T SATA 078 2024《血清中26对手性氨基酸的测定 高效液相色谱-串联质谱法》

《血清中26对手性氨基酸的测定高效液相色谱—串联质谱法》团体标准，深圳市分析测试协会（SATA）发布

发布：2024-09-25；实施：2024-10-25

ICS：03.080.99；CCS：X00注意：标准名称是26对手性氨基酸（每对包含L型+D型，合计52个氨基酸单体），常被简称为“26种手性氨基酸”一、标准概述本文件建立柱前衍生+手性高效液相色谱分离+串联质谱（LC-MS/MS）多反应监测MRM方法，用于人血清样本中26对L/D手性氨基酸的同时定性、定量检测，适用于临床检验、代谢组学、生物样本检测实验室。26对手性氨基酸清单丙氨酸（Ala）丝氨酸（Ser）脯氨酸（Pro）缬氨酸（Val）苏氨酸（Thr）半胱氨酸（Cys）亮氨酸（Leu）异亮氨酸（Ile）天冬酰胺（Asn）天冬氨酸（Asp）谷氨酰胺（Gln）谷氨酸（Glu）组氨酸（His）苯丙氨酸（Phe）精氨酸（Arg）色氨酸（Trp）赖氨酸（Lys）鸟氨酸（Orn）瓜氨酸（Cit）羟基脯氨酸（Hyp）α-氨基己二酸（Aad）正缬氨酸（Nva）犬尿氨酸（Kyn）2-氨基丁酸（Abu）甲硫氨酸（Met）酪氨酸（Tyr）二、方法原理血清样本经蛋白沉淀，取上清进行柱前手性衍生；衍生后产物进入手性色谱柱进行液相分离；电喷雾离子源（ESI）电离，串联质谱MRM模式采集特征离子对；采用稳定同位素内标校正，外标/内标法同时定量L型与D型氨基酸对。核心难点：普通液相无法区分L/D手性异构体；该标准依靠手性色谱+衍生实现手性拆分，质谱负责特异性定性，解决血清基质干扰问题。三、主要章节框架范围：适用样本、目标物；不适用范围规范性引用文件：GB/T6682、GB/T27404、WS/T225等实验室质量控制、水纯度、生物样本采集保存规范术语和定义：手性氨基酸、多反应监测MRM、衍生化、定量限、检出限原理试剂与材料：手性氨基酸标准品、同位素内标、衍生试剂、溶剂（甲醇、乙腈、水、缓冲盐）仪器设备：高效液相色谱-串联质谱仪（ESI源）、手性色谱柱、离心机、氮吹仪、移液器等样本采集、保存与前处理血清采集：静脉采血，分离血清；储存条件：短期4℃，长期-80℃，避免反复冻融；前处理流程：蛋白沉淀→离心取上清→柱前衍生。分析步骤标准工作溶液配制；内标添加；衍生反应；液相色谱参考条件（手性柱、流动相、梯度洗脱、流速、柱温）；质谱参考条件（ESI离子源、MRM离子对、碰撞能量等，附录提供全部26对氨基酸离子对参数）结果计算：内标法计算血清中各L/D氨基酸浓度方法学性能指标：线性范围、检出限LOD、定量限LOQ、精密度（批内/批间）、准确度、基质效应、稳定性质量控制：空白样本、低/中/高浓度质控样、平行样、内标响应监控试验报告附录：目标物MRM离子对、保留时间参考表（标准核心附表）四、关键技术要点柱前衍生：是实现手性拆分的关键步骤，衍生试剂与氨基酸氨基反应，在手性固定相上实现L/D异构体分离；同位素内标：校正前处理损失、基质效应、进样波动；MRM模式：高特异性，大幅降低血清内源性基质干扰，适合复杂生物基质；样本稳定性：血清反复冻融会造成D/L氨基酸比例变化，样本管理是质控重点。五、应用场景临床代谢病筛查（D-氨基酸代谢紊乱、肾病、神经代谢疾病）代谢组学研究、生物标志物探索第三方医学检验实验室手