2026年分子诊断技术试卷(附答案)

2026年分子诊断技术试卷(附答案)一、单项选择题（每题1分，共20分）1.聚合酶链反应（PCR）中使用的耐热DNA聚合酶主要来源于（）A.大肠埃希菌B.水生栖热菌C.枯草芽孢杆菌D.酿酒酵母答案B2.逆转录PCR（RT-PCR）中，将RNA逆转录为cDNA所需的酶是（）A.TaqDNA聚合酶B.逆转录酶C.限制性内切酶D.DNA连接酶答案B3.双链DNA变性（解链）温度TmA.DNA片段长度B.碱基组成（G+C含量）C.溶液体积D.核酸纯度答案B解析G+C含量越高，氢键数目越多，Tm4.TaqMan探针法实时荧光定量PCR中，探针5′端标记的基团是（）A.淬灭基团B.报告荧光基团C.生物素D.地高辛答案B5.无创产前检测（NIPT）主要检测孕妇外周血中的（）A.胎儿有核红细胞B.胎儿游离DNAC.母体游离DNAD.循环肿瘤细胞答案B6.目前基因突变检测公认的“金标准”方法是（）A.ARMS-PCRB.高分辨率熔解曲线分析C.Sanger测序D.基因芯片答案C7.Southernblot技术用于检测（）A.RNAB.蛋白质C.DNAD.脂类答案C8.核酸电泳后最常用的核酸染色剂是（）A.考马斯亮蓝B.溴化乙锭C.苏木精D.伊红答案B9.数字PCR（dPCR）与传统实时荧光定量PCR相比，最突出的优势是（）A.灵敏度更高B.无需标准曲线即可绝对定量C.检测速度更快D.可同时检测RNA和DNA答案B10.分子诊断实验室中，扩增区与产物分析区之间应保持（）A.正压B.负压C.常压D.无特殊要求答案B解析扩增区与产物分析区保持负压，可防止扩增产物气溶胶扩散污染其他区域。11.ARMS-PCR（扩增受阻突变系统）主要用于检测（）A.基因大片段缺失B.已知点突变C.DNA甲基化状态D.染色体易位答案B12.宫颈脱落细胞HPVDNA检测最常用的标本采集方式是（）A.静脉采血B.宫颈拭子或宫颈刷C.晨尿D.粪便答案B13.实时荧光定量PCR中，某样本的Ct值越大，提示该样本中初始模板量（）A.越大B.越小C.不变D.无法判断答案B14.循环肿瘤DNA（ctDNA）主要来源于（）A.正常淋巴细胞B.肿瘤细胞凋亡或坏死释放C.病毒DNAD.细菌DNA答案B15.甲基化特异性PCR（MSP）用于检测（）A.基因突变B.基因拷贝数变异C.DNA甲基化状态D.染色体结构异常答案C16.核酸提取纯度的常用评价指标为（）A.A260B.A280C.电泳迁移率D.沉淀体积答案A解析纯DNA的A26017.荧光原位杂交（FISH）技术主要用于检测（）A.基因表达水平B.染色体数目和结构异常C.蛋白质含量D.代谢产物浓度答案B18.药物基因组学检测中，CYP2C19基因多态性主要用于指导（）A.华法林用药B.氯吡格雷用药C.二甲双胍用药D.阿司匹林用药答案B19.分子诊断中常用的内参基因是（）A.β-actin基因B.血红蛋白基因C.胰岛素基因D.白蛋白基因答案A20.下列哪项属于分子诊断在感染性疾病中的应用（）A.血常规检测白细胞计数B.HBVDNA定量检测C.尿常规检测D.肝功能生化检测答案B二、多项选择题（每题2分，共20分）1.分子诊断技术的临床应用领域包括（）A.感染性疾病病原体检测B.遗传病诊断C.肿瘤基因突变检测D.血常规检查答案ABC解析血常规检查属于临床基础检验范畴，不属于分子诊断技术。2.实时荧光定量PCR中常用的荧光化学体系包括（）A.SYBRGreenIB.TaqMan探针C.分子信标D.溴化乙锭答案ABC解析溴化乙锭主要用于凝胶电泳染色，不用于实时荧光定量PCR体系。3.临床常用的核酸提取方法包括（）A.酚-氯仿法B.磁珠法C.硅胶膜离心柱法D.密度梯度离心法答案ABC解析密度梯度离心法主要用于分离细胞或亚细胞结构，不用于常规核酸提取。4.分子诊断实验室防止核酸污染的措施包括（）A.实验分区管理B.使用UNG酶防污染系统C.紫外照射消毒D.使用带滤芯吸头答案ABCD5.液体活检的检测靶标包括（）A.循环肿瘤DNAB.循环肿瘤细胞C.外泌体D.血红蛋白答案ABC解析血红蛋白属于血液生化成分，不属于液体活检肿瘤相关靶标。6.常见的基因突变类型包括（）A.点突变B.插入或缺失C.染色体易位D.基因扩增答案ABCD7.二代测序（NGS）的主要技术平台包括（）A.Illumina测序平台B.IonTorrent平台C.Sanger测序平台D.单分子实时测序（SMRT）平台答案AB解析Sanger测序属于一代测序，SMRT属于三代测序，均不属于二代测序平台。8.分子诊断质量保证体系包括（）A.室内质控B.室间质评C.标准操作程序（SOP）D.人员培训与考核答案ABCD9.下列关于实时荧光定量PCR中Ct值的描述，正确的有（）A.Ct值是指荧光信号达到设定阈值时所对应的循环数B.Ct值与初始模板量成正比C.Ct值与初始模板量成反比D.Ct值越小，初始模板量越大答案ACD解析Ct值与初始模板量呈反比关系，模板量越大，达到阈值的循环数越少。10.基因芯片技术可用于（）A.基因表达谱分析B.基因突变检测C.单核苷酸多态性（SNP）分型D.染色体核型分析答案ABC解析染色体核型分析属于细胞遗传学技术，不依赖基因芯片。三、填空题（每空1分，共10分）1.PCR的中文全称是____，其核酸扩增原理模拟的是细胞DNA的____复制方式。答案聚合酶链反应；半保留2.DNA双链中，A与T配对，G与C配对，其中G-C碱基对之间形成______个氢键。答案33.逆转录PCR（RT-PCR）以______为模板，在逆转录酶催化下合成cDNA。答案RNA4.Southernblot用于检测____，Northernblot用于检测____。答案DNA；RNA5.核酸溶液在波长______nm处有最大紫外吸收峰。答案2606.实时荧光定量PCR中，Ct值与初始模板量呈______关系。答案反比7.分子诊断实验室常用的防污染酶系统是______酶系统。答案UNG（尿嘧啶-N-糖基化酶）8.循环肿瘤DNA的英文缩写是______。答案ctDNA四、名词解释（每题5分，共20分）1.聚合酶链反应（PCR）答案一种体外酶促扩增特定DNA片段的技术。以一对人工合成的寡核苷酸为引物，在耐热DNA聚合酶催化下，通过高温变性、低温退火、适温延伸三步循环，使靶DNA片段呈指数级扩增，短时间内可获得大量目的片段。2.实时荧光定量PCR（qPCR）答案在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线或Ct值对初始模板量进行定量分析的技术。具有灵敏度高、特异性强、可准确定量、闭管检测等优点。3.基因芯片答案又称DNA微阵列，是将大量已知序列的核酸探针高密度固定于固相载体表面，与荧光标记的待测核酸样品进行杂交，通过检测杂交信号的强度与位置，实现核酸序列大规模平行检测与分析的技术。4.液体活检答案通过检测血液、尿液、脑脊液等体液中的循环肿瘤DNA（ctDNA）、循环肿瘤细胞（CTC）、外泌体等肿瘤来源物质，对肿瘤进行无创或微创检测的新兴技术，广泛应用于肿瘤早期筛查、疗效监测、耐药检测和预后评估。五、简答题（每题6分，共18分）1.简述PCR反应的基本原理与主要步骤。答案PCR是一种选择性体外扩增DNA片段的方法，利用DNA半保留复制原理，以靶DNA为模板，以一对与靶序列两端互补的寡核苷酸为引物，在耐热DNA聚合酶催化下，通过变性—退火—延伸的周期性循环，使靶DNA片段呈指数级增长。每个循环包括三步：（1）高温变性：加热至94~95℃，使双链DNA解链为两条单链；（2）低温退火：降温至50~65℃，使引物与模板DNA互补序列特异性结合；（3）适温延伸：升温至72℃左右，TaqDNA聚合酶以dNTP为原料，从引物3′端沿模板方向合成新链。经过约25~40次循环，可将目标DNA片段扩增上百万倍。2.简述分子诊断实验室防止核酸污染的主要措施。答案（1）严格分区：实验室分为试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区，各区间人员、物品、气流单向流动，防止交叉污染；（2）规范操作：使用带滤芯吸头，避免气溶胶产生；操作时佩戴手套、口罩、帽子，及时更换；（3）UNG防污染系统：以dUTP替代dTTP参与PCR扩增，下次扩增前用UNG酶降解含U的残留扩增产物；（4）环境清洁消毒：定期用紫外照射、次氯酸钠擦拭实验台面和仪器表面；（5）设置对照：每次实验设置无模板阴性对照和阳性对照，监测污染情况。3.简述分子诊断技术在肿瘤精准医疗中的主要应用。答案（1）肿瘤易感基因检测：如BRCA1/2基因突变检测，评估遗传性乳腺癌或卵巢癌风险；（2）肿瘤分子分型：通过基因表达谱、基因突变谱对肿瘤进行分子分型，指导个体化治疗；（3）靶向药物伴随诊断：如EGFR基因突变检测指导吉非替尼、厄洛替尼用药，ALK融合基因检测指导克唑替尼用药；（4）化疗药物敏感性与毒性预测：如UGT1A1*28基因多态性预测伊立替康的毒性反应；（5）微小残留病（MRD）监测：通过检测肿瘤特异性基因突变或融合基因，监测治疗后微小残留病灶；（6）疗效监测与耐药检测：动态检测ctDNA突变负荷，评估疗效并早期发现耐药突变。六、论述题（12分）1.某临床实验室拟开展乙型肝炎病毒（HBV）DNA定量检测项目，请从检测方法选择、实验室分区与防污染、质量控制、结果报告与临床意义等方面论述项目实施要点。答案（1）检测方法选择推荐采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术，建议选用TaqMan探针法以提高特异性。检测靶标通常选择HBV基因组S区或C区保守序列。建立标准曲线，定量范围应覆盖10IU/mL~10⁸IU/mL，最低检出限应达到10IU/mL或更低。试剂盒应选择国家药品监督管理局（NMPA）批准上市、具有医疗器械注册证的检测试剂。（2）实验室分区与防污染按分子诊断实验室规范设置四个独立区域：试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区。各区间人员、物品、气流单向流动，扩增区和产物分析区保持负压。使用UNG防污染系统，使用带滤芯吸头，定期进行紫外消毒和环境监测。每日实验需设置阴性对照、阳性对照和临界值质控品，以监测交叉污染情况。（3）质量控制①室内质控：每批实验设置阴性对照、阳性对照、弱阳性（临界值）质控品，绘制Levey-Jennings质控图，监测批间变异和趋势变化；②室间质评：定期参加国家卫生健康委临床检验中心或省级临床检验中心组织的HBVDNA室间质量评价；③人员培训：操作人员须经分子诊断技术培训并考核合格后上岗；④仪器维护：扩增仪、生物安全柜、离心机等设备定期校准与维护保养。（4）