JJF（皖）161-2023 荧光法叶绿素 a 测定仪校准规范

(皖)安徽省地方计量技术规范FluorescenceInstrumentsofChlorophylla安徽省市场监督管理局发布JJF（皖）161—2023荧光法叶绿素荧光法叶绿素a测定仪校准规范JJF（皖）161—2023JJF（皖）161—2023I 2 2 2 2 2 4 4 4 5 6 JJF（皖）161—2023JJF（皖）161—2023荧光法叶绿素a测定仪校准规范凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用发射特定波长的光照射水体，激发水体中的叶绿素a产生特定波长的荧光，荧光强图1仪器原理示意图表1计量特性要求校准项目计量特性要求线性误差重复性≤5%稳定性≤5%/h示值误差±20%JJF（皖）161—20232），在仪器常用测量范围内，按照均匀取点的原则设置5个标准点配制对应不同叶50µg/L、100µg/L、150µg/L拟合罗丹明B标准溶液的浓度值和仪器的叶绿素a浓度示值平均值绘制标准曲线得y——仪器测得的叶绿素a浓度值，μg/L；b——斜率；x——罗丹明B标准溶液的浓度值，μg/L。按公式（2）计算各测量点线性方程计算的罗丹明B浓度值，按照公式（3）计算线性误差（不包含最低浓度点），取结果绝对值最大值为仪器的线性误差校准结JJF（皖）161—20233 yxi——第i点线性方程计算的罗丹明B浓度值，µg/L；xsi——第i点罗丹明B标准溶液的浓度值，µg/L；sr（6） s——单次测量值的标准偏差，μg/L，sr——仪器重复性，%。JJF（皖）161—20234ΔS——仪器稳定性，%；选取叶绿素a浓度值在仪器量值测量范围内的水样，分成2份，作为仪器的校r——示值误差，%；由于复校时间间隔是由仪器的使用者、使用情况以及仪器本身质建议复校时间间隔一般不超过1年。如果仪器更换重要部件、维修或JJF（皖）161—2023警告：罗丹明B被列入可能致癌/诱导有机体突变的物质，操作过程中必须戴手相对扩展不确定度不大于3%（k=2）。A.2罗丹明B标准溶液的配制），并依据所用罗丹明B标准物质的浓度，配制校准用罗丹明B标准溶液。例如，根据的罗丹明B储备标准溶液。再用分度吸量管移取29mL罗丹明B储备溶液置于1000mL单标线容量瓶中，即可配制成29A.3罗丹明B标准溶液的保存与使用按上述步骤配制的罗丹明B储备标准溶液需在（0～4）℃下避光保存，防止分解。罗丹明B稀释标准溶液必须在配制后的24h内使用。实验室过程中产生的废液，应集中收集，并做好相应的标识，委托有资质的单JJF（皖）161—2023将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备B.3.2过滤装置：配真空泵和玻璃B.3.7针式滤器：0.45μm聚四样品24h内不能送达检测实验室，应现场过滤，滤膜避光冷冻运输样品滤膜于滤器壁。过滤时负压不超过50kPa，在样品刚注：仅当富营养化水体的样品无法通过玻璃纤维滤膜时，可采用离心法浓缩样品，但转移过程中应保证提取效率，避免叶绿素a的损失表B.1参考过滤样品体积注：叶绿素对光及酸性物质敏感，实验室光线应尽量微弱，能进行分析操作即JJF（皖）161—20238将离心管中的研磨提取液充分振荡混匀后，用铝箔包提取2h以上，不超过24h。在浸泡过程中要颠倒摇匀2～3次。11.85x(A664_A750)_1.54x(A647_A750)_0.08x(A630_A750)（B.1）A664——试样在664nm波长下的吸光度值；A647——试样在647nm波长下的吸光度值；A630——试样在630nm波长下的吸光度值；A750——试样在750nm波长下的吸光度值。JJF（皖）161—2023V——取样体积，L。JJF（皖）161—2023仪器名称证书编号单位名称制造厂家规格型号出厂编号测量范围校准依据校准日期校准地点环境温度相对湿度校准人员核验人员叶绿素a标准浓度值标准浓度值仪器测量值(μg/L）线性方程计算罗丹明B浓度线性误差扩展不确定度U（k=2）123平均值//截距斜率标准值测量值(μg/L）重复性1234567平均值20标准值(μg/L）20稳定性测量时间（min）02030405060测量值(μg/L）不同波长下的吸光度值分光光度法测量值(μg/L）仪器测量值(μg/L）示值误差（%）A6641A6472A6303A750平均值JJF（皖）161—2023分光光度法测量值(μg/L）仪器测量值(μg/L）示值误差（%）JJF（皖）161—2023E.1.3校准方法：在仪器常用测量范围（0.2～200）µg/L内，按照均匀取点的原则配制罗丹明B系列标准溶液。分别进行3次重复测量，用最小二乘法拟合标准溶液的浓度值和仪器的叶绿素a浓度示值平均值绘制标准曲线得到仪器的线性方程，按照方程计算出的罗丹明B浓度值与罗丹明B标准溶液浓度值进行比较（不），环境温度：5℃~40℃。xi——第i点线性方程计算的罗丹明B浓度值，µg/L；xsi——第i点罗丹明B标准溶液的浓度值，µg/L；c(Δxi)]2=c2(xi)u2(xi)+c2(xsi)u2(xsi)JJF（皖）161—2023式中：E.4.1线性方程计算的罗丹明B浓度值引入的不确定度分量u(xi)表E.1罗丹明B系列标准溶液的线性测量结果叶绿素a标准浓度值标准浓度值仪器测量值(μg/L）线性方程计算罗丹明B浓度值线性误差123平均值0.23//5071521402002860截距0.0925斜率0.0724以50μg/L的叶绿素a浓度点为例，线性方程计算的罗丹明B浓度值为：则线性方程计算的罗丹明B浓度值引入的不确定度分量为：E.4.2由标准物质引入的不确定度分量u(cs)JJF（皖）161—2023E.4.2.1有证标准物质本身引入的不确定度分量urel(cs)1E.4.2.2