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文档简介

1、，动物细胞工程实验，继代培养和细胞数。实验目的，培养继代的一般方法和步骤，在培养过程中掌握无菌手术技术。熟悉培养细胞的观察方法。学习血球计数仪的计数法。根据实验原理，培养皿中致密的单层生长的细胞基本上已经饱和，如果想在细胞继续生长的同时增加细胞数量，就必须进行传代(栽培)。继代培养也是保存细胞瘤的方法。这也是利用培养细胞进行各种实验的必要过程。悬浮细胞可以直接分成碟子，附着细胞要分成碟子消化。实验用品，仪器：培养箱(37)，培养皿，超净表，倒置相差显微镜。材料：卵巢癌细胞HO-8910。试剂：1640培养基(血清10%)，0.25%胰蛋白酶，75%消毒酒精。实验阶段，分无血清培养基和含血清培养

2、基进行温度培养(37)。温度计的实际显示温度优先！在实验阶段，从装满细胞的培养瓶中丢弃原始培养液。实验阶段冲洗细胞，不含血清1640培养基。实验阶段，吸除无血清培养基，添加0.25%胰蛋白酶溶液1毫升，使细胞浸入溶液。实验阶段，消化30-40s后，扔掉胰蛋白酶，加入2毫升血清1640培养基，消化后完全飞翔。吹后将悬浮细胞移至15ml离心管道，移至1000rpm离心5min。实验阶段，离心后，血清1640重悬，混合，取50毫升细胞数。实验阶段，血细胞计数仪的计算原理，根据实验阶段、细胞数结果，用含血清培养基将细胞浓度调节到1X105 /ml。分成两个培养皿，做标记，继续培养。实验完成，徽章瓶入口迅速消毒酒精灯火焰，拧紧，密封膜密封。拿出草稿，放在冰箱里。实验后，擦超净工作台内部，消毒酒精喷雾，将酒精擦干净，打开紫外线灯消毒。使用的离心管和血球计数仪需要清洗。各实验组的同学负责拿垃圾，值勤生负责打扫实验室。实验阶段：9，实验后整理工作，实验报告，讨论继代培养阶段和考虑事项，并确定主要阶段。继代培养时要注意严格的无菌操作，防止细胞间交叉污染。酶解消化适当，消化过重会损伤细胞，消化不足会使细胞难以分离。在传递后第2-3天观察细胞的生长，了解健康细胞的形态是否完整，折射性是否好。确定世代交替的时间：健康生长细胞密

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