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文档简介

沉淀分离法

一、概述定义——利用某种沉淀剂使目标产物或杂质的溶解度降低而形成无定形固体沉淀的过程特点——浓缩倍数高、操作简便、经济、纯化倍数低等类型3、类型盐析沉淀法有机溶剂沉淀法等电点沉淀法高分子聚合物沉淀法金属离子沉淀法二、盐析沉淀法

定义——在高浓度中性盐存在下，使目标产物的溶解度降低而产生沉淀的过程盐析沉淀机理减弱静电斥力去水化膜盐析沉淀平衡式

Slog——=-Ks·IlogS=β—Ks·IS0

(其中β=logS0)盐析沉淀平衡式：

logS=β—Ks·I其中：β:

与蛋白质、温度、pH有关，与盐析剂种类无关Ks:

与蛋白质、盐析剂种类有关，与温度、pH无关4、盐析剂的选择盐析剂的条件盐析作用强：盐析能力—

阴离子＞阳离子；高价阴离子＞低价阴离子较大溶解度较好生物相容性来源丰富、经济常用盐析剂—(NH4)2SO4

、Na2SO4等5、盐析过程的影响因素蛋白质种类和浓度盐析剂的量pH

温度6、盐析操作方式及方法操作方式固体盐加入饱和盐溶液加入饱和度方法分步盐析重复盐析反抽提法7、盐析沉淀法的特点

沉淀条件温和，不会引起生物物质变性失活；非蛋白的杂质夹带沉淀很少；适用范围广；盐份含量高。三、有机溶剂沉淀法

定义——在有机溶剂存在下，使目标产物的溶解度降低而产生沉淀的过程沉淀机理增大静电力去水化层

q1·

q2F=————（库仑公式）

D·

r23、有机溶剂的选择降低介电常数对生物分子的变性作用小与水互溶安全、无毒、价廉、易回收等#常用有机溶剂为：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇4、有机溶剂沉淀过程的影响因素pH温度无机盐的浓度金属离子5、有机溶剂沉淀的特点有机溶剂易祛除固液分相容易易使蛋白质变性失活安全性差成本较高四、等电点沉淀法定义—利用两性生物物质在等电点时溶解度最小而析出固相物的过程沉淀机理—降低排斥电位和水化程度盐离子的影响—使实际等电点pI偏离（±0.5）与阳离子结合，pI升高与阴离子结合，pI降低4、特点沉淀条件温和；不引入新的物质；沉淀效果差。五、高分子聚合物沉淀法定义—利用一些水溶性高分子聚合物使目的物溶解度降低而析出固相物的过程沉淀机理非离子型（聚乙二醇等）：类似于有机溶剂沉淀离子型（海藻酸盐、聚丙烯酰胺盐、聚乙烯亚胺）：有机溶剂沉淀+架桥3、特点沉淀效果较好，条件温和高聚物的残留有一定的毒性（阳离子）六、金属离子沉淀法定义—利用一些金属离子与目的物复合，降低其复合物的溶解度而析出固相物的过程沉淀机理与羧基、胺及杂环等含氮化合物结合；如Mn2+、Fe2+、Zn2+、Cu2+等与羧基结合，不与胺及杂环等含氮化合物结合；如Ca2+、Ba2+、Mg2+、Pb2+等与巯基结合；如Hg+

、Ag+

、Pb2+等3、特点沉淀效果很好；容易使生物分子变性复合物难

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