微生物知识和环境控制要求

1、微生物知识, N0：产品灭菌前的带菌量； D121：在121下杀灭90%微生物所需时间。 防范措施： 制定日常操作的规范并严格执行。 直接与药品有接触的操作应带无菌手套并频繁冲洗，操作过程中动作不宜过大。 加强对微生物知识的了解，增强无菌操作意识。,环境与微生物,环境中的微生物种类繁多，主要有附着于尘埃上的从地面飞起的 球菌属（包括八叠球菌属在内的好氧菌）；形成孢子的好氧性杆菌 （如枯草芽孢杆菌）；青霉等霉菌的孢子等。微生物的存在严重影响 着药品生产的安全，依次必须加以严格控制。,防范措施： 1.合理的厂房布局及高效的空气过滤系统 2.完善的洁净区日常卫生管理 3.每周进行空气消毒(臭氧熏蒸)

2、 4.定期对洁净环境进行监测,洁净度测定包括： 微生物 - 浮游菌 悬浮粒子 - 沉降菌,新版GMP对洁净区微生物的动态要求,我国-WHO洁净级别标准,无菌产品洁净级别的确定,A级：高风险操作区，如：无菌灌装区，灭菌后的内包装容器暴露的区域及无菌装配/连接操作的区域。 通常用层流操作来维护该区的环境状态。层流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为0.36-0.54m/s（指导值）。 B级：指A 级区所处的背景区域。 C级和D级：指生产无菌产品过程中重要程度较次的辅助操作区，除菌前药液的配制，容器具处理、包装材料清洗等区域。,悬浮粒子的要求：附录1 第九、十条 1、A级区确认时的采样量不少于1m3

3、 2、洁净区的动态监测 悬浮粒子的动态监测 关键操作的全过程，对A级区进行粒子监测 A级区的监测频率、取样量，及时发现人为干预、偶发事件及任何系统的破坏 B级区：类似于A级区，采样频率、采样量可以调整 C级区：质量风险管理原则确定 D级区：一般不作要求，（法规：必要时） 对于C/D级区的自净时间应达到规定要求,控制微生物污染途径环境控制,控制微生物污染途径环境控制,微生物的要求：附录1 第十一条 监测方法有： 1.空气浮游菌监测 沉降菌法-被动法 定量空气浮游菌采样法-主动法 2.环境表面监测 表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法） 3.人员监测 表面取样法（接触碟法）,1.空气浮游菌监测 沉降

4、菌法-被动法 沉降碟在空气中的暴露时间 4小时 监控整个灌装过程 只能给出定性和半定量的数据 应结合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价 定量空气浮游菌采样法-主动法 撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪 应取一定体积的空气（取样体积应有代表性） 仪器应经过校验,52,2，洁净区的验证和监测,2.环境表面监测：表面取样法 应对接触产品表面、设备、地面、墙面等定期监测 接触蝶法：适用于平整表面 取样面积25cm2 培养基略有凸起，高于碟子边缘，便于取样 培养基中应含有中和剂/保护剂 棉签擦拭法：适用于不规则表面 取样面积25cm2 定性或定量 表面样应在无菌操作结束时取 以最大限度地降低无菌

5、制造过程中关键表面污染的风险,53,2，洁净区的验证和监测,3.人员监测 表面取样法（接触碟法），取样时间一般为： 工作结束，离开洁净区前取样 处理异常情况后（取样后重新更衣或更换手套） 生产过程中随时监测 特别注意： 不得在刚消毒过后取样,54,每个手套(5只手指),胸口处,衣帽结合处,帽兜额头处,靴子与工作裤接口处,前臂,55,无菌区人员更衣确认和监测-手和操作服,环境监控整体要求,洁 净 区 监 测,年度洁净级别确认,日常环境监测,洁净区年度级别确认,测试项目,空气洁净度测试 静压差测试 风速或风量测试 换气次数 温度 相对湿度 照度 噪声,日常环境监测频次,洁净区监测的位置,取样位置选

6、择时考虑因素： 哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？ 在生产过程中，什么地点最容易长菌？ 哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难奏效的部位？ 什么活动会导致污染的扩散？ 在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染产品？取样只应在生产结尾换班时进行吗？,应符合“GB16292-2010” “GB16294-2010”的要求 基于风险的设计 监测点设置在潜在风险最大的位置 药品 容器 连接处 人流和物流经过的地方 监测点靠近“工作高度”,洁净区监测的位置,示例：无菌灌装线 取样点应在产品或组件暴露的区域周围取样，如： 在灌装针头处 将产品装载入冻干腔室处 胶塞供料桶

7、 无菌部件进行连接操作的部位 操作人员频繁活动处（不影响生产过程） 注意：靠近产品，但不接触产品的位置,洁净区监测的位置,粒子在线监测布置图例,传感器低于机器，采样管伸入灌装操作区内,灌装后冻干前监测点位置：药瓶是半封闭状态（敞口）保证灌装后，冻干前的环境区域是受控的。正确的取样点位置：靠近传送带。,浮游菌、沉降菌取样点,沉降菌、浮游菌：监控点位置，高度一般为离地80cm左右，或操作台面。 浮游菌、沉降菌监控点的设置根据生产工艺及污染风险综合考虑。,洁净区表面微生物取样点,C级区取样点：一般为地面、墙面及操作人员十指手套。对C级下的局部A级区取样宜在生产结束后进行，避免造成污染。,地面取样,墙

8、面取样,灌装机（A级）,产品转移（A级）,环境监测常用仪器/设备/培养基,沉降菌/浮游菌 直径：90mm,表面微生物监测 直径：55mm,浮游菌监测 100升/分,悬浮粒子监测 MetOne 3413 28.3升/分,预制培养平板包装,无菌区使用预制平板：一般采用三层包装形式：,55mm接触平板,90mm预制平板,66,预制平板进入洁净区,预制平板进入无菌区，须避免对监控区域的污染。,去除最外层包装,放入传递窗,67,预制平板脱包装,经传递窗进入洁净区的预制培养平板继续脱去外面两层包装就可以使用。,脱出第二层包装,脱出第三层包装,脱包装后单个平板,68,预制平板使用示意图,接触碟表面取样示意图：,1，取样点采样,2，取样位置消毒,3，用无尘布清洁,4，标明取样点编号,5，平板入无菌保管袋,6，保管袋密封待培养,69,针对口服制剂的环境监测,法规要求：第四十八条 口服液体和固体制剂、腔道用药（含直肠用药）、表皮外用药品等非无菌