2026中级卫生职称-主管技师-病理学技术(中级)代码：380历年参考题库含答案详解

2026中级卫生职称-主管技师-病理学技术(中级)［代码：380］历年参考题库含答案详解一、选择题从给出的选项中选择正确答案（共100题）1、在石蜡切片制作过程中，脱水步骤使用的试剂通常是？A.二甲苯B.乙醇C.甲醛D.石蜡2、HE染色中，使细胞核呈现蓝色的染料是？A.伊红B.苏木精C.甘油D.酒精3、冰冻切片时，切片机温度一般控制在？A.-5℃左右B.-15～-20℃C.-30℃以下D.0℃以上4、免疫组织化学染色中，一抗与抗原结合的原理是？A.电荷作用B.氢键作用C.特异性识别D.范德华力5、组织固定液的常用浓度为福尔马林是？A.10%B.20%C.40%D.50%6、TUNEL法主要用于检测细胞内的哪种变化？A.蛋白质表达B.DNA断裂C.脂质沉积D.糖原含量7、石蜡切片厚度一般要求为？A.0.5～1μmB.2～4μmC.5～10μmD.15～20μm8、病理标本取材前需填写的表格不包括？A.申请单核对B.患者信息登记C.染色方法选择D.取材记录9、细胞学检查中最常用的染色方法是？A.HE染色B.Papanicolaou染色C.瑞氏染色D.银染色10、免疫荧光染色中直接法的特点是？A.灵敏度高B.只需一步反应C.需要多种抗体D.背景较深11、石蜡切片脱蜡前需用什么溶剂？A.无水乙醇B.二甲苯C.甲醇D.丙酮12、液基细胞学制样的主要优势是？A.染色更快B.细胞分布均匀C.操作更简单D.成本更低13、特殊染色显示胶原纤维常用？A.普鲁士蓝B.刚果红C.Masson三色D.PAS14、冰冻切片中判断组织是否充分冷冻的方法是？A.观察颜色B.听切割声音C.手触检查D.看切屑形状15、HE染色中分化步骤使用？A.盐酸乙醇B.甲醛C.蒸馏水D.甲醇16、蜡块制作的温度一般为？A.30～35℃B.45～50℃C.60～65℃D.80～85℃17、病理切片封片常用的封片剂是？A.甘油B.中性树胶C.水D.酒精18、病理报告发出前的核对内容包括？A.患者姓名和病理号B.染色方法C.设备型号D.试剂批号19、石蜡切片中出现褶皱的主要原因是？A.切片太薄B.展片温度过低C.切片刀有缺口D.组织固定过度20、组织脱水时间过长会导致？A.组织变软B.组织变脆C.染色加深D.切片易断21、病理组织标本采集后，最适宜的固定时间一般为A.5-10分钟B.6-24小时C.24-48小时D.48-72小时22、福尔马林固定液中有效成分的浓度为A.1%-2%B.4%-10%C.10%-15%D.20%-30%23、石蜡切片过程中，脱蜡至水环节使用的试剂顺序为A.二甲苯→酒精→水B.水→酒精→二甲苯C.酒精→二甲苯→水D.二甲苯→水→酒精24、HE染色中，苏木精染色的主要作用是A.染细胞质为红色B.染细胞核为蓝色C.染胶原纤维为黄色D.染红细胞为橙色25、冰冻切片时，最常用的冷冻剂是A.液氮B.固态二氧化碳C.异戊烷D.石蜡油26、特殊染色PAS反应主要用于显示A.脂肪B.黏多糖和糖原C.铁盐D.钙盐27、免疫组化技术中，ABC法的全称为A.亲和素-生物素-过氧化物酶复合法B.抗碱抗体-生物素-酶法C.生物素-链霉亲和素-酶法D.酶标抗体-生物素法28、病理切片的最佳厚度一般为A.1-2μmB.3-5μmC.6-8μmD.10-15μm29、Masson三色染色中，胶原纤维呈现的颜色为A.红色B.蓝色或绿色C.黄色D.黑色30、组织脱水过程中，梯度酒精的最高浓度为A.90%B.95%C.100%D.105%31、石蜡切片出现裂纹的主要原因不包括A.组织脱水过度B.切片刀不锋利C.切片厚度太薄D.烤片温度过高32、病理标本送检时，固定液与标本体积的比例至少应为A.2:1B.5:1C.10:1D.20:133、银染法主要用于显示A.淀粉样物质B.网状纤维C.弹性纤维D.肌肉纤维34、电镜观察时，最常用的固定液是A.10%福尔马林B.2%-4%戊二醛C.丙酮D.乙醇35、石蜡切片脱蜡不彻底的常见原因是A.二甲苯使用过久B.切片过厚C.染色时间过长D.封片剂过多36、免疫组化技术中，抗原修复的主要目的是A.增加组织厚度B.暴露被掩蔽的抗原决定簇C.增强染色背景D.缩短染色时间37、病理切片中出现气泡的原因是A.封片剂未除尽B.二甲苯残留C.水化不充分D.染色过深38、特殊染色中，普鲁士蓝反应用于检测A.钙盐B.铁盐C.胆色素D.脂质39、病理实验室的甲醛固定液应调节pH至A.5.0-5.5B.6.0-6.5C.7.0-7.4D.8.0-8.540、HE染色后，切片褪色的主要原因是A.脱水不彻底B.分化时间过长C.封片不严D.固定不充分41、石蜡切片制作过程中，组织固定的主要目的是什么？A.使组织变硬便于切割B.防止组织自溶和腐败C.增加组织透明度D.提高染色效果42、HE染色中，苏木精染色的原理是什么？A.碱性染料与酸性物质结合B.酸性染料与碱性物质结合C.氧化还原反应D.络合反应43、冰冻切片的保存温度通常为多少度？A.-20℃B.-30℃C.-40℃D.-80℃44、Masson三色染色中，胶原纤维显示的颜色是？A.红色B.蓝色或绿色C.黄色D.黑色45、脱钙处理最常用的试剂是？A.稀硝酸或盐酸B.乙醇C.甲醛D.二甲苯46、免疫组化技术中，DAPI染色的作用是？A.标记蛋白质B.标记脂质C.标记细胞核DNAD.标记RNA47、石蜡切片机切片出现褶皱的原因不包括？A.切片刀钝B.组织过硬C.切片速度过快D.切片机温度过低48、PAS染色主要用于检测组织中的哪种成分？A.蛋白质B.脂肪C.糖原和多糖D.核酸49、电镜制样中，锇酸固定的主要作用是？A.增强电子散射B.去除水分C.透明组织D.包埋支撑50、病理标本采集后，常规固定时间至少应为多少小时？A.2小时B.6小时C.12小时D.24小时51、特殊染色中，普鲁士蓝反应主要用于检测哪种物质？A.胆红素B.含铁血黄素C.钙盐D.脂肪52、冰冻切片制作中，常用的冷冻介质是？A.福尔马林B.液氮C.OCT化合物D.石蜡53、分子病理学检测中，FISH技术的中文全称是？A.荧光原位杂交B.聚合酶链式反应C.杂交捕获法D.微阵列分析54、蜡块储存的最佳温度范围是？A.4℃B.18-25℃C.30-37℃D.50-60℃55、苏木精-伊红染色中，伊红Y的pH值通常调整到？A.pH2.0-2.5B.pH4.5-5.0C.pH6.5-7.0D.pH8.0-8.556、组织脱水时使用梯度酒精的目的不包括？A.逐步置换组织中的水分B.防止组织过度收缩C.增加组织硬度D.为透明做准备57、TUNEL法检测细胞凋亡的原理是什么？A.检测DNA断裂末端的羟基B.检测caspase活性C.检测细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻D.检测线粒体膜电位58、组织染色中出现气泡的主要原因是？A.染色时间过长B.染液中有杂质或气泡未排除C.分化过度D.脱水不彻底59、石蜡切片脱蜡时，常用的透明剂是？A.乙醇B.二甲苯C.丙酮D.甲醇60、HE染色后切片封固常用的介质是？A.甘油B.树胶C.水D.酒精61、组织固定过程中，固定液的作用是A.增强细胞着色能力B.防止细胞自溶和腐败C.提高组织硬度便于切片D.使蛋白质变性凝固E.改善组织透明度62、石蜡切片中常用的包埋剂是A.明胶B.石蜡C.琼脂糖D.火棉胶E.碳蜡63、HE染色中苏木精染色的主要对象是A.细胞质B.细胞核C.红细胞D.胶原纤维E.肌纤维64、冰冻切片常用的冷冻剂是A.乙醇B.氯丁烷C.甲醛D.二甲苯E.甲醇65、石蜡切片脱蜡应选用A.无水乙醇B.二甲苯C.蒸馏水D.甲醇E.丙酮66、组织脱水过程中，脱水最彻底但对人体有害的试剂是A.乙醇B.异丙醇C.丙酮D.苯E.正丁醇67、免疫组化染色中常用的抗原修复方法是A.高温高压修复B.低温浸泡修复C.室温干燥修复D.冷冻研磨修复E.化学渗透修复68、PAS染色主要用于显示A.脂质B.糖原和黏液物质C.核酸D.铁盐E.钙盐69、Masson三色染色中胶原纤维呈A.红色B.蓝色或绿色C.黄色D.黑色E.紫色70、组织切片机切片出现皱褶的最可能原因是A.切片刀过钝B.切片厚度太大C.组织脱水过度D.切片时温度过低E.蜡块未冷却71、冰冻切片中常用的冷冻保护剂是A.甘油B.二甲苯C.乙醇D.甲醛E.丙酮72、自动组织脱水机的工作原理是A.利用压力差自动更换试剂B.利用重力自动滴落试剂C.利用真空吸附试剂D.利用离心力甩干试剂E.利用温度差蒸发试剂73、石蜡切片染色前脱蜡不彻底的常见表现是A.染色过深B.切片脱落C.染色淡或花片D.组织收缩明显E.切片太厚74、苏木精染色后分化用的试剂是A.盐酸酒精B.碳酸锂C.伊红D.二甲苯E.乙醇75、切片出现虫咬样缺损的可能原因是A.组织内有寄生虫卵B.切片刀有缺口C.蜡块温度不当D.切片太薄E.固定不充分76、细胞内糖原PAS染色阳性时，经淀粉酶预处理后A.仍为阳性B.转为阴性C.变为蓝色D.变为绿色E.变为红色77、组织frozensection制备中，冷冻速度过快会导致A.组织收缩B.冰晶artifact增大C.细胞结构破坏D.组织硬化E.染色不良78、免疫组化染色中内源性过氧化物酶的阻断剂是A.甲醇加过氧化氢B.柠檬酸钠C.牛血清白蛋白D.PBS缓冲液E.乙醇79、组织固定时间过长可能导致A.组织变软B.染色增强C.组织变脆、染色困难D.细胞核清晰E.细胞质着色鲜艳80、蜡片漂浮水温一般控制在A.30-35℃B.40-45℃C.50-55℃D.60-65℃E.70-75℃81、石蜡切片制作过程中，组织固定最常用的固定液是A.95%乙醇B.4%多聚甲醛C.10%中性缓冲福尔马林D.丙酮E.甲醇82、HE染色中，使细胞核染成蓝紫色的染料是A.伊红B.苏木精C.甲基绿D.甲苯胺蓝E.番红83、免疫组织化学技术中，ABC法的全称是A.亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法B.抗生物素-生物素-细胞色素氧化酶法C.亲和素-生物素-细胞色素C法D.抗原-生物素-过氧化物酶法E.亲和素-抗体-过氧化物酶法84、冰冻切片中最常用的冷冻剂是A.液氮B.干冰C.正丁烷D.石蜡油E.聚乙烯乙二醇85、TUNEL法用于检测A.DNA损伤B.RNA表达C.蛋白质定位D.脂类分布E.糖原含量86、病理切片脱蜡时最常用的试剂是A.乙醇B.二甲苯C.甲醇D.丙酮E.氯仿87、以下哪种染色用于显示胶原纤维A.PAS染色B.Masson染色C.银染法D.台盼蓝染色E.刚果红染色88、流式细胞术在病理学中最主要的应用是A.组织形态观察B.细胞表面标志分析C.电镜观察D.培养细胞传代E.组织固定89、冰冻切片制作过程中，组织切片的适宜温度范围是A.-5℃至0℃B.-10℃至-20℃C.-25℃至-30℃D.-35℃至-40℃E.-45℃至-50℃90、以下哪种固定液适用于电镜标本制备A.10%中性缓冲福尔马林B.4%戊二醛C.95%乙醇D.丙酮E.甲醇91、原位杂交技术主要用于检测A.蛋白质表达B.DNA或RNA序列C.脂类成分D.糖类物质E.离子分布92、以下哪种方法可用于判断组织切片中的淀粉样物质A.HE染色B.刚果红染色C.PAS染色D.银染法E.普鲁士蓝染色93、石蜡包埋时最常用的包埋介质是A.琼脂B.石蜡C.明胶D.树胶E.甘油明胶94、免疫细胞化学技术中，直接法与间接法的主要区别是A.抗原固定方式不同B.一抗种类不同C.标记物是否通过第二抗体传递D.切片厚度不同E.染色时间不同95、以下哪种染色可用于显示神经纤维A.HE染色B.银染法C.Masson染色D.PAS染色E.刚果红染色96、石蜡切片制作过程中，透明阶段的目的是A.固定组织B.置换脱水剂并使石蜡渗入C.染色D.包埋E.切片97、以下哪种技术可用于检测染色体数目异常A.普通光镜观察B.核型分析C.免疫组化D.PAS染色E.电镜观察98、以下哪种固定液含有铬盐成分A.福尔马林B.Bouin液C.Zenker液D.乙醇E.丙酮99、病理切片的染色pH值影响的主要因素是A.切片厚度B.染料的离子性质C.室温高低D.光照强度E.切片存放时间100、以下哪种技术可用于蛋白质的定性定量分析A.HE染色B.WesternblotC.PAS染色D.银染法E.刚果红染色

参考答案及解析1.【参考答案】B【解析】脱水是石蜡切片制作的重要环节，使用梯度乙醇逐步去除组织中的水分。常用浓度依次为70%、80%、95%、100%乙醇，最后用纯乙醇确保组织彻底脱水，便于后续透明和浸蜡。2.【参考答案】B【解析】苏木精是一种碱性染料，可使细胞核内的染色质及RNA等酸性物质染成蓝色。伊红为酸性染料，染细胞质和胶原纤维呈粉红色。HE染色是病理学最常用的染色方法。3.【参考答案】B【解析】冰冻切片需要在低温条件下快速冷冻组织，一般切片机温度控制在-15至-20℃。温度过低会导致组织变脆易碎裂，温度过高则切片困难且组织变形明显。4.【参考答案】C【解析】一抗与抗原的结合基于高度特异性的抗原-抗体反应，依赖于抗体识别抗原表位的能力。这种特异性结合是免疫组化染色的基础，确保目标蛋白被准确定位和检测。5.【参考答案】A【解析】福尔马林是含有37%～40%甲醛的水溶液，临床常用的固定液为10%福尔马林（即1份福尔马林加9份水稀释），可充分发挥固定作用，避免过度硬化组织。6.【参考答案】B【解析】TUNEL法通过检测DNA片段化进行细胞凋亡检测，该方法利用末端脱氧核苷酸转移酶在DNA断裂处标记荧光素，是形态学鉴定细胞凋亡的经典方法之一。7.【参考答案】B【解析】常规石蜡切片厚度一般为2至4微米，过厚细胞层次多影响观察，过薄则细胞结构不完整。不同组织可根据需要适当调整，如骨髓涂片较薄而肿瘤组织可适当加厚。8.【参考答案】C【解析】取材前需核对申请单、登记患者信息及记录取材内容。染色方法选择是在切片制作阶段由技术人员根据诊断需要确定，不属于取材前必须填写的内容。9.【参考答案】B【解析】Papanicolaou染色是细胞学检查的标准染色方法，可同时显示细胞核和细胞质的细节，对鳞状上皮细胞和腺上皮细胞的判断具有独特优势，广泛应用于宫颈刮片等检查。10.【参考答案】B【解析】直接法是将荧光素标记的特异性抗体直接与抗原结合，只需一步孵育即可完成染色，操作简便快速。缺点是敏感性较低，每个待测标本都需要制备相应的荧光抗体。11.【参考答案】B【解析】石蜡切片染色前需经二甲苯脱蜡，二甲苯能有效溶解石蜡，使组织恢复亲水性以便后续水化和染色。一般需更换2至3次二甲苯以确保完全脱蜡。12.【参考答案】B【解析】液基细胞学技术通过清洗去除血液黏液等杂质，细胞在载玻片上分布均匀，背景清晰，显著提高病变细胞的检出率，并可保留标本用于后续分子检测。13.【参考答案】C【解析】Masson三色染色可将胶原纤维染成蓝色或绿色，肌纤维和胞质染成红色，常用于鉴别纤维化与肌纤维增生，在肾脏、肝脏及心血管疾病的病理诊断中应用广泛。14.【参考答案】D【解析】充分冷冻的组织切片切屑呈卷曲状且边缘光滑完整。若组织未冻透，切屑会碎散或变形，且可能出现冰晶artifact。经验丰富的技术员可根据切屑形态及时调整冷冻状态。15.【参考答案】A【解析】分化使用1%盐酸乙醇，目的是洗去过量结合的苏木精染料，使细胞核着色清晰。分化不足会导致胞质着色过深，分化过度则核染色变淡甚至脱色，需严格控制时间。16.【参考答案】C【解析】石蜡熔点通常在56至60℃，蜡块制作温度控制在60至65℃，既可保证石蜡充分熔化包裹组织，又不会因温度过高损伤组织抗原性。温度过低则石蜡流动性差易产生气泡。17.【参考答案】B【解析】中性树胶折射率接近玻璃，透明性好且不易老化变黄，是病理切片封片的常用介质。封片时需注意排除气泡，盖玻片应平稳放下以确保切片长期保存。18.【参考答案】A【解析】报告发出前必须核对患者姓名、年龄、标本类型及病理号，确保报告与标本一致。这是防止医疗差错的关键环节，需双人核对或采用条码扫描系统进行双重验证。19.【参考答案】B【解析】展片时水温过低会导致石蜡收缩不一致而产生褶皱，理想水温为40至45℃。此外切片过厚、刀片不锋利或水中杂质过多也可能导致褶皱，需综合调整各个环节。20.【参考答案】B【解析】过度脱水会使组织变硬变脆，切片时容易产生碎裂和刀痕。脱水时间应组织大小和种类而定，一般小块组织在95%乙醇中约1至2小时，在100%乙醇中约30分钟即可。21.【参考答案】B【解析】组织固定是病理制片的关键步骤，6-24小时可充分固定细胞成分，防止自溶和腐败。固定过短导致组织软化，过长会引起抗原遮蔽，影响后续染色效果。22.【参考答案】B【解析】10%中性缓冲福尔马林是最常用的固定液，有效成分甲醛浓度约4%-10%。该浓度既能良好固定组织，又不会造成过度硬化，适用于大多数常规病理检查。23.【参考答案】A【解析】石蜡切片脱蜡需先用二甲苯溶解石蜡，再用梯度酒精还原至水相，最后进行染色。顺序不可颠倒，否则会导致切片脱蜡不彻底或水化不完全。24.【参考答案】B【解析】苏木精为碱性染料，可与细胞核内的酸性物质（如DNA）结合呈蓝紫色。伊红为酸性染料，染细胞质和胶原纤维呈红色，两者配合形成典型HE染色效果。25.【参考答案】C【解析】异戊烷因其导热性能好且低温适中，是冰冻切片最常用的冷冻介质。液氮温度过低易致组织脆裂，固态二氧化碳操作不便，石蜡油冷冻速度较慢。26.【参考答案】B【解析】过碘酸雪夫（PAS）染色利用高碘酸氧化多糖中的乙二醇基，生成醛基后与雪夫试剂反应呈紫红色，主要用于显示糖原、黏多糖、基底膜等结构。27.【参考答案】A【解析】ABC法利用亲和素与生物素的高亲和力结合特性，形成复合物放大信号。该方法敏感性高，是常用的免疫组化增强方法之一，但存在内源性生物素干扰问题。28.【参考答案】B【解析】石蜡切片常规厚度为3-5μm，此厚度既保证组织结构清晰可见，又便于光线穿透进行显微镜观察。过厚影响透光性，过薄则易破碎且结构不完整。29.【参考答案】B【解析】Masson三色染色可使胶原纤维呈蓝色或绿色，肌纤维和细胞质呈红色，核呈黑色。该染色常用于区分胶原纤维与肌纤维，在纤维化病变诊断中具有重要价值。30.【参考答案】C【解析】组织脱水采用梯度酒精，从低浓度逐步升至100%无水酒精。100%酒精用于彻底脱水，为后续透明和浸蜡做准备。酒精浓度过高会使组织变脆，过低则脱水不完全。31.【参考答案】C【解析】切片裂纹多因脱水过度、蜡温过高、刀片钝或切片过薄所致。正常厚度切片不易出现裂纹，但过薄时机械强度降低确实可能产生裂隙，故此项相对不属于主要原因。32.【参考答案】C【解析】固定液与组织体积比应至少为10:1，以确保固定液能充分渗透组织。比例过低会导致中心组织固定不良，影响切片质量和诊断准确性。33.【参考答案】B【解析】银染法利用银离子与蛋白质结合后还原为金属银显色的原理，主要用于显示网状纤维，呈黑色。该方法灵敏度高，广泛应用于肝脏纤维化和肿瘤浸润的诊断。34.【参考答案】B【解析】电镜标本需用2%-4%戊二醛固定，它能更好地保存超微结构。福尔马林固定效果较差，有机溶剂如丙酮和乙醇会破坏膜结构，不适用于电镜观察。35.【参考答案】A【解析】二甲苯反复使用后石蜡溶解度下降，导致脱蜡不彻底。表现为切片出现白色云雾状沉淀，影响染色效果和观察。应定期更换新鲜二甲苯。36.【参考答案】B【解析】固定过程可能导致抗原表位被遮蔽，抗原修复通过加热或酶消化恢复抗原活性。常用的修复方法包括热诱导epitope修复和蛋白水解酶修复。37.【参考答案】C【解析】切片脱蜡后水化不充分会残留有机溶剂，封片时产生气泡。正确操作应确保切片从高档酒精逐步过渡到清水，完全水化后再染色。38.【参考答案】B【解析】普鲁士蓝反应用于检测组织中的三价铁离子，反应生成蓝色沉淀。主要用于诊断含铁血黄素沉积症、血色病等铁代谢异常疾病。39.【参考答案】C【解析】中性缓冲福尔马林pH应调至7.0-7.4，以维持组织最佳固定效果。酸性福尔马林会产生Formolprecipitate，影响染色质量。缓冲液可稳定pH值。40.【参考答案】C【解析】切片褪色多因封片不严密导致染料挥发或氧化。此外，分化时间过长也会使颜色变浅。正确的封片技术和控制分化时间可减少褪色现象。41.【参考答案】B【解析】组织固定的主要目的是迅速使细胞内的酶失活，防止组织自溶和腐败，同时保持细胞成分的原有位置，使组织硬化便于切割。固定液能迅速渗透组织，固定细胞结构，防止细胞变形和收缩，是病理技术中最重要的步骤之一。常用的固定液包括10%中性甲醛溶液、Bouin液、Carnoy液等。42.【参考答案】A【解析】苏木精为碱性染料，主要与细胞核内的酸性物质（如DNA、RNA等核酸）结合，使细胞核呈蓝色。苏木精本身无着色能力，需经氧化成为苏木红后才能与组织结合，这一过程称为成熟。分化液用于去除多余染料，反蓝使蓝色稳定，这一步骤对获得清晰核染色至关重要。43.【参考答案】D【解析】冰冻切片在手术中用于快速诊断，一般将组织块保存在-80℃超低温冰箱中。冰冻切片制作速度快，仅需15-20分钟即可完成，但其形态学质量不如石蜡切片。冰冻切片常用于术中冰冻病理诊断、免疫组化以及某些特殊染色的初筛。需要注意的是，冰冻切片可能出现冰晶artifact，影响诊断判断。44.【参考答案】B【解析】Masson三色染色是一种常用的结缔组织染色法。在该染色中，胶原纤维呈蓝色或绿色，肌纤维、胞质呈红色，细胞核呈黑色或深褐色。不同版本的Masson染色配方略有差异，有的使用丽春红-酸性品红作为对比染液，有的使用苯胺蓝或亮绿。该染色广泛应用于肝脏纤维化、心肌纤维化等病变的研究和诊断。45.【参考答案】A【解析】对于骨骼、钙化组织等硬组织，需要进行脱钙处理才能进行切片。常用的脱钙液包括稀硝酸、盐酸、甲酸等酸性溶液，以及EDTA（乙二胺四乙酸）等螯合剂。硝酸脱钙速度快但对抗原保存不利；EDTA脱钙速度慢但能较好地保存组织结构和抗原性。脱钙程度的判断可通过骨组织探针检查或X线检测。46.【参考答案】C【解析】DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）是一种能与DNA小沟结合的荧光染料，主要标记细胞核，在紫外光激发下发出蓝色荧光。DAPI穿透细胞膜的能力强，可用于固定细胞和活细胞的核染色。在免疫荧光染色中，DAPI常作为核counterstain，帮助定位细胞并确认染色特异性。其染色强度与DNA含量成正比，可用于分析细胞周期。47.【参考答案】D【解析】石蜡切片出现褶皱的常见原因包括：切片刀不锋利导致切割不完整、组织过硬或脱水过度、切片速度过快、蜡块表面不平整等。切片机温度过低一般不会导致褶皱，反而温度过高可能导致切片熔化粘连。解决褶皱的方法包括更换锋利刀片、适当降低石蜡熔点、减慢切片速度、改进包埋技术。48.【参考答案】C【解析】PAS（PeriodicAcid-Schiff）染色用于检测组织中的糖原、黏多糖、糖蛋白等含有多羟基的物质。高碘酸氧化邻二醇基团生成醛基，醛基与Schiff试剂的无色品红结合形成紫红色复合物。PAS染色对肾小球基底膜、糖原储存病、真菌检测等有重要价值。淀粉酶消化后PAS阳性消失，可鉴别糖原与其他PAS阳性物质。49.【参考答案】A【解析】锇酸（四氧化锇）是电镜常用的固定剂，主要作用是与组织中的不饱和脂肪酸结合，形成电子致密的复合物，从而增强电子散射，提高细胞膜的对比度。锇酸还具有脂溶剂的作用，能固定脂质成分。锇酸固定后组织呈黑色，这是电镜制样中不可缺少的步骤。锇酸也有一定的脱水作用，但主要目的是固定和增强电子密度。50.【参考答案】D【解析】病理标本采集后应尽快放入固定液中，常规固定时间至少24小时，以确保固定液充分渗透到组织深部。固定时间不足会导致组织中心固定不良，影响切片质量和染色效果。但固定时间也不宜过长，否则会导致组织变脆、抗原表位遮蔽，影响免疫组化等后续检测。对于较大的标本，可适当延长固定时间。51.【参考答案】B【解析】普鲁士蓝反应（Perls反应）是检测三价铁离子的经典方法，主要用于显示含铁血黄素和钙盐。铁离子与亚铁氰化钾反应生成蓝色的普鲁士蓝沉淀。该染色在肺含铁血黄素沉着症、肝血色素沉着症等疾病的诊断中有重要价值。假阴性可能因样本干燥时间过长导致铁被氧化而丢失。52.【参考答案】C【解析】OCT（OptimalCuttingTemperature）化合物是一种水溶性冷冻介质，在冰冻切片制作中广泛使用。它具有适当的硬度和熔点，能在低温下支持组织切片而不产生冰晶artifact。OCT化合物具有良好的透明度，便于定位切取的组织区域。使用时应将组织浸入或涂抹OCT后迅速冷冻，通常采用异戊烷干冰冷却或低温金属台。53.【参考答案】A【解析】FISH（FluorescenceInSituHybridization）即荧光原位杂交技术，是利用荧光标记的DNA探针与靶序列杂交，在显微镜下检测染色体或基因水平异常的技术。FISH可用于检测基因扩增、缺失、易位等异常，在肿瘤分子分型和预后判断中有重要应用。与PCR相比，FISH的优势在于能定位到具体的染色体区域，保留组织形态学信息。54.【参考答案】B【解析】石蜡蜡块应在室温下储存，最佳温度为18-25℃，相对湿度保持在40-60%。温度过高会导致蜡块软化变形，温度过低则蜡块变脆易碎。蜡块应平放存放，避免重压。长期保存时蜡块标签需用防水、防溶剂的材料书写，以防止信息模糊。蜡块一般可保存数十年，但定期复查环境条件很重要。55.【参考答案】B【解析】伊红染色液的pH值对染色效果影响很大，通常调整至pH4.5-5.0。在此pH条件下，伊红带负电荷，与带正电荷的碱性蛋白（胞质、红细胞、胶原纤维等）结合呈现红色。pH过高会导致伊红着色过深，背景不清；pH过低则着色不足，组织对比差。常用的调节剂为冰醋酸，也可用磷酸缓冲液。56.【参考答案】C【解析】组织脱水是石蜡切片制作的重要环节，通过梯度酒精（如70%、80%、95%、100%）逐步置换组织中的水分，避免组织剧烈收缩变形。脱水完成后需用透明剂（如二甲苯）置换酒精，因为石蜡不溶于酒精而溶于二甲苯，这一步骤为石蜡浸透创造条件。脱水过程不应追求增加组织硬度，组织硬度主要通过固定实现。57.【参考答案】A【解析】TUNEL（TerminaldeoxynucleotidyltransferasedUTPNickEndLabeling）法是通过检测DNA断裂末端的羟基来识别凋亡细胞的方法。末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）能将荧光素或生物素标记的dUTP加到DNA断裂的3'-OH末端，从而实现凋亡细胞的检测。该方法是检测细胞凋亡的经典方法之一，与PI染色联合可区分凋亡细胞和坏死细胞。58.【参考答案】B【解析】染色过程中出现气泡的主要原因包括染液过滤不彻底含有杂质、染色缸中有气泡未排除、盖玻片放置不当等。气泡会阻碍染液与组织接触，形成染色空白区，影响观察。预防措施包括：染液使用前充分过滤、染色容器预先润湿、缓慢放置盖玻片排除气泡、染色后充分漂洗。发现问题应及时重新染色。59.【参考答案】B【解析】石蜡切片在染色前需要脱蜡，将石蜡溶解去除。常用的脱蜡透明剂是二甲苯，因为它既能溶解石蜡又能与水混溶，便于后续的水化步骤。脱蜡过程通常经过2-3次二甲苯浸泡，每次5-10分钟。二甲苯毒性较大，应在通风橱中操作。替代二甲苯的透明剂包括柠檬烯、松油醇等，毒性较低但效果略差。60.【参考答案】B【解析】HE染色后的切片需要用封固剂封固，常用的封固介质是加拿大树胶（Canadabalsam）或合成树脂封固剂。封固的目的是保护切片免受灰尘、湿气侵袭，保持染色长久鲜艳。树胶的折射率（约1.52）与玻璃相近，可使切片观察清晰。封固时需注意避免产生气泡，加盖玻片后轻压排出多余封固剂。61.【参考答案】B【解析】固定液的主要作用是迅速杀死细胞，阻止细胞自溶和细菌腐败，保持细胞的形态结构，使其接近生活状态。虽然固定液也能使蛋白质变性凝固，但这只是其作用机制之一，不是主要目的。增强着色能力和改善透明度是后续处理的目标。62.【参考答案】B【解析】石蜡是组织病理学中最常用的包埋剂，具有熔点适中、切片性能好、操作简便等优点。石蜡包埋后组织硬度适中，适合制作薄切片。明胶主要用于冰冻切片，琼脂糖多用于特殊组织，火棉胶用于软组织，碳蜡适用于大体标本包埋。63.【参考答案】B【解析】苏木精是一种碱性染料，主要与酸性的核蛋白结合，使细胞核呈蓝色。细胞质、胶原纤维等酸性成分较少，着色较浅。伊红是酸性染料，主要染细胞质和红细胞呈粉红色。HE染色是病理学最基础的染色方法，其中苏木精染细胞核是基本原理。64.【参考答案】B【解析】氯丁烷是最常用的冰冻切片冷冻剂，冷冻速度快且安全。乙醇和甲醇是脱水剂而非冷冻剂。甲醛是固定液。二甲苯是透明剂。冰冻切片要求快速冷冻，氯丁烷沸点低、蒸发吸热快，能在短时间内使组织冻结，适用于术中快速病理诊断。65.【参考答案】B【解析】石蜡不溶于水而溶于有机溶剂，二甲苯是最常用的脱蜡剂，能有效溶解石蜡且不损害组织。脱水过程使用乙醇梯度系列，从低浓度到高浓度逐渐置换组织中的水分。复水过程则相反，从高浓度乙醇逐渐过渡到水，最后进行染色。蒸馏水用于冲洗和配制染液。66.【参考答案】D【解析】苯脱水效果最好，组织收缩小，切片质量好，但由于苯有致癌性，临床已很少使用。乙醇是最常用的脱水剂，安全性好但易引起组织收缩。异丙醇脱水温和，对组织损伤小。丙酮脱水速度快，适用于冰冻切片前处理。正丁醇兼有脱水、透明和包埋辅助作用。67.【参考答案】A【解析】高温高压修复是目前最常用的抗原修复方法，通过微波或高压锅加热使甲醛固定形成的蛋白交联键断裂，暴露抗原表位。修复液多为柠檬酸钠缓冲液或EDTA缓冲液。低温浸泡效率低，室温干燥无法达到修复效果，冷冻研磨和化学渗透不是标准修复方法。68.【参考答案】B【解析】PAS染色即过碘酸雪夫染色，主要用于显示糖原、黏液物质、基底膜等含多糖的成分。过碘酸氧化糖类中的乙二醇基，生成醛基，再与雪夫试剂反应生成紫红色产物。脂质用油红O染色，核酸用甲基绿染色，铁盐用普鲁士蓝染色，钙盐用vonKossa染色。69.【参考答案】B【解析】Masson三色染色中，胶原纤维被染成蓝色或绿色，肌纤维、角蛋白呈红色，细胞核呈黑色或棕色。该染色可区分胶原纤维与肌纤维，常用于肝纤维化、心肌纤维化等疾病的诊断。红色成分主要由饱和苦味酸-品红染色，蓝色或绿色成分由苯胺蓝或亮绿染色。70.【参考答案】D【解析】切片时温度过低会导致组织变硬脆性增加，切片容易皱褶。适当提高切片温度可增加组织韧性，减少皱褶。切片刀过钝会产生锯齿状切面而非皱褶。切片厚度大影响的是切片厚度而非完整性。组织脱水过度会使组织变硬脆，但不直接导致皱褶。蜡块未冷却充分也会导致切片质量问题。71.【参考答案】A【解析】甘油是常用的冷冻保护剂，可降低冰点，减少冰晶形成对细胞结构的损伤。二甲苯是脱蜡剂，乙醇是脱水剂，甲醛是固定液，丙酮也可用于脱水或固定。冷冻保护剂在冰冻切片前处理组织时使用，可提高切片质量，减少冰晶artefact。常用浓度一般为10%-30%甘油溶液。72.【参考答案】A【解析】自动组织脱水机通过程序控制，利用压力差原理自动完成试剂的更换和排出。机器可按预设程序依次经过不同浓度的乙醇、透明剂和石蜡，每个步骤时间和试剂用量均可设定。重力滴落效率低，真空吸附和离心力甩干不是脱水机的主要原理，温度差蒸发会损害组织。73.【参考答案】C【解析】脱蜡不彻底会导致后续染色试剂无法充分接触组织，出现染色浅、染色不均或花片现象。染色过深通常是染色时间过长或染液浓度过高所致。切片脱落与切片粘连或烤片不充分有关。组织收缩主要与固定和脱水有关。切片厚度与切片机操作相关。74.【参考答案】A【解析】盐酸酒精是常用的分化液，用于去除excess苏木精，使细胞核着色清晰、胞质透明。分化过度会导致染色过浅甚至脱色，分化不足则背景着色深。碳酸锂是蓝化剂，用于中和酸性使苏木精呈蓝色。伊红是对比染色剂，二甲苯是透明剂，乙醇是脱水剂。75.【参考答案】B【解析】切片刀有缺口会在切片边缘产生不规则的虫咬样缺损，这是切片机操作中的常见问题。组织内寄生虫卵会导致圆形空泡样改变而非虫咬样缺损。蜡块温度不当主要影响切片整体完整性。切片太薄不会出现缺损。固定不充分会导致组织自溶，但不会形成虫咬样缺损。76.【参考答案】B【解析】PAS染色阳性可通过淀粉酶预处理来鉴别糖原与其他PAS阳性物质。糖原可被淀粉酶水解，淀粉酶预处理后PAS染色转阴性。非糖原的多糖物质如黏多糖不被淀粉酶分解，仍保持阳性。这是PAS染色的重要鉴别手段，有助于准确判断阳性物质的性质。77.【参考答案】B【解析】冷冻速度过快会产生大冰晶，导致细胞结构被冰晶挤压破坏，形成artifact。适当控制冷冻速度可减少冰晶大小，保护细胞形态。冷冻速度过慢则可能导致组织干燥和变形。组织收缩主要与固定和脱水有关。细胞结构破坏是冰晶artifact的结果表现。78.【参考答案】A【解析】组织内源性过氧化物酶可与DAB显色底物反应产生假阳性，阻断内源性过氧化物酶常用3%过氧化氢甲醇溶液。柠檬酸钠用于抗原修复，牛血清白蛋白用于封闭非特异性结合位点，PBS用于洗涤，乙醇用于脱水。阻断内源性酶是免疫组化染色前的重要步骤。79.【参考答案】C【解析】固定时间过长会导致组织过度硬化变脆，切片时容易产生碎屑，同时过度交联会使抗原表位遮蔽，导致染色困难或染色效果差。固定时间不足则组织自溶明显，形态结构不清。适当固定时间是保证切片质量和染色效果的关键因素。一般石蜡包埋组织固定24-48小时为宜。80.【参考答案】C【解析】蜡片漂浮水温一般控制在50-55℃，此温度可使蜡片适度软化平整，同时不会使组织受损。水温过低蜡片不易展开，水温过高会导致组织过度软化甚至变形。30-35℃温度太低不利于蜡片平整，40-45℃略低，60℃以上温度过高可能损伤组织。捞片后需及时烤片使切片平整牢固。81.【参考答案】C【解析】10%中性缓冲福尔马林是最常用的组织固定液，可保持良好的形态结构，减少人工假象，适用于大多数常规病理检查。多聚甲醛固定效果好但操作复杂，乙醇和丙酮主要用于冰冻切片或特殊染色，甲醇多用于血液涂片固定。82.【参考答案】B【解析】苏木精是碱性染料，可与酸性物质如核酸结合，使细胞核染成蓝紫色。伊红为酸性染料，使细胞质和胶原纤维染成粉红色。甲基绿主要用于DNA染色，甲苯胺蓝用于肥大细胞颗粒染色，番红常用于软骨染色。83.【参考答案】A【解析】ABC法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法，是利用亲和素与生物素高亲和力结合的原理，将过氧化物酶标记在复合物上，通过显色反应显示抗原定位。该方法敏感性高，是常用的免疫组化方法之一。84.【参考答案】C【解析】正丁烷具有良好的导热性和较低的温度，是冰冻切片最常用的冷冻剂。液氮温度过低易造成组织脆裂，干冰温度也不如正丁烷适宜，石蜡油主要用于加热而非冷冻，聚乙烯乙二醇多用于包埋剂。85.【参考答案】A【解析】TUNEL法（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法）用于检测DNA断裂，是细胞凋亡检测的常用方法。