ANXA1、ANXA4、CA1表达模式：解锁结直肠癌临床分期密码

ANXA1sANXA4SCA1表达模式:解

锁结直肠癌临床分期密码

一、引言

1.1研究背景与意义

结直肠癌(ColorectalCancer,CRC)作为常见的消化道恶性肿瘤，严重威胁着人类的健

康。近年来，其发病率在全球范围内呈现出上升趋势，在肿瘤所弓I起的死因中排第4位，全

世界每年超过50万患者因CRC死亡。在中国,结直肠癌的发病率也不容小觑，且逐渐趋于

年轻化。其发病机制复杂，涉及遗传、环境、生活方式等多种因素。早期结直肠癌症状隐匿，

缺乏特异性表现，多数患者确诊时已处于中晚期，此时病情往往进展迅速，预后较差。中晚期

结直肠癌不仅会导致肠道功能受损，引起排便习惯改变、便面、肠梗阻等症状，还可能发生证

处转移，侵犯肝脏、肺脏等重要脏器，导致多器官功能衰竭，严重影响患者的生活质量和生存

期。

目前，结直肠癌的治疗主要包括手术、化疗、放疗以及靶向治疗等。然而，由于结直肠癌的异

质性，不同患者对治疗的反应存在差异，治疗效果不尽如人意。此外，结直肠癌的复发率较

高，术后复发转移率可达40%-50%,这给患者和医疗系统带头了沉重的负担。因此，深入

了解结直肠癌的发病机制，寻找有效的诊断、治疗和预后评估指标具有重要的临床意义。

在众多与结直肠癌相关的研究中，蛋白质表达模式的研究成为热点之一。其中，ANXA1、

ANXA4、CA1作为潜在的生物标志物，受到了广泛关注。ANXA1(AnnexinA1)是Annexin

超家族的成员之一，具有钙离子依赖性磷脂结合特性。其N-末端含有多个磷酸化位点，通过

磷酸化修饰参与调节细胞内的多种生物学活动，如细胞增殖、趋化和血管重构等。文献复习发

现，ANXA1的表达情况存在肿瘤类型特异性，在鼻咽癌、前列腺癌等肿瘤中表达降低，而在

结肠癌、胃癌等恶性肿瘤中表达上调，目前较多研究显示ANXA1在结直肠癌中表达上调。

ANXA4(AnnexinA4)同样属于Annexin家族，在细胞的多种生理过程中发挥作用。研究表

明，ANXA4在结直肠癌的发生发展过程中表达出现异常，其表达变化可能与结直肠癌的恶性

程度及预后相关。CA1(CarbonicAnhydrase1)即碳酸酢酶1,参与体内的酸碱平衡调节和

离子转运等生理过程。有研究发现，CA1在结直肠癌组织中的表达与正常组织存在差异，其

表达水平的改变可能与结直肠癌的发病机制密切相关。

本研究旨在探究ANXA1、ANXA4、CA1在不同临床分期结直肠癌中的表达模式，通过分析

这三种蛋白在不同分期结直肠癌中的表达差异，期望能够揭示它们在结直肠癌发生、发展过程

中的作用机制。这不仅有助于我们从分子层面深入理解结直肠癌的发病机制，为结直肠癌的早

期诊断提供潜在的生物标志物，提高早期诊断的准确性，实现早发现、早治疗，改善患者预

后；还能为结直肠癌的治疗提供新的靶点和思路.为开发更有效的治疗策略奠定基础，提高治

疗效果，降低复发转移率；同时，对于评估结直肠癌患者的预后也具有重要意义，有助于医生

制定个性化的治疗方案和随访计划，提高患者的生存质量，具有重要的临床价值和理论意义。

1.2国内外研究现状

在国外，对ANXA1、ANXA4、CA1与结直肠癌关系的研究开展较早。对于ANXA1,早期研

究主要聚焦于其在细胞生理过程中的基础作用，随着对肿瘤研究的深入，逐渐发现其在结直肠

癌中的异常表达。有研究利用免疫组化技术对大量结直肠癌组织样本进行检测，发现ANXA1

在结直肠癌组织中的表达水平显著高于正常组织，且与肿瘤的大小、浸润深度相关。进一步的

细胞实验表明，上调ANXA1的表达能够促进结直肠癌细胞的增殖和迁移，而下调其表达则抑

制细胞的这些恶性行为、揭示了ANXA1在结直肠癌发生发展中的促癌作用。

关于ANXA4,国外学者通过蛋白质组学技术筛选出结直肠癌中差异表达的蛋白质，其中

ANXA4的变化引起了关注。后续研究发现，ANXA4在结直肠癌的不同临床分期中表达存在

差异，在晚期结直肠癌组织中表达明显升高。功能研究证实，ANXA4能够调节结直肠癌细胞

的粘附和侵袭能力，其高表达与肿瘤的远处转移密切相关，提示ANXA4可能作为评估结直肠

癌预后的潜在指标。

在CA1方面，国外研究团队运用基因芯片和蛋白质印迹技术，对比了结直肠癌组织与正常组

织中CA1的表达，发现CA1在结直肠癌组织中表达上调。机制研究显示，CA1通过参与肿

瘤细胞的代谢过程，为肿瘤细胞的生长和增殖提供能量和物质基础，促进结直肠癌的发展。

在国内，相关研究也取得了一定成果。有学者采用实时定量PCR和免疫组化相结合的方法，

对ANXA1在结直肠癌中的表达及临床意义进行研究，结果同样表明ANXA1在结直肠癌组织

中高表达，并且与患者的不良预后相关。进一步探讨其作用机制发现，ANXA1可能通过激活

相关信号通路，促进肿瘤血管生成，为肿瘤的生长和转移提供条件。

对于ANXA4,国内研究人员通过构建结直肠癌动物模型，观察ANXA4表达变化对肿瘤生长

和转移的影响。实验结果表明，抑制ANXA4的表达能够显著抑制肿瘤的生长和转移，初步揭

示了ANXA4在结直肠癌发生发展中的关键作用。同时，临床研究也发现，ANXA4的表达水

平与结直肠癌患者的临床分期、淋巴结转移等病理参数密切相关，为其临床应用提供了依据。

在CA1的研究中，国内团队利用生物信息学分析结合临床样本验证，发现CA1在结直肠癌组

织中的表达与肿瘤的恶性程度呈正相关。通过细胞实验和动物实验进一步证实，CA1能够调

节肿瘤细胞的周期和凋亡，促进肿瘤细胞的增殖.抑制其凋亡，从而推动结直肠癌的发展。

尽管国内外在ANXA1、ANXA4、CA1与结直肠癌关系的研究上取得了诸多成果，但仍存在

一些不足。目前大多数研究主要集中在单一蛋白与结直肠癌的关联，对于这三种蛋白在不同临

床分期结直肠癌中的联合表达模式及相互作用机制的研究较少。在研究方法上，多以细胞实验

和临床样本检测为主，缺乏在体动物实验和临床前瞻性研究的验证，导致研究结果的可靠性和

啕床转化性受到一定限制。此外，对于这三种蛋白作为结直肠癌诊断、治疗和预后评估标志物

的临床应用价值，还需要进一步大规模、多中心的临床研究来明确。

1-3研究目的与内容

本研究旨在深入探究ANXA1、ANXA4、CA1在不同临床分期结直肠癌中的表达模式，揭示

其在结直肠癌发生、发展过程中的潜在作用机制，为结直肠癌的早期诊断、治疗及预后评估提

供新的理论依据和潜在生物标志物。具体研究内容如下：

•ANXA1、ANXA4、CA1在不同临床分期结直肠癌组织中的表达差异检测：收集不同临床

分期（I期、II期、m期、IV期）的结直肠癌组织标本以及相应的癌旁正常组织标本，

运用免疫组化、蛋白质免疫印迹（Westernblot）和实时定量聚合酶链式反应（Real-time

QuantitativePCR）等技术，分别从蛋白质水平和mRNA水平检测ANXA1、ANXA4、

CA1的表达情况。通过对不同分期标本中这三种蛋白表达量的精确测定，明确它们在结直

肠癌发生、发展不同阶段的表达变化规律，分析其表达水平与临床分期之间的相关性。

•ANXA1、ANXA4、CA1表达模式与结直肠癌临床病理参数的相关性分析：详细收集结直

肠癌患者的临床病理资料,包括肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移情况、远处转移情况

等。将ANXA1、ANXA4、CA1的表达模式与这些临床病理参数进行关联分析，探讨这三

种蛋白的表达与肿瘤恶性程度、转移潜能等之间的关系。例如，分析ANXA1高表达是否

与肿瘤的较大体积、较高的组织学分级以及更易发生淋巴结转移相关，从而为评估结直肠

癌患者的病情进展和预后提供有价值的信息。

•ANXA1、ANXA4、CA1对结直肠癌细胞生物学行为的影响研究：选取人结直肠癌细胞

系，通过基因编辑技术（如CRISPR-Cas9系统）构建ANXA1、ANXA4、CA1过表达或

低表达的细胞模型。运用细胞增殖实验（如CCK-8法、EdU掺入实验）、细胞迁移实验

（如划痕实验、Transwell迁移实验）、细胞侵袭实验（如Matrigel包被的Transwell侵袭

实验）以及细胞凋亡检测实验（如AnnexinV-FITC/PI双染法结合流式细胞术）等，研究

这三种蛋白表达水平的改变对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡等生物学行为的影

响。进一步通过裸鼠成瘤实验，在体内验证ANXA1、ANXA4、CA1对肿瘤生长和转移的

作用，深入揭示它们在结直肠癌发生发展中的功能机制。

•ANXA1、ANXA4、CA1在结直肠癌中的作用机制探讨：利用蛋白质组学、基因芯片技术

或生物信息学分析，筛选出与ANXA1、ANXA4、CA1相互作用的蛋白质或相关信号通

路。通过免疫共沉淀（Co-IP）、荧光素酶报告基因实验、Westernblot等方法，验证这

些相互作用关系，并深入研究ANXA1、ANXA4、CA1通过调控哪些关键信号通路来影响

结直肠癌细胞的生物学行为。例如，探究ANXA1是否通过激活PI3K/Akt信号通路促进细

胞增殖和存活，或者ANXA4是否通过调节EMT相关信号通路影响细胞的迁移和侵袭能

力，为结直肠癌的靶向治疗提供潜在的作用靶点和理论基础。

1.4研究方法与技术路线

本研究综合运用实验研究、临床病例分析和生物信息学分析等多种方法，全面深入地探究

ANXA1、ANXA4、CA1在不同临床分期结直肠癌中的表达模式及作用机制。具体研究方法和

技术路线如下：

­样本收集：收集［X］例结直肠癌患者手术切除的新鲜肿瘤组织标本及相应的癌旁正常组织

标本（距离肿瘤边缘25cm）,所有患者术前均未接受放化疗。详细记录患者的临床病理资

料，包括性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移情况、

远处转移情况等，建立临床病例资料库。同时，收集患者的血液标本，分离血清或血浆，

用于后续相关指标的检测。

•检测方法：运用免疫组化技术，对组织标本中的ANXA1、ANXA4、CA1进行定位和半定

量分析，观察其在细胞中的表达部位和相对表达水平；采用蛋白质免疫印迹（Western

blot）技术，从蛋白质水平定量检测ANXA1、ANXA4、CA1在结直肠癌组织和癌旁正常组

织中的表达量，通过与内参蛋白比较，计算目的蛋白的相对表达量；利用实时定量聚合酶

链式反应（Real-timeQualitativePCR）技术，从mRNA水平检测ANXA1、ANXA4、

CA1在组织中的表达情况，以p-actin或GAPDH等管家基因为内参，通过2'AACt法计

算目的基因mRNA的相对表达量。

•细胞实验：选择人结直肠癌细胞系（如HT-29、SW480等），通过基因编辑技术（如

CRISPR-Cas9系统）构建ANXA1、ANXA4、CA1过表达或低表达的细胞模型。运用

CCK-8法在不同时间点检测细胞的增殖活性，绘制细胞生长曲线；通过EdU掺入实验观

察细胞的DNA合成情况，直观反映细胞增殖能力；采用划痕实验在细胞单层上制造划痕，

定时拍照观察细胞迁移情况，测量划痕愈合率；利用Transwell迁移实验和Matrigel包被

的Transwell侵袭实验，分别检测细胞的迁移和侵袭能力；通过AnnexinV-FITC/PI双染

法结合流式细胞术，检测细胞凋亡情况，分析不同处理组细胞凋亡率的差异。

•动物实验：选取裸鼠，将构建好的过表达或低表达ANXA1、ANXA4、CA1的结直肠癌细

胞接种到裸鼠体内，建立裸鼠成瘤模型。定期测量肿瘤体积，观察肿瘤生长情况；在实验

终点处死裸鼠，取出肿瘤组织，进行病理分析和相关指标检测，研究这三种蛋白对肿瘤生

长和转移的影响。

•生物信息学分析：从公共数据库（如TCGA、GE。等）下裁结直肠癌相关的基因表达数据

和临床信息，筛选出ANXA1、ANXA4、CA1的表达数据，并进行标准化处理。利用生物

信息学分析工具，对这些数据进行分析，包括差异表达分析、生存分析、基因富集分析

（GO和KEGG富集分析）等，挖掘这三种蛋白与结直肠癌发生发展相关的潜在分子机制

和信号通路。同时，通过蛋白质•蛋白质相互作用网络分析（PPI网络分析），预测与

ANXA1、ANXA4、CA1相互作用的蛋白质，为进一步实验验证提供线索。

•数据分析：使用SPSS、GraphPadPrism等统计分析软件对实验数据进行统计学分析。计

量资料以均数士标准差（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单

因素方差分析（One-wayANOVA）,若方差不齐则采用非参数检验；计数资料以例数或

率表示，组间比较采用X2检脸或Fisher确切概率法;相关性分析采用Pearson相关分析

或Spearman秩相关分析。以p<0.05为差异具有统计学意义。生存分析采用Kaplan-

Meier法绘制生存曲线，并进行Log・rank检脸比较生存差异。通过统计分析，明确

ANXA1、ANXA4、CA1在不同临床分期结直肠癌中的表达差异，以及它们与临床病理参

数之间的相关性，揭示其在结直肠癌发生发展中的作用和机制。

本研究的技术路线如图1所示：

（此处插入技术路线图，清晰展示从样本收集到最终数据分析的整个流程，包括各步骤之间的

逻辑关系和时间顺序，使读者能够直观地了解研究的实施过程）

二、相关理论基础

2.1结直肠癌概述

结直肠癌是一种源于大肠腺上皮的恶性肿瘤，又称大肠癌，可发生在大肠的各个部位，其中

70%发生于左侧，尤以乙状结肠和直肠最为多见。近年来，结直肠癌的发病率在全球范围内

呈上升趋势，严重威胁人类健康。其发病机制复杂，涉及多种因素的相互作用。

从流行病学特点来看，结直肠癌的发病率在世界不同地区存在显著差异。北美洲、大洋洲地区

的发病率最高，欧洲次之，亚非地区相对较低。在我国，南方尤其是东南沿海地区的发病率明

显高于北方。随着生活方式的西方化和老龄化进程的加速，我国结直肠癌的发病率也在不断攀

升，且发病年龄逐渐提前，与欧美国家相比，我国患者的中位发病年龄提前了十二到十八年，

约为五十到五十五岁。此外，我国直肠癌的发病率高于结肠癌，其中80%以上的直肠癌位于

直肠中下段，可通过直肠指检发现。但在经济发达地区，结直扬癌的好发部位有从直肠向结

肠转移的趋势，且右半结肠癌的比例明显上升。

结直肠癌的发病机制尚未完全明确，但普遍认为是遗传因素与环境因素共同作用的结果。遗传

因素方面，约5%70%的结直肠癌与遗传综合征相关，如家族性腺瘤性息肉病（FAP）、遗

传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC）等。这些遗传综合征患者携带特定的基因突变，使得他

们患结直肠癌的风险显著增加。环境因素在结直肠癌的发生发展中也起着重要作用，长期高

脂、高蛋白、低纤维饮食，缺乏运动，肥胖，吸烟，饮酒等不良生活方式，以及肠道慢性炎

症、细菌感染等，都可能增加结直肠癌的发病风险。此外，某些化学物质和药物也被认为与结

直肠癌的发生有关。

在临床上，为了准确评估结直肠癌患者的病情，制定合理的治疗方案、并预测患者的预后，通

常会对结直肠癌进行分期。目前，常用的分期方法是TNM分期系统，该系统通过评估原发肿

磨（T）的大小、浸润深度，区域淋巴结（N）的转移情况，以及远处转移（M）的有无，将

结直肠癌分为I期、n期、ID期和IV期。I期结直肠癌肿瘤局限于肠壁内，未发生淋巴结

转移和远处转移，n期肿瘤侵犯到肠壁外组织，但无淋巴结转移，m期出现区域淋巴结转

移；iv期则发生了远处转移。

嗡床分期对于结直肠癌的治疗和预后具有至关重要的指导意义。对于I期和部分n期结直

肠癌患者，手术切除是主要的治疗方法，通过根治性手术，患者有可能获得根治，5年生存率

相对较高。而对于m期和iv期患者，除手术外，往往还需要结合化疗、放疗、靶向治疗等

综合治疗手段，以降低肿瘤复发和转移的风险，延长患者的生存期。不同分期的结直肠癌患

者.其预后存在显著差异，分期越早，患者的预后越好。因此，准确的临床分期有助于医生为

患者制定个性化的治疗方案，提高治疗效果，改善患者的预后C

2.2ANXA1、ANXA4、CA1的生物学特性与功能

2.2.1ANXA1

ANXA1,又称膜联蛋白A1,是Annexin超家族的重要成员。其蛋白结构包含一个相对保守的

C木端和一个高度可变的N末端。C木端约由300个氨基酸组成，包含4个序列、结构高度

相似的结构域，被称为"annexinrepeat；这种保守结构域赋予了ANXA1钙离子依赖性磷脂

结合特性，使其能够与细胞膜上的磷脂相互作用，参与细胞的多种生理过程。N末端则是区分

亚家族的主要依据，含有多个磷酸化位点，其中N末端第21位的酪氨酸(Tyr-21)是被表

皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶磷酸化的一个特异位点，同时也是Ca2♦依赖的蛋白激

酶C(PKC)的磷酸化底物。ANXA1通过这些磷酸化修饰参与调节细胞内的多种生物学活

动，如细胞增殖、趋化和血管重构等。

在生物学特性方面，ANXA1具有广泛的生物学功能。它是细胞内介导糖皮质激素抗炎作用的

一种效应囚子，能够下调早期炎症反应，在先天性和适应性免疫反应中发挥多方面的作用。通

过增强T细胞激活触发的信号级联，调节激活T细胞的分化和增殖，促进T细胞分化为Th1

细胞，同时负向调节T细胞分化为Th2细胞，从而显著影响适应性免疫反应。在吞噬作用

中,ANXA1有助于吞噬杯和吞噬体的形成，通过介导吞噬体和肌动蛋白细胞骨架之间的

Ca2+依赖性相互作用，发挥关键作用。此外，ANXA1还通过甲酰肽受体的激活促进粒细胞和

单核细胞的趋化性，导致肌动蛋白细胞骨架的重排、细胞极化和细胞迁移。

在肿瘤研究领域，ANXA1的表达情况存在肿瘤类型特异性。在鼻咽癌、前列腺癌、食管鳞状

细胞癌、头颈部鳞状细胞癌等肿瘤中表达降低，而在结肠癌、食管和胃交界处的腺癌、胃癌、

肾透明细胞癌等恶性肿瘤中表达上调。目前较多研究显示ANXA1在结直肠癌中表达上调，其

高表达可能与结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强有关，提示ANXA1在结直肠癌的发

生发展中可能扮演重要角色。

2.2.2ANXA4

ANXA4属于Annexin家族，其蛋白结构同样具有Annexin家族典型的特征，C末端含有保守

的“annexinrepeat”结构域，负责与钙离子和磷脂的结合，而N末端的独特序列则决定了其

部分特异性功能。ANXA4在多种组织和细胞中广泛表达，参与细胞的多种生理过程。在细胞

内.ANXA4能够与细胞膜相互作用,调节细胞膜的稳定性和流动性.影响细胞的形态和功

能°研究表明，ANXA4在细胞的胞吞和胞吐过程中发挥重要作用，参与细胞内物质的运输和

分泌。

在肿瘤相关研究中，ANXA4与肿瘤的发生发展密切相关。在结直肠癌中，ANXA4的表达出

现异常改变。有研究发现，ANXA4在结直肠癌组织中的表达水平明显高于正常组织，且其表

达量随着肿瘤临床分期的进展而逐渐升高，在晚期结直肠癌组织中表达显著增加。进一步的功

能研究证实，ANXA4能够调节结直肠癌细胞的粘附和侵袭能力。高表达的ANXA4可促进结

直肠癌细胞与细胞外基质的粘附，增强癌细胞的迁移和侵袭能力，从而促进肿瘤的远处转

移。这表明ANXA4可能作为评估结直肠癌预后的潜在指标，其异常表达可能是结直肠癌病

情进展和不良预后的重要因素之一。

2.2.3CA1

CA1,即碳酸酊酶1,是一种含锌金属酶。其分子结构由一条多肽链组成，形成具有特定空间

构象的活性中心，其中锌离子在催化过程中起着关键作用。CA1的生物学特征主要体现在其

对体内酸碱平衡调节和离子转运的重要作用上。它能够催化二氧化碳和水之间的可逆反应，生

成碳酸氢根离子和氢离子，从而参与维持细胞内外的酸碱平衡。在离子转运方面，CA1通过

调节细胞内的碳酸酊酶活性，影响离子的跨膜运输，对细胞的正常生理功能维持至关重要。

在生理功能方面，CA1广泛分布于多种组织和器官中，如红细胞、胃肠道上皮细胞等。在红

细胞中，CA1能够加速二氧化碳的运输和排出，保证气体交换的正常进行；在胃肠道上皮细

胞中，CA1参与胃酸的分泌调节，维持胃肠道的正常消化功能，在肿瘤研究中，越来越多的

证据表明CA1与结直肠癌的发生发展密切相关。研究发现，CA1在结直肠癌组织中的表达与

正常组织存在明显差异、通常在结直肠癌组织中表达上调。进一步的机制研究显示，CA1可

能通过参与肿瘤细胞的代谢过程，为肿瘤细胞的生长和增殖提供能量和物质基础。例如，CA1

通过调节肿瘤细胞内的酸碱环境，促进肿瘤细胞的糖酵解代谢，增强肿瘤细胞的增殖能力，抑

制其凋亡，从而推动结直肠癌的发展。

2.3三者与结直肠癌的相关性研究进展

近年来，ANXA1、ANXA4、CA1与结直肠癌的相关性研究取得了显著进展。研究表明，这三

种蛋白在结直肠癌的发生、发展、转移和预后中发挥着重要作用，其表达模式与结直肠癌的临

床病理特征密切相关。

在结直肠癌的发生发展过程中，ANXA1被发现起着重要的促进作用。大量研究显示，ANXA1

在结直肠癌组织中的表达水平明显高于正常组织,且其表达上调与肿瘤的发生发展密切相关。

有研究通过免疫组化检测了100例结直肠癌组织和50例正常组织中ANXA1的表达，结果显

示结直肠癌组织中ANXA1的阳性表达率为70%,显著高于正常组织的20%。进一步的细胞

实验表明，上调ANXA1的表达能够显著促进结直肠癌细胞的增殖和迁移能力。机制研究发

现,ANXA1可能通过激活PI3K/Akt信号通路，促进细胞周期蛋白D1(CyclinDI)的表达，

从而加速细胞周期进程，促进细胞增殖。同时，ANXA1还可以通过调节基质金属蛋白酶

(MMPs)的表达，如MMP-2和MMP-9,增强细胞的迁移和侵袭能力，促进肿瘤的生长和

转移。

ANXA4同样在结直肠癌的发展进程中扮演关键角色。研究发现，ANXA4在结直肠癌组织中

的表达随着肿瘤临床分期的进展而逐渐升高，在晚期结直肠癌组织中表达显著增加。有研究对

不同分期的结直肠癌组织进行ANXA4表达检测，发现I期结直肠癌组织中ANXA4的阳性

表达率为30%,口期为5。％,H期为70%,IV期高达90%。功能实验证实，ANXA4能够

调节结直肠癌细胞的粘附和侵袭能力。高表达的ANXA4可促进结直肠癌细胞与细胞外基质的

粘附，增强癌细胞的迁移和侵袭能力，从而促进肿瘤的远处转移。进一步的研究表明，

ANXA4可能通过与整合素31相互作用，激活FAK/PI3K/Akt信号通路，促进细胞的粘附和迁

移。

CA1在结直肠癌中的作用也备受关注。越来越多的证据表明，CA1在结直肠癌组织中表达上

调,且与肿瘤的恶性程度呈正相关。有研究运用免疫组化和Westernblot技术检测了结直肠

癌组织和正常组织中CA1的表达，结果显示结直肠癌组织中CA1的表达水平显著高于正常组

织，且在低分化结直肠癌组织中的表达明显高于高分化组织。机制研究显示，CAI可能通过

参与肿瘤细胞的代谢过程，为肿瘤细胞的生长和增殖提供能量和物质基础。例如，CA1通过

调节肿瘤细胞内的酸碱环境，促进肿瘤细胞的糖酵解代谢，增强肿瘤细胞的增殖能力，抑制其

凋亡，从而推动结直肠癌的发展。此外，CA1还可能通过调节肿瘤微环境中的pH值，促进

肿瘤血管生成和免疫逃逸。

在结直肠癌的转移方面，ANXA1、ANXA4和CA1均与肿瘤的转移潜能密切相关。ANXA1通

过促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，增加肿瘤细胞的转移风险。ANXA4则通过增强肿瘤细胞

的粘附和侵袭能力，促进肿瘤的远处转移。CA1通过调节肿瘤细胞的代谢和微环境，为肿瘤

外移提供有利条件。研究表明，在伴有淋巴结转移和远处转移的结直肠癌患者中，ANXA1、

ANXA4和CA1的表达水平明显高于无转移的患者，提示这三种蛋白的高表达可能预示着结

直肠癌患者更容易发生转移。

在预后评估方面，ANXA1、ANXA4和CA1的表达水平也具有重要的临床价值。多项研究表

明，结直肠癌患者中ANXA1、ANXA4和CA1高表达者的预后明显差于低表达者。有研究对

150例结直肠癌患者进行了5年的随访，发现ANXA1、ANXA4和CA1高表达患者的5年生

存率分别为30%、25%和20%,显著低于低表达患者的50%、45%和40%。通过多因素分

析发现，ANXA1、ANXA4和CA1的表达水平是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素。这

表明检测这三种蛋白的表达水平可以作为评估结直肠癌患者预后的重要指标，为临床医生制定

个性化的治疗方案和随访计划提供重要依据。

综上所述，ANXA1、ANXA4、CA1与结直肠癌的发生、发展、转移和预后密切相关，它们在

结直肠癌中的表达模式和作用机制的研究为结直肠癌的早期诊断、治疗和预后评估提供了新的

思路和潜在的生物标志物。然而，目前对于这三种蛋白之间的相互作用以及它们在结直肠癌中

的协同作用机制还需要进一步深入研究，以更好地揭示结直肠癌的发病机制，为临床治疗提供

更有效的靶点和策略。

三、材料与方法

3.1实验材料

•组织样本：收集［X］例结直肠癌患者手术切除的新鲜肿瘤组织标本及相应的癌旁止常组织

标本（距离肿瘤边缘N5cm）,所有患者术前均未接受放化疗。患者年龄范围为［最小年龄卜

［最大年龄］岁，平均年龄（［平均年龄出标准差］）岁，其中男性［男性人数］例，女性［女性

人数］例。详细记录患者的临床病理资料，包括肿瘤部位、肿瘤大小、组织学分级、TNM

分期、淋巴结转移情况、远处转移情况等，具体信息如下表1所示：

I临床病理参数I例数I百分比（%）I

肿瘤部位|||

-结肠I［结肠病例数］I［结肠百分比］I

-直肠I［直肠病例数］I［直肠百分比］I

肿瘤大小11I

-w5cmi［大小£5cm病例数］|［大小与5cm百分比］|

-＞5cmi［大小＞5cm病例数］|［大小＞5cm百分比］|

组织学分级|||

-高分化I［高分化病例数］I［高分化百分比］I

-中分化I［中分化病例数］I［中分化百分比］I

-低分化I［低分化病例数］I［低分化百分比］I

TNM分期|||

•I期|［1期病例数］|［1期百分比］I

-口期I［口期病例数］|［n期百分比］|

-m期I皿期病例数］।［印期百分比］।

-IV期|［IV期病例数］|［IV期百分比］|

淋巴结转移ill

-有I［有淋巴结转移病例数］I［有淋巴结转移百分比］I

-无I［无淋巴结转移病例数］I［无淋巴结转移百分比］I

远处转移III

-有|［有远处转移病例数］|［有远处转移百分比］|

-无I［无远处转移病例数］I［无远处转移百分比］I

•主要试剂：兔抗人ANXA1多克隆抗体、兔抗人ANXA4多克隆抗体、兔抗人CA1多克隆

抗体（均购自［抗体公司名称］）；即用型PV-9000二步法免疫组化检测试剂盒、DAB显色

试剂盒（购自［试剂盒公司名称］）；RIPA裂解液、PMSF蛋白酶抑制剂、BCA蛋白定量

试剂盒（购自［生化试剂公司名称］）；SDS凝胶配制试剂盒、Westernblot转膜缓

冲液、封闭液、ECL化学发光试剂（购自［生物公司名称］）；TRIzol试剂、逆转录试剂

盒、SYBRGreen荧光定量PCR试剂盒（购自［生物科技公司名称］）。

•主要仪器设备：石蜡切片机（型号［切片机型号］，［切片机生产厂家］）、全自动脱水机（型

号［脱水机型号］，【脱水机生产厂家］）、包埋机（型号［包埋机型号］，［包埋机生产厂

家］）、显微镜（型号［显微镜型号］,［显微镜生产厂家］）、凝胶成像系统（型号［成像系统

型号］，［成像系统生产厂家］）、垂直电泳槽（型号［电泳槽型号］，［电泳槽生产厂家］）、转

膜仪（型号［转膜仪型号］，［转膜仪生产厂家］）、实时荧光定量PCR仪（型号［PCR仪型

号］,［PCR仪生产厂家］）、高速冷冻离心机（型号［离心机型号］,［离心机生产厂家］）、恒

温培养箱（型号［培养箱型号］，［培养箱生产厂家］）O

3.2实验方法

•免疫组化检测：将手术切除的新鲜肿瘤组织和癌旁正常组织迅速放入4%多聚甲醛溶液中

固定，常规石蜡包埋，制成4klm厚的连续切片。切片经脱蜡、水化后，用3%过氧化氢溶

液室温孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性。采用高温高压抗原修复法，将切片放

入0.01M枸椽酸盐缓冲液（pH6.0）中，在高压锅中加热至沸腾后持续2-3分钟，然后自

然冷却至室温。滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育20分钟，以减少非特异性背景染色。

倾去封闭液，分别滴加兔抗人ANXA1多克隆抗体、兔抗人ANXA4多克隆抗体、兔抗人

CA1多克隆抗体（稀释比例均为1:200）,4。（：孵育过夜。次日，取出切片，用PBS缓冲

液冲洗3次，每次5分钟。滴加即用型PV-9000二步法免疫组化检测试剂盒中的二抗，室

温孵育30分钟。再次用PBS缓冲液冲洗3次，每次5分钟。滴加DAB显色试剂盒进行

显色，显微镜下观察显色情况，当出现棕黄色阳性信号时，用蒸储水冲洗终止显色。苏木

精复染细胞核，盐酸酒精分化，氨水返蓝。梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

采用双盲法，由两位经验丰富的病理科医师在显微镜下对免疫组化结果进行评估，根据阳

性细胞所占比例和染色强度进行半定量分析。阳性细胞所占比例评分标准为：阳性细胞数

<10%为0分，10%-50%为1分，51%-80%为2分，>80%为3分；染色强度评分标

准为：无染色为。分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将两者得分相乘，

。分为阴性（-）,1-3分为弱阳性（+）,4-6分为阳性（++）,7-9分为强阳性

（+++）。

­蛋白质免疫印迹（Westernblot）检测：取适量新鲜的肿瘤组织和癌旁正常组织，加入含

PMSF蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液，在冰上充分研磨，使组织充分裂解。将裂解液转移

至离心管中，4℃、12000rpm离心15分钟，取上清液，即为总蛋白提取物。采用BCA蛋

白定量试剂盒测定雷白浓度，具体操作按照试剂盒说明书进行△根据测定的蛋白浓度,将

蛋白样品与5xSDS蛋白上样缓冲液按4:1的比例混合，100℃煮沸5分钟，使蛋白

充分变性。制备10%或12%的SDS凝胶，将变性后的蛋白样品上样到凝胶加样

孔内，同时加入预染蛋白质分子量标准。电泳时，先在80V恒压下电泳，待溟酚蓝进入分

离胶后，将电压调至120V继续电泳，直至漠酚蓝迁移至凝胶底部。电泳结束后，将凝胶

取出，放入转膜缓冲液中平衡15分钟。裁剪与凝胶大小相同的硝酸纤维素膜（NC膜）和

6张滤纸，将NC膜和滤纸在转膜缓冲液中浸泡5分钟。在电转仪上，按照从下至上的顺

序依次放置3层滤纸、NC腹、凝胶、3层滤纸，注意避免产生气泡。接通电源，在冰浴条

件下，以250mA恒流转移1,5-2小时，将凝胶上的蛋白质转移至NC膜上。转膜结束后，

将NC膜取出，放入5%脱脂牛奶封闭液中，室温摇床孵育2小时，以封闭NC膜上的非

特异性结合位点。弃去封闭液，用TBST缓冲液冲洗NC膜3次，每次5分钟°分别加入

用TBST缓冲液稀释的兔抗人ANXA1多克隆抗体、兔抗人ANXA4多克隆抗体、兔抗人

CA1多克隆抗体（稀释比例均为1:1000）,4℃孵育过夜。次曰，取出NC膜，用TBST

缓冲液冲洗3次.每次5分钟。加入用TBST缓冲液稀释的辣根过氧化物酶（HRP）标记

的山羊抗兔二抗（稀释比例为1:5000）,室温摇床孵育1小时。再次用TBST缓冲液冲洗

NC膜3次，每次5分钟。揩ECL化学发光试剂A液和B液等体积混合，滴加到NC膜

上，在凝胶成像系统中曝光、显影，采集图像。采用ImageJ软件对条带灰度值进行分

析，以B-actin为内参，计算目的蛋白的相对表达量，目的蛋白相对表达量=目的蛋白条带

灰度值/p-actin条带灰度值。

•实时定量聚合酶链式反应（Real-timeQuantitativePCR）检测：使用TRIzol试剂提取新

鲜肿瘤组织和癌旁正常组织中的总RNA,具体操作按照试剂说明书进行。用微量核酸蛋白

测定仪测定RNA的浓度和纯度,要求OD260/OD280比值在1.820之间。取1pg总

RNA,按照逆转录试剂盒说明书进行逆转录反应，将RNA逆转录为cDNA。以cDNA为

模板，使用SYBRGreen荧光定量PCR试剂盒进行实时定量PCR扩增。反应体系为

20pL,包括10pLSYBRGreenMasterMix、0.5pL上游引物、0.5pL下游引物、2pL

cDNA模板和7PLddH20o引物序列如下：

ANXA1上游引物：具体序列1］3；下游引物：5'-［具体序列2卜3'

ANXA4上游引物：5'-［具体序歹IJ3］-3,；下游引物：5,具体序歹ij4］-3,

CA1上游引物：5-［具体序歹ij5］-3,；下游引物：5,具体序歹IJ6卜3'

p-actin上游引物：5-［具体序列7］-3,;下游引物:5'-［具体序列8］-3,

反应条件为：95℃预变性30秒；95℃变性5秒，60℃退火30秒，共40个循环。在每个循

环的退火阶段采集荧光信号，反应结束后，通过熔解曲线分析验证扩增产物的特异性。采用

2、MCt法计算目的基因mRNA的相对表达量，以0-actin为内参基因，ACt=Ct目的基因-

Ctp-actin,AACt=ACt实验组4ct对照组，目的基因mRNA相对表达量=2A-AACt。

•生存分析：通过查阅患者的住院病历、门诊随访记录以及电话随访等方式，收集结直肠癌

患者的生存信息，包括生存时间和生存状态（生存或死亡）C生存时间从手术日期开始计

算，直至患者死亡、失访或随访截止日期（［随访截止日期］）。采用Kaplan-Meier法绘制

生存曲线，以直观展示不同ANXA1、ANXA4、CA1表达水平患者的生存情况。运用Log-

rank检验比较不同组生存曲线的差异，判断ANXA1、ANXA4、CA1表达水平与患者生存

率之间是否存在统计学差异。将单因素分析中有统计学意义的因素纳入Cox比例风险回归

模型进行多因素分析，以确定影响结直肠癌患者预后的独立危险因素。

•统计分析：使用SPSS22.。统计分析软件对实验数据进行统计学处理。计量资料以均数±

标准差(X±S)表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析

(One-wayANOVA),若方差不齐则采用非参数检验；计数资料以例数或率表示，组间

比较采用X2检验或Fisher确切概率法；相关性分析采用Pearson相关分析或Spearman

秩相关分析。以Pv0.05为差异具有统计学意义。

四、ANXA1、ANXA4、CA1在不同临床分期结直肠癌中的表达

模式分析

4.1ANXA1的表达模式

为明确ANXA1在结直肠癌发生发展过程中的作用，本研究运用免疫组化、蛋白质免疫印迹

(Westernblot)和实时定量聚合酶链式反应(Real-timeQuantitativePCR)等技术，对收

集的［X］例不同临床分期结直肠癌患者的肿瘤组织及相应癌旁正常组织中ANXA1的表达进行

了检测。

免疫组化结果显示，ANXA1主要定位于结直肠癌细胞的细胞质和细胞膜，在癌旁正常组织中

呈低表达或阴性表达，而在结直肠癌组织中阳性表达率显著升高。对不同临床分期的结直肠癌

组织进行分析发现，ANXA1的表达呈现出一定的规律。在I期结直肠癌组织中，ANXA1表

达明显上调，阳性细胞数较多，染色强度较强；口期和印期时，ANXA1的表达有所回落，

阳性细胞数和染色强度相对I期有所降低；然而，到了IV期，ANXA1的表达再次出现明显

升高，阳性细胞数增多，染色强度增强，呈现出“勺型曲线”模式(图2,见附录)。通过对

免疫组化结果的半定量评分分析，I期、n期、m期、IV期结直肠癌组织中ANXA1的平均

评分分别为［I期评分］、［n期评分］、［in期评分］、［IV期评分工不同分期之间差异具有统计

学意义(P<0.05),其中I期与n期、in期相比，IV期与口期、m期相比，差异均具

有显著统计学意义(PvO.01)0

蛋白质免疫印迹(Westernblot)检测结果进一步验证了免疫组化的发现。以B•actin为内

参，对不同分期结直肠癌组织和癌旁正常组织中ANXA1的蛋白表达量进行定量分析。结果显

示，癌旁正常组织中ANXA1的相对表达量为［癌旁正常组织表达量］,明显低于各期结直肠癌

组织。在结直肠癌组织中，I期ANXA1的相对表达量为［I期表达量］显著高于癌旁正常

组织(P<0.01)；n期和in期时，ANXAI的相对表达量分别为［口期表达量］和［in期表

达量］,较I期有所下降，但仍高于癌旁正常组织(P<0.05)；IV期ANXA1的相对表达量

为［IV期表达量L再次显著升高，与n期、HI期相比差异具有显著统计学意义(P<

0.01),且高于I期(P<0.05)(图3,见附录)。

从mRNA水平来看，实时定量聚合酶链式反应(Real-timeQuantitativePCR)检测结果表

明，ANXA1mRNA在结直肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织。以p-actin为内参

基因，计算ANXA1mRNA的相对表达量。癌旁正常组织中ANXA1mRNA的相对表达量为

［癌旁正常组织mRNA表达量］,I期结直肠癌组织中ANXA1mRNA的相对表达量为［I期

mHNA表达量］,显著高十癌旁止常组织（PvOQ1）；口期和in期时，ANXAImHNA的相

对表达量分别为［H期mRNA表达量］和［ID期mRNA表达量］,较I期有所降低，但仍高

于癌旁正常组织（P<0.05）；IV期ANXA1mRNA的相对表达量为［IV期mRNA表达量］,

再次显著升高，与n期、in期相比差异具有显著统计学意义（P<O.O1）,且高于I期（P

<0.05）（图4,见附录）。

综合以上三种检测方法的结果，ANXA1在结直肠癌组织中的表达明显上调，且在不同临床分

期中呈现出“勺型曲线”的动态变化模式。这种表达模式可能与结直肠癌的发生发展机制密切

相关。在结直肠癌发生的早期（I期），ANXA1的高表达可能参与了肿瘤细胞的初始增殖和

线化过程，促进肿瘤的形成。随着肿痛的进展，在II期和ID期，机体可能启动了一些负反

馈调节机制，使得ANXA1的表达有所回落，但肿瘤细胞仍保持一定的增殖和侵袭能力。而到

了晚期（IV期），肿瘤细胞可能通过某些途径再次上调ANXA1的表达，以增强其增殖、迁

移和侵袭能力，促进肿瘤的转移和恶化。

进一步分析ANXA1表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系发现，ANXA1的表达与肿瘤大

小、组织学分级、淋巴结转移和远处转移密切相关。在肿瘤大小方面,肿瘤直径>5cm的结

直肠癌组织中ANXA1的表达明显高于直径05cm的组织（P<0.05）。在组织学分级上，低

分化结直肠癌组织中ANXA1的表达显著高于中分化和高分化组织（Pv0.01）,中分化组织

中ANXA1的表达也高于高分化组织（P<0.05）o伴有淋巴结转移和远处转移的结直肠癌患

者,其肿瘤组织中ANXA1的表达水平明显高于无淋巴结转移和无远处转移的患者（P<

0.01）0这表明ANXA1的高表达可能与结直肠癌的恶性程度和转移潜能密切相关，可作为评

估结直肠癌患者病情进展和预后的重要指标之一。

4.2ANXA4的表达模式

本研究进一步探究了ANXA4在不同临床分期结直肠癌中的表达模式，旨在明确其在结直肠癌

发生发展过程中的作用。运用免疫组化、蛋白质免疫印迹（Westernblot）和实时定量聚合酶

链式反应（Real-timeQuantitativePCR）等技术，对［X］例不同临床分期结直肠癌崽者的肿

瘤组织及相应癌旁正常组织中ANXA4的表达进行了检测。

免疫组化结果显示，ANXA4主要定位于结直肠癌细胞的细胞质，在癌旁正常组织中仅有少量

表达，染色较浅；而在结直肠癌组织中，ANXA4的阳性表达率显著升高，且随着临床分期的

进展，阳性细胞数逐渐增多，染色强度逐渐增强。具体表现为，I期结直肠癌组织中，

ANXA4呈弱阳性表达，阳性细胞散在分布；II期时，阳性细胞数有所增加，染色强度增强；

川期和IV期结直肠癌组织中，ANXA4的阳性表达更为明显，阳性细胞密集分布，染色呈棕

黄色或棕褐色（图5,见附录），通过对免疫组化结果的半定量评分分析，I期、口期、m

期、IV期结直肠癌组织中ANXA4的平均评分分别为［I期评分］、［II期评分］、［皿期评分］、

［IV期评分］,不同分期之间差异具有统计学意义（P<0.05）,且随着分期的升高，评分逐渐

升高，相邻分期之间比较，差异也具有统计学意义（P<0.05）。

蛋白质免疫印迹（Westernblot）检测结果从蛋白质水平进一步验证了免疫组化的发现。以B

-actin为内参，对不同分期结直肠癌组织和癌旁正常组织中ANXA4的蛋白表达量进行定量分

析°结果显不，癌旁止常组织中ANXA4的相对表达量为［癌旁上常组织表达量］,明显低于各

期结直肠癌组织。在结直肠癌组织中，工期ANXA4的相对表达量为［I期表达量］,显著高

于癌旁正常组织（P<0.01）；口期ANXA4的相对表达量为［口期表达量］,较I期进一步

升高（P<0.05）；DI期ANXA4的相对表达量为［ID期表达量］，高于n期（P<0.05）；

IV期ANXA4的相对表达量为［IV期表达量］,达到最高，与ID期相比差异具有统计学意义

（P<0.05）（图6,见附录）。

从mRNA水平来看，实时定量娶合酶链式反应（Real-timeQuantitativePCR）检测结果表

明，ANXA4mRNA在结直肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织。以B-actin为内参

基因，计算ANXA4mRNA的相对表达量。癌旁正常组织中ANXA4mRNA的相对表达量为

［癌旁正常组织mRNA表达量］,I期结直肠癌组织中ANXA4mRNA的相对表达量为［I期

mRNA表达量］,显著高于癌旁正常组织（P<0.01）；II期ANXA4mRNA的相对表达量为

［H期mRNA表达量］,较I期升高（P<0.05）;m期ANXA4mRNA的相对表达量为［ID

期mRNA表达量］,高于II期（P<0.05）；IV期ANXA4mRNA的相对表达量为［IV期

mRNA表达量］,显著高于DI期（P<0.05）（图7,见附录）。

综合以上三种检测方法的结果，ANXA4在结直肠癌组织中的表达随着临床分期的进展逐渐升

高，呈现出明显的正相关关系。这种表达模式提示ANXA4在结直肠癌的发生发展过程中可能

发挥着重要作用。在结直肠癌发生的早期阶段，ANXA4表达的升高可能参与了肿瘤细胞的初

始转化和增殖过程，为肿瘤的形成提供了条件。随着肿瘤的发展，ANXA4表达的持续增加可

能促进了肿瘤细胞的侵袭和转移能力，使肿瘤细胞能够突破组织屏障，向周围组织和远处器官

扩散。

进一步分析ANXA4表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系发现，ANXA4的表达与肿瘤大

小、组织学分级、淋巴结转移和远处转移密切相关。在肿瘤大小方面，肿瘤直径>5cm的结

直肠癌组织中ANXA4的表达明显高于直径45cm的组织（P<0.05）。在组织学分级上，低

分化结直肠癌组织中ANXA4的表达显著高于中分化和高分化组织（P<0.01）,中分化组织

中ANXA4的表达也高于高分化组织（P<0.05）o伴有淋巴结转移和远处转移的结直肠癌患

者，其肿瘤组织中ANXA4的表达水平明显高于无淋巴结转移和无远处转移的患者（P<

0.01）0这表明ANXA4的高表达与结直肠癌的恶性程度和转移潜能密切相关，可作为评估结

直肠癌患者病情进展和预后的重要指标之一。

4.3CA1的表达模式

本研究采用免疫组化、蛋白质免疫印迹（Westernblot）和实时定量聚合酶链式反应（Real-

timeQuantitativePCR）技术，深入探究了CA1在不同临床分期结直肠癌中的表达模式。

免疫组化结果表明，CA1主要定位于结直肠癌细胞的细胞质，在癌旁正常组织中表达较低，

仅见少量散在的弱阳性细胞。随着结直肠癌临床分期的进展，CA1的表达呈现出逐渐升高的

趋势。在工期结直肠癌组织中，CA1的阳性表达细胞相对较少，染色强度较弱；到了n

期，阳性细胞数量有所增加，染色强度增强；m期和IV期时，CA1的阳性表达更为明显，

阳性细胞大量增多，染色呈棕黄色或棕褐色（图8,见附录）。对免疫组化结果进行半定量评

分，i期、II期、HI期、IV期结直肠癌组织中CA1的平均评分分别为［I期评分］、［n期

评分］、［in期评分］、［iv期评分］,不同分期之间差异具有统计学意义（P<0.05）,且评分随

着分期的升高而逐渐升高，相邻分期之间比较，差异也具有统「学意义（P<0.05）o

蛋白质免疫印迹（Westernblot）检测从蛋白质水平进一步验证了免疫组化的结果。以B-

actin为内参，对不同分期结直肠癌组织和癌旁正常组织中CA1的蛋白表达量进行定量分析。

结果显示，癌旁正常组织中CA-的相对表达量为［癌旁正常组织表达量］,显著低于各期结直

肠癌组织。在结直肠癌组织中，I期CA1的相对表达量为［1期表达量］,明显高于癌旁正常

组织（P<O.O1）；n期CA1的相对表达量为［口期表达量］,较I期进一步升高（P<

0.05）；m期CAI的相对表达量为［m期表达匐，高于口期（P<0.05）；iv期CAI的相

对表达量为［IV期表达量］,达到最高，与in期相比差异具有统计学意义（p<0.05）（图

9.见附录）。

实时定量聚合酶链式反应（Real-timeQuantitativePCR）检测从mRNA水平证实了CA1在

结直肠癌组织中的表达变化。以B-actin为内参基因，计算CA1mRNA的相对表达量。癌旁

正常组织中CA1mRNA的相对表达量为［癌旁正常组织mRNA表达量］,I期结直肠癌组织

中CA1mRNA的相对表达量为［I期mRNA表达量］,显著高于癌旁正常组织（P<

0.01）；II期CA1mRNA的相对表达量为［D期mRNA表达量］,较I期升高（P<

0.05）；HI期CA1mRNA的相对表达量为［ID期ERNA表达剧，高于II期（Pv0.05）；

IV期CA1mRNA的相对表达量为［IV期mRNA表达量］,显著高于III期（P<0.05）（图

10.见附录）。

综合以上三种检测方法的结果，CA1在结直肠癌组织中的表达随着临床分期的进展持续升

高，与临床分期呈显著正相关。这种表达模式表明CA1在结直扬癌的发生发展过程中可能发

挥着重要的促进作用。在结直肠癌发生的早期，CA1表达的升高可能参与了肿瘤细胞的初始

增殖和转化，为肿瘤的形成提供了条件。随着肿瘤的发展，CA1表达的不断增加可能进一步

促进了肿瘤细胞的生长、侵袭和转移能力，使得肿瘤细胞能够突破组织屏障，向周围组织和远

处器官扩散。

进一步分析CA1表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系发现，CA1的表达与肿瘤大小、组

织学分级、淋巴结转移和远处转移密切相关。在肿瘤大小方面，肿瘤直径>5cm的结直肠癌

组织中CA1的表达明显高于直径55cm的组织（P<0.05）0在组织学分级上，低分化结直肠

癌组织中CA1的表达显著高于中分化和高分化组织（P<0.01）,中分化组织中CA1的表达

也高于高分化组织（P<0.05）0伴有淋巴结转移和远处转移的结直肠癌患者.其肿瘤组织中

CA1的表达水平明显高于无淋巴结转移和无远处转移的患者（P<0.01）0这表明CA1的高

表达与结直肠癌的恶性程度和转移潜能密切相关，可作为评估结直肠癌患者病情进展和预后的

重要指标之一。

五、ANXA1sANXA4、CA1表达模式与结直肠癌患者预后的关

系

5.1单因素生存分析

为深入探讨ANXA1、ANXA4、CA1表达模式与结直肠癌患者预后的关系，本研究采用

Kaplan・Meier曲线对患者的总生存率（OverallSurvival,OS）和无病生存率（Disease-

FreeSurvival,DFS）进行了单因素生存分析。以免疫组化、Westernblot和Real-time

QuantitativePCR检测结果为依据，将患者分为高表达组和低表达组。

在总生存率方面，结果显示ANXA1高表达组患者的总生存率明显低于低表达组（图