高中生物人教版选修1课件专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数三

人教版选修一课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数专题二微生物的培养与应用一、课题背景1.尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。CO(NH2)2脲酶+H2O+CO22NH32.常见的分解尿素的微生物

芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌,某些真菌和放线菌也能分解尿素。

[该去哪里取样?][该配置怎么样的培养基?]方法:⑴造成有利于目的菌株生长的环境⑵同时抑制大多数其他类型微生物能分解尿素的细菌不能分解尿素的细菌15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4①从物理性质看此培养基属于哪类?固体培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源?碳源:葡萄糖、尿素氮源:尿素③此配方培养基为什么能够筛选出产生脲酶的细菌?2.利用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物①只是一种细菌吗?②都是能分解尿素的微生物吗?3.请你提供一种方法,判断分解尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。

1.培养基中有尿素即可以筛选出分解尿素的细菌?4.怎样证明此培养基具有选择性呢?以尿素为唯一氮源的培养基牛肉膏蛋白胨培养基

是分离尿素细菌判断该培养基有无选择性实验组对照组培养基类型是否接种

目的

结果只生长尿素细菌生长多种微生物是如何统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌?计数法显微镜直接计数法稀释涂布平板法比浊法膜过滤法1.显微镜直接计数法:这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。此法的缺点是不能区分死菌和活菌。

每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数2.间接计数法（活菌计数法)⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。⑵常用方法：稀释涂布平板法。

某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中,C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml),M代表稀释倍数。

稀释涂布平板注意事项①为了保证结果准确,一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中,经涂布,培养计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

如果106稀释度下的三个重复组菌落数分别为1个、50个、170个。应如何处理这个稀释组的数据?如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数,如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大,表明试验不精确,需要重新实验。

106第一天结束时1号培养皿372号培养皿403号培养皿32在菌落计数时,每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

此记录是否完整?A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落,但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。

原因:⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质)如何证明A同学制作的培养基确实被污染了?如何证明A同学操作有问题?方案一:由其他同学用与A同学相同土样进行实验

方案二:将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。

结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误;如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。

大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征

实验设计[一]土壤取样取土样用的小铁铲和盛土样的的信封灭菌。①准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。每个稀释度下需要3个选择培养基,1个牛肉膏蛋白胨培养基。还需要8个灭菌试管和1个灭菌移液管

。

②将稀释相同倍数的菌液,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

[二]制备培养基

◆应在火焰旁称取土壤10g。◆在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁进行◆分离不同的微生物采用不同的稀释度（三)样品的稀释（四)取样涂布（五)微生物的培养与观察培养不同微生物往往需要不同培养温度。

细菌:30～37℃培养1～2d

放线菌:25～28℃培养5～7d

霉菌:25～28℃的温度下培养3～4d。

某细菌固体培养基的组成成分是KH2PO4.Na2HPO4.MgSO4.葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是＿＿＿＿＿＿＿，碳源是＿＿＿＿＿＿＿，氮源是＿＿＿＿＿＿＿。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于＿＿＿＿培养基。从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于＿＿＿＿。

琼脂葡萄糖尿素选择异养型尿素在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是（)

A．调整期

B．对数期

C．稳定期D．衰亡期答案:C1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（

)A.在液体培养基上进行B.至少接种一种细菌

C.接种一个细菌D.及时补充消耗的营养物质

2.使用选择培养基的目的是（

)A.培养细菌

B.培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素A

CD4.下列说法不正确的是（

）A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4.M5，以M3作为该样品菌落数的估计值C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因