输血相容性检测操作指南2023

输血相容性检测操作指南2023一、适用范围与规范性引用文件本指南适用于各级医疗机构输血科（血库）、采供血机构输血相容性检测实验室开展的红细胞、血小板、血浆及冷沉淀等血液成分输注前的相容性检测工作，为操作人员提供标准化操作依据，降低输血不良反应发生风险，保障临床输血安全。本指南编制参考以下文件：《中华人民共和国献血法》《医疗机构临床用血管理办法》（卫生部令第85号）《临床输血技术规范》（卫医发〔2000〕184号）《全国临床检验操作规程（第4版）》《输血医学实验室质量和能力认可准则》（CNAS-CL02-A005:2021）《红细胞血型检测技术规范》（WS/T794-2022）《临床输血相容性检测项目选择及结果应用专家共识》（2022年）。二、标本管理要求2.1标本采集1.身份核对要求：采集前需同时核对患者腕带、临床输血申请单信息，确认患者姓名、性别、年龄、住院号/门诊号、床号、血型（既往记录）等信息完全一致，无误后方可采集。无自主意识患者需由陪同人员确认身份，新生儿需同时核对母亲身份信息及腕带标识。2.采集容器要求：红细胞相容性检测需采用EDTA-K₂抗凝采血管（紫色帽），抗凝比例符合1.5~2.2mgEDTA-K₂/ml血液的标准；血小板抗体检测及交叉配血可采用EDTA-K₂抗凝标本或非抗凝标本（血清），凝血因子相关相容性检测需采用枸橼酸钠抗凝采血管（蓝色帽），抗凝比例为1:9。采血管需在有效期内，无破损、无渗漏。3.采集操作要求：避免在输液侧肢体采集标本，防止输入的液体稀释血液或药物干扰检测结果。采集时优先采集输血相容性检测标本，避免其他采血管添加剂交叉污染。采集后立即颠倒混匀8~10次，确保抗凝充分，无凝块。4.标本标识要求：采集后即刻在采血管上粘贴唯一标识条码，条码信息包含患者姓名、住院号、采集时间、采集人姓名，条码需贴合管壁、无褶皱，确保扫码设备可正常识别。2.2标本接收与存储1.接收核对要求：实验室接收标本时需核对输血申请单信息与采血管标识是否一致，检查标本量（红细胞相容性检测需≥2ml，血小板抗体检测需≥3ml）、是否存在凝块、溶血、脂血、黄疸等情况。以下标本为不合格标本，需退回临床重新采集：信息不一致、标识模糊无法识别的标本；采集量不足的标本；有凝块、严重溶血（游离血红蛋白≥1g/L）、重度脂血（甘油三酯≥11.3mmol/L）的标本；采集时间超过72小时的标本；抗凝剂使用错误的标本。2.标本存储要求：接收后未检测的标本需置于2~6℃冰箱保存，避免反复冻融。检测后标本需于2~6℃条件下保存至少7天，用于输血不良反应回溯调查。特殊稀有血型患者标本需冷冻（-20℃以下）保存至少6个月。三、红细胞输血相容性检测流程3.1ABO血型鉴定ABO血型鉴定需同时进行正定型（红细胞抗原检测）和反定型（血清抗体检测），两者结果一致方可判定血型。1.试剂与设备要求：抗-A、抗-B标准血清：效价≥128，亲和力≤15秒，符合《红细胞血型试剂》（GB18469-2012）要求，在有效期内使用；标准A、B、O型红细胞：浓度2%~5%，由具备资质的厂家提供，无溶血、无凝集，在有效期内使用；设备：离心机（离心力1000g，离心时间1分钟）、37℃水浴箱、光学显微镜（放大倍数10×40）。2.**操作步骤：正定型：取洁净玻片/微孔板，分别加入1滴抗-A、1滴抗-B血清，再分别加入1滴2%~5%的待检红细胞生理盐水悬液，轻轻混匀，1000g离心1分钟后观察结果。凝集强度≥1+为阳性，无凝集为阴性。反定型：取洁净玻片/微孔板，分别加入1滴待检血清，再分别加入1滴2%~5%的标准A、B、O型红细胞悬液，轻轻混匀，1000g离心1分钟后观察结果。O型红细胞孔无凝集为阴性，排除意外抗体干扰。3.**结果判定规则：正定型抗-A正定型抗-B反定型A细胞反定型B细胞反定型O细胞判定血型+--+-A型-++--B型++---AB型--++-O型3.2RhD血型鉴定1.常规检测要求：所有患者输血前需常规检测RhD抗原，采用IgM型抗-D试剂，操作方法同ABO正定型，离心后观察结果，凝集为RhD阳性，无凝集为RhD阴性初筛结果。2.弱D与部分D鉴定：RhD阴性初筛标本需进一步进行弱D检测：采用抗-IgG的抗人球蛋白试剂，将待检红细胞与IgG型抗-D试剂37℃孵育30分钟，生理盐水洗涤3次后加入抗人球蛋白试剂，离心后观察结果，凝集为弱D/部分D型。3.结果应用：弱D/部分D型患者作为受血者时，按照RhD阴性管理，输注RhD阴性红细胞；作为供血者时，按照RhD阳性管理，避免输注给RhD阴性受血者。3.3不规则抗体筛查与鉴定不规则抗体指抗-A、抗-B以外的红细胞血型抗体，是导致溶血性输血反应、新生儿溶血病的重要原因，所有需要输血的患者、妊娠12周以上的孕妇需常规进行不规则抗体筛查。1.试剂要求：筛查细胞需至少包含3份O型红细胞，覆盖以下常见抗原：D、C、c、E、e、M、N、S、s、P1、Leᵃ、Leᵇ、K、k、Fyᵃ、Fyᵇ、Jkᵃ、Jkᵇ，抗原表位明确，浓度2%~5%。2.检测方法：优先采用抗人球蛋白试验（微柱凝胶法或试管法），操作步骤如下：取3支微柱凝胶卡/试管，分别标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，每孔/管加入25μl待检血清，再分别加入50μl对应筛查细胞悬液；37℃孵育15分钟（微柱凝胶法）/30分钟（试管法）；微柱凝胶卡1000g离心5分钟，试管法用生理盐水洗涤3次后加入抗人球蛋白试剂，1000g离心1分钟；观察结果：红细胞悬浮于凝胶上层/试管底有凝集为阳性，红细胞沉于凝胶底部/试管底无凝集为阴性。3.抗体鉴定：筛查阳性的标本需采用10~16份谱细胞进行抗体特异性鉴定，结合抗体反应格局、患者输血史、妊娠史确定抗体特异性，同时检测对应抗原的效价和37℃反应性，明确其临床意义。仅在4℃反应的冷凝集素、无临床意义的自身抗体无需特殊处理，37℃反应的同种抗体需选择对应抗原阴性的血液进行交叉配血。3.4交叉配血试验交叉配血需同时进行主侧（受血者血清+供血者红细胞）和次侧（受血者红细胞+供血者血清）试验，两者均无凝集、无溶血方可发血。1.方法选择：无输血史、无妊娠史、不规则抗体筛查阴性的患者，可采用盐水介质法+聚凝胺法配血；有输血史、妊娠史、不规则抗体筛查阳性的患者，必须采用抗人球蛋白法（微柱凝胶法/试管法）配血；造血干细胞移植患者、自身免疫性溶血性贫血患者需增加自身对照试验，排除自身抗体干扰。2.**操作要点：严格核对受血者、供血者标本信息，确保标本无误；红细胞悬液浓度控制在2%~5%，血清/血浆比例符合试剂要求；聚凝胺法需严格控制孵育时间、重悬液加入量，避免假阴性/假阳性；微柱凝胶法需避免标本污染、凝胶卡干裂，离心参数符合试剂说明书要求。3.结果判读：主、次侧均无凝集、无溶血，为配血相合，可以发血；主侧凝集/溶血，为配血不合，禁止发血，需重新筛选供血者，查找凝集原因；次侧凝集且无临床意义（如受血者为AB型、供血者血清存在低效价抗-A/B），经输血科主任审核后可谨慎发放，输注时减慢速度，密切监测不良反应。四、血小板输注相容性检测流程4.1血小板相容性检测适用人群以下患者需常规进行血小板输注相容性检测：血小板输注无效（两次输注后血小板计数校正增加值CCI<7.5×10⁹/L输注后1小时或<4.5×10⁹/L输注后24小时）的患者；有多次输血史、妊娠史的患者；拟长期输注血小板的血液病、肿瘤放化疗患者；新生儿同种免疫性血小板减少症患者。4.2血小板抗体检测1.检测项目：首先进行血小板相关抗体（HLA抗体、HPA抗体）筛查，采用固相红细胞吸附法或流式细胞术，灵敏度≥90%，特异性≥85%。2.抗体特异性鉴定：抗体筛查阳性的患者需进一步鉴定抗体特异性，HLA抗体采用单抗原微珠法鉴定HLA-I类抗体特异性，HPA抗体采用已知HPA基因型的血小板谱细胞鉴定特异性。4.3血小板交叉配血1.配血方法：采用固相凝集法或流式细胞术，操作步骤如下：取固相板，每孔加入1滴待检供血者血小板悬液，固定后洗涤；加入待检患者血清，37℃孵育30分钟，洗涤后加入抗人球蛋白标记的指示红细胞；离心后观察结果：指示红细胞均匀覆盖孔底为阳性（配血不合），指示红细胞聚集于孔底中央为阴性（配血相合）。2.结果应用：HLA抗体阳性患者，优先选择HLA-I类抗原匹配的血小板，匹配程度根据A、B位点相合数量分为4个位点全合、3个位点相合、2个位点相合，优先选择相合位点多的供血者；HPA抗体阳性患者，选择对应HPA抗原阴性的血小板进行输注；同时存在HLA和HPA抗体的患者，需同时满足HLA匹配和HPA抗原阴性的要求。五、其他血液成分相容性检测要求5.1血浆与冷沉淀输注1.ABO相容性要求：血浆、冷沉淀需选择ABO同型或相容性输注，相容性规则如下：受血者血型可输注的血浆/冷沉淀血型A型A型、O型B型B型、O型AB型AB型、A型、B型、O型O型O型5.2粒细胞输注1.必须进行红细胞ABO、RhD同型输注，且交叉配血主侧相合；2.优先选择HLA-I类抗原匹配的供血者，输注前需进行辐照处理（25~30Gy），预防输血相关移植物抗宿主病（TA-GVHD）。六、特殊人群相容性检测特殊要求6.1新生儿与婴幼儿1.4月龄以内婴儿ABO血型鉴定仅需进行正定型，反定型可作为参考，因婴儿自身抗体尚未产生，反定型结果可能出现假阴性；2.新生儿溶血病筛查需同时检测新生儿红细胞直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体试验、抗体释放试验，三项试验阳性结合母婴血型不合可确诊；3.新生儿输血时，交叉配血主侧采用母亲血清+供血者红细胞，次侧采用新生儿红细胞+供血者血清，避免新生儿体内来自母亲的抗体导致溶血反应。6.2造血干细胞移植患者1.移植前需检测供受者ABO、RhD血型，明确血型相合情况（主要相合、主要不合、次要不合、主次均不合）；2.移植后血型转换期内，每次输血前需重新检测患者当前血型，选择合适的血液成分：ABO主要不合患者，红细胞选择受者型，血浆、血小板选择供者型；ABO次要不合患者，红细胞选择供者型，血浆、血小板选择受者型；3.移植后6个月内患者需常规进行抗体筛查，避免移植物产生的抗体导致溶血反应。6.3自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者1.直接抗人球蛋白试验阳性的患者，需首先进行自身抗体吸收试验，去除血清中的自身抗体后再进行不规则抗体筛查和交叉配血，避免假阳性结果导致无法找到相合血液；2.优先选择ABO/RhD同型、交叉配血凝集强度低于自身对照的供血者，输注时减慢速度，密切监测溶血指标变化。七、质量控制与质量保证7.1室内质量控制1.血型鉴定室内质控：每工作日开展ABO、RhD血型鉴定质控，采用高值（抗原表达正常）和低值（抗原弱表达）质控品，结果符合预期方可开展患者标本检测；2.抗体筛查与交叉配血室内质控：每批次试验同时开展阴性质控（AB型血清、O型抗体筛查阴性红细胞）和阳性质控（含低效价抗-D的血清、对应D阳性红细胞），结果符合预期方可判读患者结果；3.质控记录需完整保存至少2年，失控时需分析原因，采取纠正措施，记录纠正过程和效果。7.2室间质量评价1.每年参加国家或省级临床检验中心组织的输血相容性检测室间质评，包括ABO血型鉴定、RhD血型鉴定、不规则抗体筛查与鉴定、交叉配血四个项目，合格率需达到100%；2.室间质评不合格项目需进行根因分析，制定整改措施，跟踪整改效果，避免同类问题重复发生。7.3人员资质要求1.从事输血相容性检测的工作人员需具备医学检验或输血医学相关专业背景，取得相应的专业技术资格证书；2.需经过省级以上卫生行政部门组织的输血技术培训，考核合格后方可上岗；3.每年至少参加1次输血相关继续医学教育培训，更新知识体系。八、结果报告与应急处理8.1结果报告要求1.检测报告需包含以下信息：患者姓名、性别、年龄、住院号、科室、床号、标本采集时间、检测时间、ABO血型、RhD血型、不规则抗体筛查结果、交叉配血结果、供血者信息、检测人、复核人签字/电子签章；2.疑难血型、配血不合等特殊情况需在报告中注明原因、处理意见，经输血科主任审核后发放；3.报告发放前需由两名工作人员双复核，确保信息准确无误。8.2紧急输血应急处理1.危及生命的紧急大出血患者，无法等待血型鉴定和交叉配血结果时，可按照以下原则发放血液：优先发放RhD阴性O型红细胞，无RhD阴性血时，可发放RhD阳性O型红细胞，同时告知临床风险，待患者血型确定后尽快更换同型血；血浆优先发放AB型血浆，待血型确定后更换相容性血浆；2.