2025年生物色谱分析笔试试卷及答案

2025年生物色谱分析笔试试卷及答案一、单项选择题（每题2分，共20分）1.在色谱分离中，组分在固定相和流动相之间达到分配平衡时，其在两相中的浓度比称为：A.保留时间B.分配系数C.分离度D.容量因子答案B2.反相高效液相色谱中，固定相的极性通常比流动相：A.大B.小C.相等D.不确定答案B3.分子排阻色谱分离生物大分子的主要依据是：A.分子大小B.分子极性C.分子电荷D.分子亲和力答案A4.范第姆特方程H=A.流动相流速B.固定相颗粒大小及填充均匀性C.组分在流动相中的扩散系数D.柱温答案B5.气相色谱一般不适用于直接分析生物大分子，主要原因是生物大分子通常：A.沸点低B.易挥发C.热不稳定、难挥发D.极性极弱答案C6.亲和色谱中，洗脱与固定相配基结合的目标生物分子，最常用的方法是：A.升高柱温至100℃B.加入竞争性配基或改变pH和离子强度C.增加有机溶剂比例D.延长保留时间答案B7.理论塔板数N的计算公式为N=16tA.半峰宽B.峰底宽C.峰高D.峰面积答案B8.生物样品蛋白沉淀法中，下列哪种试剂不能有效沉淀蛋白质？A.乙腈B.甲醇C.三氯乙酸D.磷酸盐缓冲液答案D9.高效液相色谱采用紫外检测器时，主要局限是：A.不能采用梯度洗脱B.对无紫外吸收的化合物需衍生化或改用其他检测器C.灵敏度极低，不适合微量分析D.不能用于生物样品分析答案B10.分离度Rs的计算式为Rs=A.0.5B.1.0C.1.5D.2.0答案C二、多项选择题（每题3分，共15分）1.影响高效液相色谱柱效的主要因素包括：A.固定相颗粒大小B.流动相流速C.柱温D.检测器波长答案ABC解析检测器波长影响灵敏度，不直接影响柱效。柱效主要受固定相粒度、填充均匀性、流动相流速、柱温等影响。2.生物样品分析中，常用的前处理方法有：A.液液萃取B.固相萃取C.蛋白沉淀D.柱后衍生化答案ABC解析柱后衍生化属于检测前衍生，不属于样品前处理净化方法。3.高效液相色谱仪可配备的检测器包括：A.紫外-可见检测器B.荧光检测器C.蒸发光散射检测器D.氢火焰离子化检测器答案ABC解析氢火焰离子化检测器（FID）主要用于气相色谱，不能用于常规高效液相色谱。4.凝胶过滤色谱（分子排阻色谱）中，下列描述正确的有：A.大分子先被洗脱B.小分子后被洗脱C.分离基于分子大小D.大分子进入凝胶孔内而滞留答案ABC解析大分子不能进入凝胶孔内，因此沿颗粒间隙流出，先被洗脱；小分子可进入孔内，后洗脱。5.色谱定量分析中，常用的定量方法有：A.外标法B.内标法C.归一化法D.标准加入法答案ABCD解析上述方法均为常用色谱定量方法，其中外标法和内标法最为常用；标准加入法在生物样品等复杂基质中应用较多。三、填空题（每空1分，共15分）1.高效液相色谱仪的基本组成包括高压输液系统、进样系统、__、、__五大部分。答案色谱分离系统；检测系统；数据处理系统2.范第姆特方程为H=A+B答案涡流扩散项；纵向分子扩散项；传质阻力项3.分子排阻色谱又称__、、__，其分离主要依据分子大小不同。答案凝胶过滤色谱；凝胶渗透色谱；尺寸排阻色谱4.反相高效液相色谱常用的键合固定相是__，流动相通常由和__组成。答案十八烷基硅烷键合硅胶（或C18）；甲醇或乙腈；水或缓冲溶液5.色谱定量方法中，__法要求所有组分均出峰且需测定校正因子；法需向样品中加入已知量的标准物质；__法通过峰面积与标准溶液浓度直接计算，无需校正因子。答案归一化；内标；外标四、名词解释（每题2分，共10分）1.保留时间答案组分从进样开始到色谱柱后出现浓度极大点的时间，用tR2.分离度答案衡量相邻两组分色谱峰分离程度的参数，用Rs表示，Rs=3.反相色谱答案以非极性固定相（如C18）和极性流动相（如水-甲醇或水-乙腈）组成的色谱体系，组分按极性由强到弱依次洗脱，极性强的组分保留弱。4.亲和色谱答案利用生物大分子与固定相上特定配基之间可逆的特异性亲和作用进行分离的色谱方法，如酶-底物、抗原-抗体等。5.固相萃取答案基于液相色谱分离原理的样品前处理技术，利用固体吸附剂选择性吸附目标物或杂质，通过洗脱达到净化、富集目的。五、简答题（每题5分，共20分）1.简述反相高效液相色谱的分离机制及影响保留时间的主要因素。答案反相色谱的固定相为非极性键合相，流动相为极性溶剂。分离机制主要基于组分在固定相和流动相之间的疏水分配作用，非极性越强的组分与固定相作用越强，保留时间越长。影响保留的主要因素包括：固定相键合基链长和覆盖率、流动相中有机溶剂种类和比例、流动相pH值、柱温等。2.生物样品分析中为什么要进行样品前处理？请列举至少三种常用前处理方法。答案生物样品基质复杂，含有大量蛋白质、脂类、无机盐等干扰物，且目标药物或生物分子浓度低，直接进样会污染色谱柱、干扰分离和检测，因此需通过前处理除去干扰物、富集目标物、改善分离度和灵敏度。常用方法有蛋白沉淀法、液液萃取法、固相萃取法等。3.简述分子排阻色谱分离生物大分子的原理及主要应用。答案分子排阻色谱以多孔凝胶为固定相，分子大小不同的组分在柱中按体积排阻程度差异分离：大分子不能进入凝胶孔内，沿颗粒间隙快速流出；小分子可进入孔内，路径长，后流出。主要应用于生物大分子的脱盐、分子量测定、聚合物分级、蛋白复性等。4.色谱分析方法学验证中常用的考察指标有哪些？（列出至少5个）答案常用指标包括：专属性、线性与范围、精密度、准确度、检测限、定量限、重复性、耐用性等。六、计算题（每题10分，共20分）1.某高效液相色谱分析中，测得A、B两组分保留时间分别为tRA=3.2 min、(1)两组分的分离度Rs(2)两组分的选择性因子α；(3)判断两组分是否达到基线分离。答案(1)Rs(2)容量因子kA=tRA(3)因为Rs解析分离度和选择性因子计算是色谱分析基本内容。注意保留时间需扣除死时间后再求容量因子和选择性