第七章食品中兽药残留检验

1、第七章食品中的兽药残留检测、一、概况、典型的兽药是用于家畜疾病防治的药物。 然而，随着集约化养殖生产的开展，已被研制成具有某些化学、生物药用成分效果的动物保健品和饲料添加剂，属于兽药的范畴。 兽药的主要用途是治疗疾病、促进生长、提高生产率、改善动物性食品质量等。 兽药残留(residuesofveterinarydrug )是指给药后在家畜机体或产品(如鸡蛋、牛奶、肉品等)中蓄积或残留的原型药及其代谢产物，包括与兽药相关的杂质的残留。 兽药的最高残留量(MRLVD )是指某兽药在食物中或食物表面产生的最高允许兽药残留量(单位gkg，生鲜重量)。 兽药残留可分为7种：抗生素类； 驱除肠虫的药物；

2、 生长促进剂类； 抗原虫药类； 驱虫药类； 镇静剂类-肾上腺素受体阻断剂2002年农业部公布了动物性食品中最高残留量的规定：可用于食品动物，不需要制定最高残留量限制药的有88种，需要制定最高残留量限制药的有94种， 动物性食品中不能检测出兽药残留的药物有9种禁止使用，动物性食品中不能检测出的药物有31种，是发生兽药残留的原因，养殖环节的药不是发生兽药残留的最主要原因。 发生兽药残留的主要原因有：在以下几个方面非法使用、淘汰药物、滥用不遵守停药期规定的药物、打破有关标签的规定、兽药残留的危害、1 .毒性作用：急性、慢性中毒、畸形、突变和致癌作用(简称“三致”作用)2.耐药性残留分析需要微细的微量

3、操作手段和高灵敏度的痕量测定技术。 样品分离纯化技术(提取和净化方法)的简化、细化和自动化，提高了提取或净化效率和自动化水平。 例如，固相萃取法(SPE )、固相微萃取法(SPE )、超临界流体萃取法(SFE )、微波萃取法(MAE )、免疫仿射色谱(IAC )技术、基质固相分散(MSPD )技术、凝胶渗透色谱(GPC )净化定量分析上的新技术有毛细管电泳、超临界流体色谱、液相色谱质谱技术、免疫分析技术和生物传感器等。 样品预处理、1.1萃取使用适当的溶剂将待测物和部分样品基质从固体样品中转化为容易净化和分析的液体，通常可去除99%的样品杂质。 根据样品的性质，选择脂肪和水分等溶剂。 使用水溶

4、性有机溶剂(乙腈、甲醇、丙酮等)，溶剂和动物样品容易混合，提取速度快，溶剂溶解作用强； 提取液的pH值可以调节，适用范围广的提取兼作脱蛋白质和脱脂的样品均匀分布在样品提取液中，可以只提取上清液和滤液的一部分进行分析，不需要反复提取全部样品。 1.2净化将待测物和提取液中样品干扰杂质分离。 兽药残留分析常用的净化方法是液液分配和固相提取。 在液液分配：等体积分配体系中，溶质分配平衡后溶解于非极性或极性弱的溶剂中的溶质比例称为p值，可以利用p值选择提取系统，计算提取次数和提取率。 通过调节溶液的pH值、极性、离子键形成等，使被测定物的p值选择性地变化。 固相提取：的基本原理与开放柱色谱相同。 固相

5、提取中样品和微粒填料(70150m )接触面积大，净化速度快，分离性能高，操作简单，溶剂用量少，回收率高。 薄层色谱法：具有直观、速度快、样品容量大、分离性能高(颗粒3050m )等优点。 但是，没有被紫外可见区域吸收的测量物很难定位，也有可以通过标准品的发色来解决的测量物。 1.3浓缩浓缩是测定对象物浓缩或溶解的常用方法。预处理中浓缩过程中测定物的损失最大。 如果样品液不直接蒸发，则测定对象物可能附着在器具上，或者与样品基质结合，回收率会降低，高极性的测定对象物，例如磺胺类药剂是很严重的。 1.4诱导化提高检测的灵敏度和选择性成为残留分析中诱导化的最主要目的，例如，在测量对象物上连接强电负性

6、基团，适用于气相色谱的电子捕获检测器、HPLC的紫外或荧光诱导化等。 测定方法、气相色谱法：备有HID、NPD等多种高灵敏度、通用性或特异性强的检测器，检测极限一般为g/kg级。 但是，很多兽药极性和沸点高，需要复杂的衍生化程序，限制了GC的应用。 大多数化合物都可以用HPLC测定。 HPLC的分离机制与常规柱色谱相同，但填料更精细(510m )，可以重复样品，分析速度快。 HPLC至今仍缺乏满足兽药残留分析要求的通用型检测器。 紫外检测器(UVD )最普及，其次是荧光检测器和电化学检测器。 大多数抗生素在高于230nm的光谱区无吸收，在低于230nm的紫外区多数样品基质和流动相发生干涉、诱导

7、化测定，限制了紫外检测器的应用。 (许多动物源性食品的兽药残留分析采用了HPLC法，但对某些兽药残留不能达到HPLC的检出限)，高效液相色谱、HPTLC的出现使TLC进入复兴期，现在已成为仅次于HPLC和GC的残留分析方法。 HPTLC斑点原位扫描定量、定性和高效的材料分离(310m )。 虽然改变了传统TLC在灵敏度和再现性方面的不足，但仍保持了TLC简便、快速、样品容量大的优点，可以使用正相或反相板，分辨率与HPLC几乎相同。 PS广泛应用于兽药残留的快速筛选检测。 高效薄层色谱(HPTLC )、超临界流体色谱(SFC )、SFC可以弥补GC和HPLC的不足，但两者不可替代。 SFC最大的

8、优点是，猪组织中残留磺胺类药物等抗生素的SFC-MS分析等，可以容易地连接各种敏锐的检测器(MS，ECD等)。 CZE是1990年代以来最活跃的分析技术之一。 CZE与传统的凝胶电泳技术不同，CZE使用直径2550m的毛细管，不使用载体，测定成分在高压(2030kV )下游泳，截面积小，热和泳动速度均匀。 因此，CZE兼具高压电泳的高速高分辨率和HPLC的柔软高效率的优点，柱效应高达106架/m。 如果在电解质中加入超临界胶束浓度的表面活性剂，例如十二烷基硫酸钠(SDS )，则为毛细管磨电色谱(capillary mi-cellrelectrokinetiticchromatography，C

9、MEC )，分离范围CZE在简化样品预处理、残留分析和分析自动化中发挥了重要作用。 目前CZE的主要问题是样品量太小，检测的灵敏度受到限制。 毛细管区泳(CZE )、免疫分析技术、免疫分析是基于抗原和抗体的特异性、可逆性结合反应的新分析技术。 兽药残留免疫分析方法的建立程序，包括测定对象物的选择、半抗原和人工抗原的合成、抗体制备和测定方法在内的免疫分析技术的建立，无论是兽药残留分析的检测手段，还是样品净化方法，都可以大幅度简化分析过程，特别是预处理程序。 目前大多数重要的兽药建立了免疫测定法(多为ELISISA )，ELISA的缺点是影响因素多，容易出现假阳性结果。 在色谱质谱联用技术、药物残

10、留研究中，常用的色谱具有高效的分离能力和高灵敏度的定量检测能力，但仅显示了色谱的峰值和保持值，不能提供待测物残留成分的结构信息，也不能进行未知化合物的结构鉴定。 质谱等虽然具有很强的结构鉴定能力，但只适用于单纯的物质分析，没有分离能力，两者尤其可以并用仪器有效地进行分离和结构鉴定，是生物样品复杂混合物中微量成分的定性和定量分析的最有效手段之一。残留大量兽药的IAC分离纯化技术是LC-MS-MS和GC-MS检测兽药残留的最有效的分离纯化手段。 建立动物性食品中残留大量药物的定量实证检测技术(IAC-GC-MS，IAC LC-msms )，是残留分析研究领域的重要发展方向。 1 .抗生素类药物，此

11、类药物以天然发酵产物多，应用于临床最广泛的抗菌药，如青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、螺霉素、链霉素、赤霉素、赤霉素等。 青霉素类最容易引起过敏反应，四环素类、链霉素有时也能引起过敏反应。 轻度到中度的超敏感反应一般在短时间内出现血压下降、皮疹、身体发热、血管神经性水肿、血清病样反应等，极度的超敏感反应可导致过敏性休克和死亡。 如果含氨基糖苷类长期摄取超过标准的动物性食品，会损害听力和肾脏功能。 四环素类、四环素类抗生素是由放线菌产生的一种广域抗生素，含有赤霉素、赤霉素、四环素等，其结构均含有四环素的基本骨架。 广泛用于多种细菌、立克次氏体、衣原体、支原体等感染。 有欧盟和中国四环素类抗生素的

12、最大残留量(GB/T5009.116-2003 )、氯霉素类抗生素、氯霉素、甲磺霉素、无味氯霉素等。 目前无效的氯霉素对哺乳动物大肠杆菌病几乎失去治疗作用，抑制蛋白质合成和骨髓造血功能，可引起血小板减少性紫癜、粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血和溶血性贫血。 )检测出GB/T18932.19-2003、二.磺胺类药物，主要用于磺胺嘧啶、磺胺类、磺胺类变细，菌干净，新米诺等抗菌消炎。 近年来，磺胺剂在动物性食品中的残留超标现象，在所有兽药中是最严重的。 如果长期摄取含有磺胺剂的动物性食品，药物就会持续积蓄在体内。 磺胺剂主要通过肾脏排出，尿中浓度高，溶解度也低。 尤其是尿变成酸性时，在肾盂、输尿管或膀

13、胱内析出结晶，产生刺激和堵塞，引起泌尿系统的损伤，引起结晶尿、血尿、管型尿等。 三.硝基呋喃类药物，主要用于呋喃唑酮、氟沙星、氟沙星等抗菌消炎。 通过食品摄取过剩硝基呋喃类后，对人体的危害主要是胃肠反应和过敏反应。 剂量过多或肾功能不全的人，可引起严重的毒性反应，主要表现为周围神经炎、嗜酸白血球增加、溶血性贫血等。 长期摄取的人可能会引起不可逆的末端神经障碍，例如感觉异常、疼痛、肌肉萎缩等，中国和欧美很多国家禁止使用这种兽药，在动物性食品和饲料中检测不到。 盐酸克伦敦残留检测，平喘药。 这种药既不是兽药也不是饲料添加剂，而是肾上腺系神经兴奋剂。 是能促进瘦身生长，抑制肥肉生长的饲料添加剂。 理

14、化特性：白色或类白色结晶粉末、无臭、苦味、熔点161、溶于水、乙醇，溶于丙酮，不溶于醚。 测定方法GB/t 5009.192-2003，4 .抗寄生虫类药物主要用于防虫和杀虫，而常用的苯并咪唑类抗寄生虫药物有丙基苯并咪唑、丙氧基咪唑、噻吩咪唑、甲苯咪唑、苯乙烯吃苯并咪唑类药物残留的动物性食品，对人类主要的潜在危害是畸形作用和突变作用。 对妊娠期孕妇可能发生胎儿畸形，如短肢、兔唇等的所有消费者来说，突变作用可能导致消费者发生癌变和性染色体畸变，其后代有发生畸形的危险。 五、激素类药物，这种药物主要用于提高动物繁殖和生长速度，动物使用的激素有性激素和皮质激素，是性激素中最常用的，如孕酮、睾酮、雌二

15、醇等。正常情况下，动物性食品中自然存在的性激素含量低，不会阻碍消费者的激素代谢和生理功能。 但是摄取激素超标的动物性食品，可能影响消费者的正常生理功能，具有一定的致癌性，可能引起儿童早熟、儿童发育异常、儿童异性倾向等。 二、从中国出口食品，在海外检测出问题： 90年进口欧洲冷冻兔肉，因农业超额被拒绝，此外，出口量从7万吨锐减到2万吨的90年出口日本冷冻鸡肉，检测出大黄酚残留，在日本拘留了数万吨货物，国内库存欧盟从当年8月1日起禁止进口中国所有动物肉，到2001年5月为止向中国开放市场。 受此影响，我国向日本出口的冷冻鸡腿的出口价格从2100/T下降到1450/T，三、如何应对兽药残留，加快立法的兽药使用法健全化中华人民共和国商品检验法、食品卫生法、动物防疫法、兽药管理条例建立健全的兽药质量标准体系和药物残留监视体系， 监测系统建立兽药安全监测信息网络加强药物残留检测工作，推进绿色畜产品生