝聚胺试剂盒，抗球蛋白试剂，单克隆抗-A、抗-B、抗-A1、抗-AB试剂，

抗球蛋白试剂，A、B、O型试剂红细胞，红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清等，

j）检测环境条件

室温应控制在18〜27℃,湿度应保持30%〜70%。

k）步骤与方法

7.1输血科每年参加全国和1次大连市血型血清学室间质评项目，一般为卫生部或大连市

血液中心发放质控品。输血科接到质控样品后，首先按项目、批次逐一核查，如发现样品存

在缺、漏、编号重复等情况，立即与EQA组织单位联系。

7.2质评的内容可包括以下项目：①ABO血型鉴定（含亚型）。②RhD（或弱D）抗原鉴定。

③有条件单位还可以开展红细胞不规则抗体以及ABO血型系统的免疫性抗-A、抗-B检测。

7.3血清学标志物质控品、ABO反定型的质控品不能及时检测时应冰冻保存在-18C以下,

红细胞质控品保存在2〜6c的冰箱中。

7.4在规定的检测日期，从冰箱中取出质控样品，室温放置30min,使其充分复溶后平衡

至室温。

7.5室间质评样品与常规检测样品同时进行检测，保证检测条件一致，不应由专人在优于

常规工作的条件下检测，具体操作执行各个质控项目对应检测项目的标准操作规程.

7.6认真分析检测结果并做好记录。

7.7填写I可报表

7.7.1分析结果后填写回报表，包括本实验室编号及单位名称、各项目的试验结果、所用方

法、仪器及试剂生产厂家、批号等。

7.7.2在规定的日期内回报至EQA组织单位。

7.8根据EQA组织单位对本实验室的质控结果评分进行总结，如果EQA活动中出现不满

意结果，应按照EQA纠正活动的要求进行以下整改：尽快寻找和分析出现不满意结果的原

因，并进行有效整改。有效整改活动包括对质量体系相关要素的控制、技术能力的分析以及

进行相关试验和利用反馈信息等。

7.9输血科应将室间质评结果、整改报告进行详细的总结，将室间质评材料以文档的形式

保存。

1）注意事项

8.1用于室间质评的质控品量应充足，以便能对可疑的结果进行重复试验。

8.2加样前一定要将质控品混匀，加样要准确。

8.3质控品应进行防腐处理，包装符合要求，在限定的条件下贮存，按规定的日期与质控

的常规试验项目同步检测。

8.4所有质控品应避免反狂冻融，狂溶的质控品在2〜8c可保存1周。

8.5参评的质控项目与本实验室开展的试验项目相适应。

8.6进行室间质评必须在检测常规标本的方法检测质控品，并应能反映常规工作水平，不

应安排比常规检验人员更高级的实验人员检测，检测结果不应受到“特殊的复查”，检测人

员不应更改实验结果或从其他参加室间质评单位获得结果。

8.7对质评结果要经过仔细核查，确定无误后方可发出。

8.8所有的质控样品应被视为有潜在传染性的物品进行处理。

9.相关文件及表单（略）

ABO/Rh血型鉴定盐水介质凝集试验操作规程

1.目的规范AB0血型鉴定操作，保证临床用血的安全性和有效性。

2.职责输血科工作人员负责ABO/Rh血型鉴定

3.适用范围适用于输血科ABO/Rh血型鉴定标本

4.实验原理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型

及。型4种。利用红细胞凝集反应，通过正反定型准确鉴定ABO血型。正定型：是用已知

抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应A抗原或/和B抗原；反定型：是用已知A

细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或和抗Bo

5.所需材料与设备

5.1材料抗-A、抗上、抗・D试剂：A、B、0型反定型红细胞：生理盐水；试管；

5.2标本EDTA-K2抗凝血3ml

5.3设备普通离心机；显微镜；

6.操作步骤

6.1将标本离心，分离血浆与红细胞，吸取红细胞制成3%悬液。

6.2正定型：取试管3支，分别标注抗-A、抗-B、抗-D,用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-D

试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入3%红细胞悬液于3支试管中，混匀。

6.3反定型：另取试管3支，分别标注A、B、0细胞，用滴管分别加受检者血

清各2滴于试管底部，再以滴管分别加入A、B、0型反定型红细胞，于3支试管中，混匀。

6.4离心1500g*15s

6.5轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞悬浮起来，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象，

如肉眼观察未见凝集现象，将反应物倒于玻片上，用显微镜观察。

6.6ABO血型结果判定：见表一

6.7Rh血型结果判定：红细胞与抗・D试剂凝集为抗-D阳性；无凝集为抗-D阴性。

6.8凝集强度判定：

4+：红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；

3+：句细胞凝焚成数小块.背景尚清晰：

2+：红细胞凝集分散成许多小块，背景可见游离红细胞；

1+：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；

±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有许多游离红细胞；

-：镜下未见凝集，红细胞均匀分布；

混合外观凝集：指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍然分散分布。

表一、ABO血型结果判定

受检者红细胞+标准血清（正定）受检者血清+标准红细胞（反定）受检者血型

抗A抗B抗A+BAcBeOc

+—++——A

—++—+—B

———++—0

+十十———AB

7.注意事项

7.1单克隆抗体试剂和试剂红细胞（谱细胞除外）每天使用前必须与相应的红细胞和血清

做阳性阴性对照，以检测其活性。

7.2观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，有助于A、B亚型、类

B、Cis（顺式）AB的发现。

7.3ABO定型的正定型、反定型，其两种定型结果可互相验证和补充，使血型鉴定结果

更为准确。

7.4在正反定型结果出现不一致时，需进一步鉴定。

7.5正反定型不一致的原因：

7.5.1标准血清效价太低、亲和力不强。容易将A、B、型误定为。型，AB型误定为

A或B型。

7.5.2RBC悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。

7.5.3受检红细胞上抗原位点过少，如亚型:或抗原性减弱，见于白血病或恶性肿瘤，

以及类B或cisAB等

7.5.4受检血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症)，或实验室温度过高，引起RBC呈缗钱

状排列。

7.5.5受检者血清中缺于应有的抗A及/或抗B抗体,如丙种球蛋白缺十疔.

7.5.6各种原因引起的RBC溶解，误判为不凝集。部分溶血时可溶性血型物质中和了

相应的抗体。

7.5.7由细菌污染或遗传因素引起多凝聚或全凝聚，往往是正反定型不符的原因。

7.5.8血清中有AEO血型以外的抗体，如自身抗体，常引起干扰。

7.5.9老年人血清中抗体水平大幅度下降。

7.5.10新生儿尚未形成ABO同种抗体，故三个月内的新生儿只做正定型。

7.5.11获得性类B由于G-杆菌的作用，红细胞可获得类B活性

7.5.12近期曾输过异型血，使患者血标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示

“混合外观凝集工

7.5.13嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集二

7.5.14药物等因素药物、右旋糖酊及静脉注射某些造影剂凝集而类似凝集。

7.6如无法找到正反定型不致的原因，患者又需要紧急输血，则应该给患者输注Rh(D)

同型的。型红细胞，同时请市血液中心协助鉴定。

7.7如含有冷凝集素的患者血清，可采用37℃生理盐水洗涤3次，如果仍旧2弱凝集，再

用42℃或45c生理盐水洗涤1次，再进行血型鉴定。

7.8自身免疫性温抗体产生的非特异性凝集者，采用递进温度22℃-37℃

一45℃的生理盐水洗涤红细胞后做定型试验，或采用放散的方法将红细胞上吸附的抗体释放

后再进行血型鉴定。

ABO、RhD血型检测卡标准操作规程

1目的规范AB0血型鉴定操作，保证临床用血的安全性和有效性。

2原理采用微柱凝胶免疫检测技术，用于人ABO、RhD血型抗原的检测。当

抗原抗体反应时，凝集的或抗体致敏的红细胞在离心力的作用下不能通过凝技间

隙而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未

凝集或未致敏的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶间隙而沉积在微柱凝狡管

的底部，呈现阴性反应。

3范围适用于输血科ABO、Rh血型鉴定标本。

4所需材料与设备

4.1材料ABO、RhD血型定型检测卡；生理盐水；试管；一次性枪头。

4.2标本RDTA-K2抗凝而3ml

4.2.1标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本

和血清标本。

4.2.2红细胞标本的制备：将采集的标本配制成65-0.8%红细胞生理盐水悬液。

血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分

钟后离心，取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时，

或37°。放置2小时后离心，2()()()rpm,1()分钟，取上清。该上清不得有絮状物

或沉淀。

4.3设备

4.3.1微柱凝胶法专用孵育箱：FYQ型免疫微柱孵育器

4.3.2微柱凝胶法专用离心分离机：TD-3A型血型血清学离心机

5检测方法

5.1微柱凝胶试剂k的六个凝胶微管标号；

5.2待检者().5%红细胞悬液分别加入第一至第四支微管中，每管5()ul；

5.3待检者血清分别加入第五支和第六支微管中，每管50uh

5.4已知A型和B型红细胞0.5%浓度悬液分别加入第五和第六支微管中，

每管50ul；

5.5刻使用专用离心机离心5分钟，2分钟900rpm,3分钟1500rpm,取出

肉眼判定结果。

6检验结果的解释

6.1结果判定

阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合

物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。

反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合

物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。

阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合

物，红细胞沉于微柱凝胶的底部。

6.2血型判定

阴性对

血型抗A抗B抗DA细胞B细胞

昭

/、、、

A+-+--+

D

B-4-+-+-

阳

0--+-++

性

AB+4-+---

A+----+

D

B-+--+-

阴

0----++

性

AB++----

7注意事项

7.1为了便于鉴别，抗A微管略呈兰色，抗B略呈黄色，抗D呈白色。

7.2红细胞标本一定不能被细菌污染，否则会出现假阳性反应。尽可能应用当口

采集的新鲜血做本试验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴

性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。

7.3如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也

不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报

告并讨论。

7.4仅用于体外诊断。

聚凝胺交叉配血试验标准操作规程

1目的建立聚凝胺交叉配血试验标准操作规程，确保聚凝胺交叉配血试验操作

的准确性和规范性。

2原理红细胞血型抗原及相应抗体经低离子介质快速孵育致敏后，加入聚凝胺

带正电荷的大分子聚合物，中和红细胞表面的负电荷，缩短红细胞间距，使抗原

抗体之间紧密搭桥，再利用机械离心力的作用，呈现出肉眼凝集，这种凝集中存

在非特异性免疫凝集，可被附加的假凝集清除液迅速消除，而特异性免疫凝集对

假凝集清除液不敏感，凝集不能解散。由此可检出相应的血型抗原或抗体。

3适用范围适用于使用聚凝胺法进行交叉配血汰验

4操作程序

4.1试剂

4.1.10.9%生理盐水

4.1.2低离子介质(LZM)

4.1.3凝聚胺(P0LYBRENE)

4.1.4假凝集清除液(RESUSPENDING)

4.2器材

4.2.1LDZ4-1.2台式普通离心机

4.2.2玻璃或塑料试管(10X12mni或12X15mm)

4.2.3试管架

4.2.4一次性滴管

4.2.5101H、1山1的移液器

4.2.6记号笔

4.3样本要求抗凝全血3ml,本实验室为EDTA-K2抗凝。

4.4方法

4.4.1制备红细胞悬液：分别将受血者及供血者的抗凝血标本用台式离心机离心

1000Xg2-3min（3479转/分离心2-3min）,将红细胞吸出洗涤3遍后,用生理盐

水稀释成3〜5%的溶液（5口1红细胞沉淀溶于1ml生理盐水中）备用；

4.4.2将待检受血者及供血者的抗凝血标本用台式离心机离心1000Xg2-3min

（3479转/分离心2-3门in）,确保加入反应体系中的血浆不含有任何颗粒性成分;

4.4.3取试管标注“主”“次”侧，主侧试管加受血者血浆2滴，加供血者红细

胞悬液1滴，次侧试管反之。

4.4.4每个试管加LIMO.8ml,摇匀后,静置Imin,各管加POLYBRENE溶液1滴，

混匀；

4.4.5台式离心机离心机00心gl5sec（3479转/分离心15sec）,弃去上清，不

要沥干，让管底残留约0.1ml液体：

4.4.6轻轻摇动试管，肉眼可见明显凝集，如无凝集，则必须重做；

4.4.7最后加入RESUSPENDING1滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。

4.5结果判定

结果观察要在Imin秒内，如果在Imin内凝集散开，代表是由POLYBRENE

引起的非特异性凝集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合

的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑可将血样倒在玻片上用显微镜观察。

如试管内发生溶血则同样认为是阳性反应。

4.6注意事项

4.6.1离心后，倒掉上清，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。

4.6.2结果观察要在Imin内，否则凝集散开会判为假阴性。

4.6.3加入凝聚胺液离心后，不要混悬细胞。

4.6.4加入重悬液后，应尽快观察结果，最好在In而内，最长不要超过3疝n,

以免弱反应消失。

4.6.5凝聚胺溶液若放在透明的玻璃瓶太久会变弱，所以必须保存在黑色塑料瓶

中。

4.6.6凝聚胺是一种抗肝素药物，所以使用含肝素血标本要稍多加凝聚胺来中和

肝素。有时需要重复步骤10.5.2T0.5.5。

4.6.7凝聚胺方法对Kell系统的抗体检出不理想，所以阴性结果要转入抗球蛋

白试验，以免漏检。我国大部分地区K基因频率几乎为0,kk型几乎为100%,

据报道我国汉族人K基因的频率上海仅为0.0003,北京为0.0022,所以一•股不

需要作抗球蛋白试验。但是少数民族地区及欧美人群例外，如撒拉族高达().0046,

要小心凝聚胺试验方法漏检Kell系统的抗体。

5.检验方法的局限性本法对Kell血型系统检测效果较差，如需检测Kell血

型系统应使用抗人球蛋白试验。

6.参考文献

6.1中华人民共和国卫生部.《中国输血技术操作规程-血站部分》，天津科技出版

社，1997.79-81

6.2中华人民共和国卫生部医政司。《全国临床检验操作规程》.第二版.东南大学

出版社,1997.

6.3长春博得微柱凝胶库姆斯氏卡操作说明书

微柱凝胶法交叉配血试验标准操作规程

1目的建立微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血试验标准操作规程，确保微柱

凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血试验操作的准确性和规范性。

2原理微柱凝胶卡采用分子排阻层析原理在微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和

抗人球蛋白试剂，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力

的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，而未凝集的红细胞则可以通过

凝胶颗粒到达微管底部。

3适用范围适用于建立微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血试验

4操作程序

4.1试剂：

4.1.10.9%生理盐水；

4.1.2微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血试验检测卡

4.2器材：

4.2.1LDZ4-1.2台式普通离心机

4.2.2微杵凝胶法专用孵育箱：FYQ型免疫微样孵育器

4.2.3微柱凝胶法专用离心分离机：TD-3A型血驾血清学离心机

4.2.410ul>50U1的微量移液器。

4.2.5玻璃或塑料试管（10X12mm或12X15nmi）

4.2.6一次性枪头

4.3样本要求：抗凝全血3ml,本实验室为EDTA-K2抗凝。

4.4方法

4.4.1选择微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血试验检测卡，观察外观，如有干胶、

杂质、气泡不可使用，然后将卡平行至室温（15℃-28℃）,平衡后用TD-3A型血

型血清学离心机离心2-3mino做好标记：填写病人姓名、血型和配血日期，去

除卡中微柱凝胶管上的密封铝膜。

4.4.2制备红细胞悬液：分别将受血者及供血者的抗凝血标本使用LDZ4-1.2

台式普通离心机1000Xg60sac（3479转/分离心60sac）,将红细胞吸出后，用

0.9%生理盐水稀释成斑的溶液【10U1红细胞沉淀溶于lmlO.9%生理盐水中】，

取50U11%受血者或供血者红细胞悬液加于相应的微管。

4.4.3将已达室温的待检的全血标本使用LDZ4T.2台式普通离心机离心1000X

g2-3min（3479转/分离心2-3min）,确保加入反应体系中的血浆不含有任何颗粒

性成分，取50U1受11者及供血者血浆加于相应的微管。

主反应管：受血者血浆+供血者1%红细胞悬液

付反应管：供血者血浆+受血者1%红细胞悬液

4.4.4将卡置于37℃孵育箱中孵育15min。

4.4.5将卡置于TD-3A型血型血清学离心机中离心5min0

4.4.6自身对照：取50U11%病人红细胞悬液加于相应的微管，力口50口1病人血

清,在37℃孵育15min,将卡置于TD-3A型血型血清学离心机中离心。

4.5结果判定

一：100%的红细胞位于柱的底部；

±：100%的红细胞位于柱的下1/3；

+：80%的红细胞位于柱的下2/3；

2+：80席的红细胞位于柱的上2/3；

3+：80%的红细胞位于柱的上1/3；

4+：红细胞凝集在胶的顶部；

DP：底部和顶部均有；

H：溶血。

4.6注意事项

4.6.1将送检的试验标本即刻离心，仔细检查标本质量，挑出严重溶血、脂血等

影响检测结果的标本，及时通知临床科室重新采集，暂不使用的标本置于4c冰

箱保存。

4.6.2受血者的标本最好是新近抽取的；也可在2-8℃储存48小时（如果用血

浆的话，补体依赖的溶血反应可能检测不到）。

4.6.3严格遵守推荐的程序，检查仪器设备是否处于良好状态，如有异常应及时

调整或报修。

4.6.4仔细检查试剂质量，不可使用变质、过期的试剂。

4.6.5在一些情况下，由于血清中残留的凝块、纤维残渣可能将非凝集的红细胞

包裹在胶的顶部，表现为桃色到红色的分层，容易产生假阳性的结果。由于大多

数红细胞在柱的底部，可能干扰阴性结果的判定c推荐将血清在37℃孵育10分

钟，离心，再重复试验。

4.6.6完全或部分的溶血应该被认为是阳性结果。

5.参考文献

5.1中华人民共和国卫生部.《中国输血技术操作规程-血站部分》，天津科技出版

社，1997.79-81

5.2中华人民共和国卫生部医政司。《全国临床检验操作规程》.第二版.东南大

学出版社,1997.

5.3长春博得微柱凝胶库姆斯氏卡操作说明书

微柱凝胶法不规则抗体筛查标准操作规程

1目的对需要输血治疗的患者进行不规则抗体筛查，有助于选择不含针对某抗

体的相应抗原的献血者。

2原理微柱凝胶抗人球蛋白检测卡采用分子扑阻层析原理在微管中装填有葡

聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的

红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，而未凝集的红

细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

3范围适用于微柱凝胶法进行不规则抗体筛查。

4操作程序

4.1试剂

4.1.1微柱凝胶抗人球蛋白检测卡（长春博讯生物技术有限公司）

4.1.2筛检细胞（I、匚、III）（长春博讯生物技术有限公司）

4.2器材

4.2.1LDZ4-1.2台式普通离心机

4.2.2微柱凝胶法专用孵育箱：FYQ型免疫微柱孵育器

4.2.3微柱凝胶法专用离心分离机：TD-3A型血型血清学离心机

4.2.410uU50uI的微量移液器0

4.2.5玻璃或塑料试管（10X12mm或12X15mm）

4.2.6一次性枪头

4.3样本要求：抗凝全血3ml,本实验室为EDTA-K2抗凝。

4.4方法

4.4.1选择微柱凝胶抗人球蛋白检测卡，观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可

使用，然后将卡平行至室温（15℃-28℃）,平衡后用TD-3A型血型血清学离心机

离心2-3min。做好标汜：填写病人姓名、血型和配血日期，去除卡中微柱凝胶

管上的密封铝膜。

4.4.2将已达室温的待检的全血标本使用LDZ4-1.2台式普通离心机离心

1000g1-2rnin（3479转/分离心2min）,确保加入反应体系中的血浆不含有任何

絮状物或颗粒性成分。

4.4.3将4%抗筛红细胞做1:8稀释，然后取稀释好的0.5%抗筛红细胞50Hl筛

检红细胞I、II、III分别加于标记了1、H、HI的微管中。

444取50U1血浆加于标记了I、H、HI的微管中。

4.4.5将卡置于FYQ型免疫微柱孵育器中，37c孵育

4.4.6将卡置于TD-3A型血型血清学离心机中离心，5min,

（900rpm/2min,1500rpm/3min）o

4.4.7离心结束后，立即取出卡，从正反两面检查微管中的红细胞凝集情况，记

录结果。

4.5结果判定

阴性：未检出不规则抗体（I/II/III）（注：筛检细胞所包括的不规则抗体）

土〜4+：检出不规则抗体（I/I1/III）

一：100%的红细胞位于柱的底部；

±：100%的红细胞位于柱的下1/3；

+：80%的红细胞位于柱的下2/3；

2+：80%的红细胞位于柱的上2/3；

3+：80%的红细胞位于柱的上1/3；

4+：红细胞凝集在胶的顶部；

DP（混合凝集）：底部和顶部均有：

H：溶血。

4.6注意事项

4.6.1将试验标本即刻离心，仔细检查标本质量，挑出严重溶血、脂血等影响检

测结果的标本，及时通知病区重新采集，暂不使用的标本置于4℃冰箱保存。

4.6.2受血者的标本最好是新近抽取的；也可在2-8℃储存48小时（如果用血浆

的话，补体依赖的溶血反应可能检测不到）。

4.6.3仔细检查试剂质量，不可使用溶血、变质、过期的试剂。

4.6.4在一些情况下，由于血清中残留的凝块、纤维残渣可能将非凝集的红细胞

包裹在胶的顶部，表现为桃色到红色的分层，容易产生假阳性的结果。由于大多

数红细胞在柱的底部，可能干扰阴性结果的判定c推荐将血清在37℃孵育10分

钟，离心，再重复试验。

4.6.5完全或部分的溶血应该被认为是阳性结果。

4.6.6急诊患者可以在首次交叉配血时不做抗体筛查，需要在其后补做。

4.6.7仪器保养：每天试验完毕后，用浓度为500mg/L的有效氯消毒液擦拭。填

写《仪器维修保养记录本》

5.参考文献

5.1中华人民共和国卫生部.《中国输血技术操作规程-血站部分》，天津科技出版

社，1997.79-81

5.2中华人民共和国卫生部医政司。《全国临床检验操作规程》.第二版.东南大学

出版社,1997.

A、B、0型试剂红细胞制备标准操作规程

i.目的

为规范A、B、0型试剂红细胞制备的技术操作，保证血型血清学实验的准确性，依据

《输血实验室管理程序》4.1.9(6)条款的要求制定本规程。

2.适用范围

适用于医疗机构输血科制备A、B、0型试剂红细胞,

3.职责

医疗机构输血科技术人员负责A、B、0型试剂红细胞的制备。

4.原理

将已知A、B、。型的红细胞洗涤并配成试验所需浓度，用单克隆抗-A、抗-B试剂验证

红细胞血型抗原特异性、直接抗球蛋白实验(DAT)证实没有被抗体致敏后用于血型血清学

试验。

5.所需设备和材料

5.1设备普通离心机，血型血清学专用离心机，微量移液器，普通显微镜。

5.2材料已知A、E、0型健康献血者抗凝血，红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血

清，单克隆抗-A、抗-B试剂，抗球蛋白试剂。

6.环境条件

室温应保持在18〜27℃,湿度应保持30%〜70%。

7.步骤与方法

7.1取3支试管，分别标记为Ac、Be、Oco

7.2选取已知ABO血型的A、B、0型健康献血者抗凝血各3份，每份1ml。

7.3将A、B、0型献血者各3份抗凝血分别加入对应标记的Ac、Be、0c试管中。

7.4将3支试管离心去血浆，将压积红细胞用生理盐水洗涤3次，去除最后一次洗液

后分别用生理盐水配成10%的红细胞悬液，4℃保存，7天内使用，使用时根据试验要求再

用生理盐水配成需要的浓度。

8.质量控制

8.1质量控制操作步骤

8.1.1观察配制的A、B、0型试剂红细胞悬液有无凝块，离心观察悬浮红细胞上层生理

盐水颜色，判断有无溶血。

8.1.2取试管9支，使配制的A、B、0型试剂红细胞（浓度3%,每管50ul）分别与单

克隆抗7、抗-B及红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清反应（每管加相应试剂或血清100

口1）,鉴定红细胞的抗原特异性。

8.1.3取试管3支，分别加配制的A、B、0型试剂红细胞（浓度3%,每管50U1）,生

理盐水洗涤3次后做DATo

8.2A、B、0型试剂红细胞的质控要求见表9-1.

9.注意事项

9.1用于配制试剂红细胞的血液要新鲜，A型或B型红细胞与单克隆抗-A或抗-B凝集

强度达不到“4+”的血液不能用于制备A、B、0型试剂红细胞。

9.2红细胞洗涤过程中应放置不同血型红细胞之间交叉污染。

10.相关文件及表单（略）

AB0疑难血型鉴定标准操作规程

10.目的

为规范ABO疑难血型鉴定操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7

（1）条款的要求制定本规程。

11.适用范围

适用于医疗机构输血科对AB。血型鉴定正反定型不相符，常规方法不能确

定ABO血型的进一步确认试验。

12.职责

医疗机构输血科技术人员负责ABO疑难血型鉴定。

13.原理

ABO血型鉴定正反定型不相符时，通过采用单克隆抗-A、抗-B、抗-A】、抗・AB、抗-H试剂与

受检者红细胞反应监测ABH抗原，A、B、。型试剂红细胞及自身红细胞与受检者血清（血

浆）反应监测血型抗体，红细胞洗后放散试验监测弱A、弱B抗原，凝集抑制试验监测唾液

ABH血型物质，血清（血浆）吸收试验排除AB。血型以外的抗体对鉴定的影响，从而获得

确定受检者ABOm型的依据，确定ABOm型。

14.检测环境条件

室温应控制在18-27℃,湿度应保持30%—70%°

15.步骤与方法

15.1收集受检者临床资料当执行《试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程》鉴定ABO

血型出现正反定型不相符，并已排除试剂及操作因素时，应调查受检者的疾病史、输血史、

药物治疗情况、组织或器官移植史、孕产史及以前的血型记录，分析可能影响ABO血型鉴

定的临床资料。

15.2根据受检者正反定型的反应结果及临床资料♦,初步分析引起正反定型不符的可能原因“

15.2.1当正定型红细胞与抗-A和（或）抗-B物凝集，而反定型未检出预期的凝集反应时，应

首先确实是否因红细胞表达弱A和（或）弱B,与抗-A和（或）抗-B不凝集。经吸收放散

等试验确认红细胞不表达A和（或）B抗原后，可考虑是否为低免疫球蛋白血症、免疫抑制

等致血型抗体异常。

15.2.2当反定型检出了与正定型不相符的凝集时（如反定型与0型试剂红细胞凝集）应考虑

血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体。

15.2.3出生3个月内的婴儿ABO血型鉴定只做正定型，不做反定型，具体执行《试管法鉴定

ABO和RhD血型标准操作规程》。

15.3受检者血标本的采集及处理采集受检者静脉血5ml,EDTA,K2干粉抗凝，离心分离血

浆及压积红细胞，将压积红细胞用生理盐水洗涤2—3次后，取压积红细胞30口1加生理盐

水1ml配成约为3%的红细胞盐水悬液。

15.4排除冷自身抗体对血理鉴定的影响ABO血型鉴定正反定型不一-致，反定型与A、B、

。型试剂红细胞均发生凝集时，应做自身对照，如自身对照出现凝集，且置于4c冰箱5min

后凝集反应明显增强，放置于37℃电热恒温水浴箱3min凝集反应消失。考虑是受检者冷自

身抗体引起ABO他型鉴定正反定型不符，应用37℃生理盐水洗涤受检者红细胞3次后做正

定型；执行《吸收试验标准操作规程》7.2：冷自身抗体吸收试验，用受检者吸收后血浆做

正定型。

15.5排除IgM同种抗体多ABO血型鉴定正反定型不一致，反定型受检者血清（血浆）与A、

B、0型试剂红细胞均凝集，自身对照不凝集，置4c冰箱5min后反定型凝集反应明显增强，

自身对照仍不凝集，放置于37c电热恒温水浴箱3min凝集不消失。考虑是受检者IgM型同

种抗体引起ABO血型鉴定正反定型不符，应执行以下步骤：

15.5.1受检血标本红细胞不规则抗体筛选、鉴定，执行《红细胞不规则抗体筛选及鉴定标准操

作规程》。

15.6其他引起ABO血型鉴定正反定型不一致是可能原因有类B、假瀛集、全凝集:、多潮集、

溶血、不能确定特异性的红细胞不规则抗体等，限于本实验室的条件不能确定受检者ABO

血型是，可以送有条件的实验室进一步鉴定，具体执行《血标本管理程序》中对外送检血标

本相关要求。

16.注意事项

16.1出生3个月内的婴儿因自身AB。血型抗体尚未完全产生，而来自其母体的血型抗体又

可影响其血型鉴定，故ABO血型鉴定时只做正定型。

16.2除出生3个月内的婴儿外，ABO血型鉴定必须正反定型结果一致才可确定。

16.3ABO血型鉴定出现正反定型不符时，应首先确认试剂质量合格，技术操作无误后方可执

行本操作规程，常见的试剂及技术原因如下：

7.3.1血型抗体试剂效价太低，亲和力不强。

7.3.2血型抗体试剂被污染。

7.3.3受检或试剂红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体L匕例不适当，易误判为阴性结果。

7.3.4各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相

应的抗体。

7.4受检者血清蛋白紊乱（如高球蛋白血症）常引起红细胞成缗线状排列，应注意与抗原-

抗体特异性凝集相鉴别。

7.5已经吸附有冷自身抗体的红细胞如果经37c生理盐水不能洗涤干净时，可以换用45℃

生埋盐水反熨洗涤，仍不能洗涤干净时，可以在56'C水浴震荡箱内热放散解离冷自身

抗体。

7.6ABO亚型、疾病引起的ABOm型抗原减弱及类孟买血型等都表现为A、B抗原弱表

达，分泌型者都可从唾液中检出血型物质，但类孟买血型红细胞H抗原表现为缺失或

弱表达，而ABO亚型、疾病引起的ABO抗原减弱者红细胞H抗原较强。

7.7ABO亚型与疾病引起的ABO血型抗原减弱者常表现为相似的血型血清学特征，难以

鉴别,对白血病或肿瘤患者如出现A、B抗原弱表达,应待疾病缓解后复检ABO血型，

如弱表达的A、B抗原恢复正常，可与ABO亚型相鉴别。必要时进行PCR-SSP分型

或基因测序分型。

疑难交叉配血试验标准操作规程

m）目的

为规范疑难交义配血试验操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》

4.1.7（2）条款的要求制定本规程。

n）适用范围

适用于医疗机构输血科对临床疑难交又配血受血者，主要是对红细胞ABO血型鉴定困

难、红细胞不规则抗体筛选阳性及自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者的交叉配血试验。

o）职责

医疗机构输血科技术人员负责疑难交叉配血试验。

p）原理

本规程中疑难交叉配血是指受血者ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性或

受血者是自身免疫性溶血性贫血患者等情况下的交叉配血试验。配血前需确定受血者的

ABO血型或红细胞不规则抗体的特异性，选择ABO血型相容的红细胞或红细胞不规则抗体

对应抗原阴性的红细胞进行交叉配血试验。

q）所需设备和试剂

普通离心机，血型血清学专用离心机，水浴震荡仪，普通显微镜等。

r）检测环境条件

室温应控制在I8-27C,湿度应保持30%-70%。

s）步骤与方法

7.1交叉配血前受血者ABO血型鉴定不确定者执行《ABO疑难血型鉴定标准操作规程》，确

定ABO血型后，再选择ABO血型相同或相容的献血者血液进行交叉配血试验。

7.2红细胞不规则抗体筛选阳性时

7.2.1随机与库存血中多袋血液进行交叉配血试验，选择交叉配血相合的血液输注。

7.2.2我院库存血中无相合的血液时，应立即联系临床医生说明情况：①上述实际情况；②

应送市血液中心进行“疑难配血”，会产生费用，存在配血不成功的可能；③详细告知家属，

决定是否送市血液中心。

723家属同意后，由医生填写“免疫学申请单”，并抽取血样EDTA抗凝血5-10ml,送输血

科。

7.2.4输血科联系血液中心，并送血样。

7.3冷型自身抗体或冷型AIHA患者交叉配血试验：执行722-724程序

t）交叉配血结果判定

中侧、次侧交叉配血均无溶血、无序集：,表示配而.和合.对干AIHA患者.已经排除同

种抗体的存在，而所有交叉配血乂都不相和时，可选择凝集强度弱于自身凝集的血液输注。

9.质量控制

9.1用于试验的所有试剂都在有效期内使用，使用前正行质量控制试验，不合格的试剂不

能使用。

9.2严格试验操作，设置必要的阴阳性对照，结果符合预期才可判定试睑结果。

3.注意事项

10.1遇到交叉配血不合时，应根据具体情况先进行初步分析，再有针对性地解决问题，

10.1.1主侧交叉配血不相和的原因有：①受血者或献血者ABO血型错误或二者的ABO血型

不配合；②受血者血清（血浆）中存在与献血者红细胞血型不相和的同种抗体，或可与献血

者红细胞抗原反应的非特异性抗体；③献血者红细胞已被致敏，导致抗球蛋白法交叉配血试

验呈阳性；④患者血清弁常如白蛋白/球蛋白比例异常引起缗线状凝集，血清中存在高分子

聚合物的血浆扩容剂也可引起假阳性（可用生理盐水添加试验解决）；⑤试验系统被污染。

I0.L2次侧交又配血不相和的原因：①献血者血清（血浆）中存在针对患者红细胞抗原的抗

体；②受血者与献血者的ABO血型不相和；③受血者红细胞已经被致敏，DAT阳性。

10.2引起交叉配血困难的原因很多，而且解决疑难交叉配血问题常需完成多项复杂的试验，

因此对可能引起交叉配血困难的受血者应尽早做相关检测。

10.2.1对可能输血治疗的患者在入院时应尽早进行ABO和RhD血型鉴定，血型鉴定存在疑

问时尽早查明原因，明确ABO和RhD血型。

1022对有输血史、妊娠史并可能输血治疗的患者，在入院时即进行红细胞不规则抗体筛选

试验，结果阳性者应尽早鉴定抗体特异性。

10.2.3对溶血性贫血的患者应尽早做抗球蛋白试验，并正确鉴定ABO和RhD血型。

10.3有冷凝集素的患者需紧急输血时，可先采用37c预温交叉配血技术来解决无临床意义

的冷抗体引起的交叉配血不配合。

10.4对温型AIHA患者在贫血状态未危急生命的情况下应尽量避免输血。

10.5对重型地中海贫血等需要长期输血治疗者，每次输血应选择Rh系统D、C、E、c、e

相同，尽可能Kidd(Jka,FyD系统和Duffy(Fya,Fy7)系统抗原相同的献血者红细胞，

以尽量减少同种免疫性抗体产生的几率。

紧急非同型交叉配血试验标准操作规程

1.目的

为规范紧急情况下非同型输血前交叉配血试验操作，保证临床紧急用血的安全、及时、

有效，依据《输血实验室管理程序》4.1,7(2)条款的要求制定本规程。

2.适用范围

适用于医疗机构输血科进行紧急非同型红细胞血液成分输血前的交叉配血试验。

3.职责

医疗机构输血科技术人员负责紧急情况下非同型输血前的交叉配血试验。

4.原理

当发生急性大量失血时，需要对患者紧急输血，但如缺乏ABO或RhD同型的血液，

可按《紧急非同型血液输注管理规程》表8-2原则输血，输注红细胞应主侧配血相合。

RhD阴性患者，没有检测到抗D时，紧急情况下也可选择RhD阳性的红细胞进行交

叉配血。

新生儿需紧急换血治疗时，首先确定是否为HDN患儿，如果为ABO血型不合引起的

HDN,应选择O型红细胞和AB型血浆进行换血治疗。如果为Rh系统血型不合引起的HDN,

应选择ABO血型与患儿相同，Rh血型与母亲相同的红细胞进行交叉配血。

5.所需设备和试剂

5.1设备普通离心机，血清学专用离心机，电热恒温水浴箱，普通显微镜

5.2试剂凝聚胺试剂盒，抗球蛋白试剂。

6.检测环境条件

室温应控制在18-27C,湿度应保持30%-70%

7.步骤与方法

7.1受血者血标本的处理

7.1.1将受血者血标本离心分离血清（血浆）及红细胞，取2支试管，分别标记受血者的唯

一性标识，吸取离心后血标本血清（血浆）到•支已标识的试管内；吸取红细胞30ul到另

一只已标识的试管内，加生理盐水1ml稀释成3%的红细胞悬液。

7.1.2鉴定受血者ABO和RhD血型，执行《试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程》。

7.1.3受血者红细胞不规则抗体筛选及鉴定,执行《红细胞不规则抗体筛选及鉴定标准操作

规程》。

7.2献血者血液成分的选择及血标本的处理

721根据患者病情紧急需要，按《紧急非同型血液输注管理规程》表8-2原则选择血液成

分。

7.2.2剪去献血者血袋上一段留样管，取1支试管标记献血者唯一性标识，将剪下的血标本

盛入标识的试管中，离心分离血清（血浆）及红细胞；另取2支试管分别标记献血者唯一性

标识，吸取献血者血标本血清（血浆）到一支己标识的试管内；吸取献血者红细胞30：川到

另一支已标识的试管内，加生理盐水1ml稀释成3%的纥细胞悬液。

7.2.3复检献血者ABO和RhD血型，执行《试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程》。

7.3根据721选择的非同型血液成分确定实施交叉配血的主侧或次侧

7.3.1ABO非同型相容输注含红细胞的血液成分只进行主侧交叉配血试验。

7.3.2RhD非同型输注含红细胞的血液成分按《紧急非同型血液输注管理规程》执行，不做

交叉配血试验。

7.3.3ABO及RhD非同型输注不含红细胞的血液成分按《紧急非同型血液输注管理规程》执

行，不做交叉配血试验。

7.4紧急非同型输注含红细胞的血液成分的交叉配血

7.4.1盐水介质法交叉配血试验

（1）取试管2支，分别标记为主侧、次侧，主侧加受血者血清（血浆）2滴、献血者3%红

细胞悬液1滴，混匀；次侧加献血者血清(血浆)2滴、受血者3%红细胞悬液1滴，混匀。

(2)用血型血清学专用离心机以120g离心Imin。

(3)结果判读：先观察有无溶血，再轻轻转动试管，观察有无凝集，如无溶血、无凝集，

继续进行凝聚胺法或抗球蛋白法交叉配血试验。若盐水介质法交叉配血试验有凝集或溶血时,

应复检受血者及献血者ABO及RhD血型，具体执行《试管法鉴定ABO和RhD血型标准操

作规程》

7.4.2凝聚胺法交叉配血试验

17.盐水介质法交叉配血结果无凝集、无溶血时转做凝聚胺试验，具体执行《凝聚胺试验标

准操作规程》。

18.结果判读：显微镜卜.观察，阴性时为交叉配血相合，阳性表明交叉配血不相合。

7.4.3

(1)盐水介质法交叉配血结果无凝集.无溶血