2026年制药菌种培育工技能操作考核试卷及答案

2026年制药菌种培育工技能操作考核试卷及答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1.用于生产青霉素的产黄青霉斜面菌种活化时，培养基pH应调整至（）A.4.5-5.0B.5.5-6.0C.6.5-7.0D.7.5-8.02.高压蒸汽灭菌时，若灭菌锅内冷空气未排尽，实际灭菌温度会（）A.高于压力表显示值B.低于压力表显示值C.等于压力表显示值D.无规律波动3.液体种子培养基中添加0.1%吐温-80的主要目的是（）A.调节渗透压B.促进菌丝分散C.增加碳源D.抑制杂菌生长4.采用菌丝干重法测定菌种生长量时，需将菌丝在（）条件下烘干至恒重A.60℃真空B.80℃鼓风C.105℃常压D.121℃高压5.冷冻干燥保藏菌种时，保护剂常用（）A.生理盐水B.20%甘油C.10%蔗糖D.脱脂牛奶6.菌种传代过程中，若发现斜面培养基出现白色絮状菌落，首先应怀疑（）污染A.细菌B.酵母菌C.霉菌D.噬菌体7.发酵用种子液的种龄一般控制在（）A.对数生长期初期B.对数生长期中期C.稳定期初期D.衰亡期初期8.用于头孢菌素生产的顶头孢霉，其孢子悬液制备时，最适的分散剂是（）A.0.9%NaClB.0.1%吐温-80C.无菌水D.1%蛋白胨水9.高压灭菌后培养基冷却至（）℃时方可进行倒平板操作A.25-30B.40-45C.50-55D.60-6510.菌种复壮时，采用紫外线诱变的最佳剂量范围是（）A.100-200μW·s/cm²B.300-500μW·s/cm²C.600-800μW·s/cm²D.900-1200μW·s/cm²11.液体菌种培养过程中，溶氧量低于（）时会显著抑制菌丝生长A.5%饱和浓度B.15%饱和浓度C.25%饱和浓度D.35%饱和浓度12.斜面菌种接种时，接种环灼烧后需冷却（）秒再接触菌种A.2-3B.5-8C.10-15D.18-2013.检测噬菌体污染时，常用的指示菌应选择（）A.生产菌种的原始菌株B.生产菌种的变异菌株C.常见污染菌D.革兰氏阳性菌14.固体培养基中琼脂的最适浓度为（）A.0.5%-1.0%B.1.5%-2.0%C.2.5%-3.0%D.3.5%-4.0%15.菌种保藏记录中，“CCARM”代表（）A.中国典型培养物保藏中心B.韩国微生物保藏中心C.美国模式培养物保藏所D.日本微生物保藏中心16.发酵种子液镜检时，若观察到菌丝断裂率超过（），需重新制备种子A.5%B.10%C.15%D.20%17.用于疫苗生产的动物细胞基质菌种，其传代次数不得超过（）A.5代B.10代C.15代D.20代18.培养基灭菌时，若含有葡萄糖，应采用（）灭菌方式A.121℃20minB.115℃30minC.105℃40minD.132℃10min19.菌种纯度检测时，革兰氏染色后若发现红色短杆菌，可判定为（）污染A.革兰氏阳性菌B.革兰氏阴性菌C.霉菌D.酵母菌20.冷冻保藏的菌种复苏时，应在（）中快速解冻A.0℃冰水B.25℃水浴C.37℃水浴D.50℃水浴二、判断题（每题1分，共10分。正确填“√”，错误填“×”）1.菌种活化时，可直接将-80℃保藏的甘油管菌种接入发酵罐。（）2.高压灭菌时，灭菌时间应从压力达到0.1MPa时开始计时。（）3.液体种子培养基分装量越多，溶氧量越高，越有利于菌种生长。（）4.霉菌孢子计数时，血球计数板的计数室深度为0.1mm。（）5.菌种传代次数越多，遗传稳定性越差，需定期进行复壮。（）6.检测培养基无菌性时，需将未接种的培养基置于37℃培养48h观察。（）7.噬菌体污染的典型特征是发酵液变清，镜检可见大量空菌丝。（）8.斜面菌种的棉塞需完全塞入试管口，防止杂菌进入。（）9.菌丝干重法测定时，过滤菌丝应用定性滤纸，定量滤纸会吸附菌丝。（）10.菌种保藏的核心是降低代谢活动，常用方法包括低温、干燥、缺氧。（）三、简答题（每题6分，共30分）1.简述斜面菌种接种的关键无菌操作步骤。2.列举3种菌种选育方法，并说明其适用场景。3.分析液体种子培养过程中溶氧不足的可能原因及解决措施。4.说明高压蒸汽灭菌效果的3种验证方法。5.简述噬菌体污染的应急处理流程。四、操作技能题（每题10分，共20分）（一）任务：斜面菌种转接（产黄青霉，P26-01菌株）操作要求：从已活化的母种斜面转接至新鲜PDA斜面，要求无菌操作规范，接种后斜面无杂菌生长。评分标准：1.操作前准备（2分）：检查超净台运行（紫外照射30min后通风10min）、器材灭菌（接种环、镊子等已高压灭菌）、培养基状态（无凝固不全或干裂）。2.无菌操作（5分）：①母种管与新管握持手法（拇指、食指、中指三指握持，管口向下倾斜）；②接种环灼烧（先烧环部，再烧杆部，最后烧环部至红热，冷却5-8秒）；③取菌操作（打开棉塞时棉塞不触台面，接种环轻刮母种斜面边缘，避免挑取培养基）；④接种划线（从斜面底部向上划蛇形线，不划破培养基）；⑤塞棉塞（棉塞旋转塞入，松紧适度，外露1/3）。3.结果判定（3分）：培养48h后观察，斜面无杂菌菌落（无细菌菌斑、无霉菌孢子层），青霉菌丝生长均匀，边缘整齐。（二）任务：种子液制备（顶头孢霉，生产用种子）操作要求：将斜面菌种接入500mL三角瓶（装液量100mL），制备符合要求的种子液（菌丝浓度≥8g/L，杂菌检测阴性）。评分标准：1.孢子悬液制备（3分）：①向斜面加入5mL无菌0.1%吐温-80（用移液管沿管壁缓慢加入）；②用接种环轻轻刮取孢子（避免挑取菌丝）；③转移至无菌试管，漩涡振荡30秒分散孢子；④镜检孢子分散度（无明显团块，单个孢子占比≥90%）。2.接种与培养（4分）：①接种量控制（孢子悬液OD600=0.8-1.0，接种量5%）；②三角瓶封口（8层纱布+牛皮纸，橡皮筋固定）；③培养条件（28℃，220rpm，培养24-28h）；④摇床运行检查（振幅25mm，转速误差≤±5rpm）。3.质量检测（3分）：①菌丝干重测定（过滤后菌丝于60℃真空干燥至恒重，计算得菌丝浓度≥8g/L）；②杂菌检测（取1mL种子液涂布营养琼脂平板，37℃培养48h无菌落生长）；③镜检菌丝形态（菌丝分支均匀，无自溶现象，断裂率＜10%）。答案一、单项选择题1-5：BBBAD6-10：CBBBB11-15：BBABB16-20：BDBBC二、判断题1-5：×√×√√6-10：×√××√三、简答题1.关键步骤：①超净台提前30min紫外灭菌，操作前10min通风；②接种环、镊子灼烧至红热，冷却5-8秒；③打开菌种管时棉塞不触台面，管口过火焰3次；④取菌时接种环轻刮斜面边缘，避免带培养基；⑤接种后划线均匀，不划破培养基；⑥棉塞旋转塞入，松紧适度；⑦操作过程中手臂不跨越无菌区。2.①自然选育：用于保持菌种优良性状，适用于遗传稳定性高的生产菌株；②诱变育种（如紫外线、NTG）：用于提高代谢产物产量，适用于需快速获得突变株的场景；③基因工程育种：通过导入目的基因改造菌种，适用于需定向优化代谢途径的场景（如增加抗生素合成关键酶基因拷贝数）。3.可能原因：①装液量过多（超过三角瓶体积30%）；②摇床转速不足（低于200rpm）；③菌种生长过旺（菌丝浓度过高）；④培养基黏度大（蛋白胨含量过高）。解决措施：调整装液量至20%-25%，提高摇床转速至220-240rpm，缩短培养时间至对数中期，降低培养基中高分子有机物浓度（如用酵母粉替代部分蛋白胨）。4.验证方法：①生物指示剂法（使用嗜热脂肪芽孢杆菌，121℃灭菌后接种培养基无生长）；②化学指示剂法（灭菌指示胶带由黄色变黑色，指示卡变色符合标准）；③温度记录仪法（灭菌过程中各点温度≥121℃，持续时间≥15