血凝及血凝抑制实验

1、实验二：血凝和血凝抑制实验，实验目的：滴定病毒的血凝效价，并使用一定量的病毒，通常使用4个血凝单位。血凝抑制试验：用标准病毒溶液测定血清中相应的抗体或用特异性抗体鉴定新分离的血凝病毒，检测实验鸡是否有病毒感染，监测鸡的免疫状态。掌握基本操作技术，了解其实用价值、实验原理、流感病毒结构模型图、刺激剂：亚型特异性抗原、易突变、血凝素(HA，来自H15):具有柱状功能：吸附细胞：与细胞上的受体结合，使病毒侵入细胞并以抗原性凝集各种动物的红细胞(血凝试验):其抗体可中和病毒-中和抗体抑制血凝。它与病毒吸附和引入宿主细胞有关。透明质酸可以与人或其他动物的红细胞表面的乙酰神经氨酸酶受体结合，引起红细胞凝集

2、。病毒的红细胞凝集或血凝反应。血凝原理、血凝抑制原理、血凝抑制试验原理由病毒引起的血凝现象可被相应的抗血凝素抗体抑制，即抗体与病毒结合后，血凝素不能被吸附在红细胞表面的受体上，免疫血清用于防止红细胞凝集现象，这种现象称为血凝抑制。实验材料和设备：U形或V形微孔板、微量吸管、枪头试剂：1%鸡红细胞、NDIV血凝素、NDIV抗血清、生理盐水、实验步骤1。取一个96孔的V形反应板，放在水平实验台上，在第1排1-10孔加入25微升生理盐水，但不要在第11孔加入。在第12洞加入25微升生理盐水。2.在第一个孔中加入25微升血凝素，混合均匀，吸出25微升并加入第二个孔，然后吸出25微升并加入第三个孔，依此

3、类推，直到第十个孔丢弃25微升。第12个孔不用作负控制孔。3。在所有1-12号孔中加入25微升生理盐水。4.在每个孔中加入25微升1%的鸡红细胞悬液，摇匀，在室温下静置15-30分钟，每隔5分钟观察一次结果。5.计算血凝效价，稀释至四价备用，测定血凝试验结果，并测定效价：凝集特别显著：“”凝集现象其次：“”凝集清晰可见：“”轻度凝集：“”血凝效价：显示凝集时的最高稀释度。此时，稀释是一个凝固单位。在各组所有质控品均正确的情况下，根据以下标准，凝血强度示意图“4”显示红细胞呈片状凝集，均匀分布在孔底，有时边缘不规则或皱缩。“3”红细胞显示血小板凝集，但面积略小于“4”。“2”红细胞呈片状凝集，但

4、有少量沉淀，孔底中部呈小点状。大多数红细胞沉在洞底的中心，周围有一些分散的凝集颗粒。红细胞都以边缘整齐的小点状沉入孔底。2.当对照孔正常时，红细胞凝集的100%稀释是判断凝血值的终点。能够完全凝集鸡红细胞的病毒的最高稀释倍数是该病毒的凝集价格。血凝抑制1。取一个96孔的V形反应板，放在水平的实验台上。在1-10井的第一排加入25ul生理盐水，但不要在第11井加入。在第12孔中加入25微升生理盐水。2.向第一个孔中加入25微升血清，搅拌均匀后向第二个孔中吸出25微升，搅拌均匀后向第三个孔中吸出25微升，然后丢弃25微升直至第十个孔。第12个孔不用作负控制孔。3。将25微升四价血凝素加入所有的孔1-12中，摇动并在室温下放置5分钟。4.将25微升1%的鸡红细胞悬液加入1-12个孔中，室温下摇匀15-30分钟，每隔5分钟观察一次结果。5.观察结果，记录实验1.病毒凝集红细胞是一种特殊的抗原体反应吗？为什么？2.血凝抑制试验是特异性抗原抗体反应吗？为什么？3