(公开课)微生物的实验室培养(人教版选修1)

1、,课题1 微生物的实验室培养,专题2 微生物的培养与应用,1.提供营养和条件 2.防止污染,一.培养基：,微生物生存的环境和营养物质,1.基本成分：,思考：微生物“吃”什么？,碳源、氮源、水、无机盐,碳源,无机碳源：,有机碳源：,CO2、CO32-、HCO3-,牛肉膏、蛋白胨等,自养微生物,异养微生物,氮源,无机氮源：,有机氮源：,NH4、NO3-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的： 碳源、氮源、能源。,一.培养基：,微生物生存的环境和营养物质,2.特殊营养：,维生素（如乳酸杆菌）、碱基等,（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）,3.pH、氧气的需求：,霉

2、菌（pH调至酸性）,细菌（pH调至中性或微碱性）,厌氧生物需提供无氧条件。,一.培养基：,微生物生存的环境和营养物质,4.培养基种类,固体培养基,液体培养基,有无 凝固剂琼脂,分离 鉴定,工业 生产,化学成分：,物理性质：,天然培养基 合成培养基,考点1、微生物的实验室培养,一、培养基的分类,选择培养基的应用,加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物 伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌,问题讨论,若硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻混合在一起，我们配置什么样的培养即可以将三种微生物分离

3、？,不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方,调节pH,2、成分,水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子,(生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶),真菌：56 细菌：6.5 7.5,有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压,5. 配制原则,目的明确：,营养全面、浓度适宜、比例恰当,适宜的pH值：,有机碳源,异养型：,根据微生物的种类、培养目的选择原料,自养型：,不加碳源,加入缓冲剂,细菌偏碱，真菌偏酸,（CO2碳源）,2.无菌范围：,实验操作空间消毒,操作者的手、衣着消毒,实验用具灭菌,实验操作过程,酒精灯旁操作,超净工作台,比较消毒与灭菌(原理相同）

4、,较为温和,部分生活状态 的微生物,不能,能,全部微生物,强烈,高压蒸汽灭菌 （湿热灭菌） 洒精灯灼烧灭菌 干热灭菌,（1）灭菌方法：,3、常用的灭菌和消毒的方法,培养基、无菌水、 各种耐高温的玻璃金属器具 100kPa、121 下维持15-30min,需要保持干燥 耐高温的玻璃金属器皿 160-170 下加热1-2h,接种环等金属器具,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ,(2)消毒的方法：,3.常用的消毒与灭菌的方法,请你判断以下材

5、料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手,思考,单个 或少数菌体,2.特征：,大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。,3.功能：,1.定义：,三.菌落,鉴定菌种的重要依据,固体培养基上,大量繁殖,子细胞群体,四.大肠杆菌的纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1.计算：,培养基用量,2.称量：,3.溶化：,牛肉膏黏稠，用称量纸称取,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖,牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解,取纸,蛋白胨、NaCl,琼脂,补水定容,4.调pH、分装、封口：,5.灭菌：,6.倒平

6、板：,培养基、培养皿,分散成单个细胞,形成单个菌落,7无菌检查： 将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,问题讨论,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝

7、固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,平板划线法：,稀释涂布平板法：,2.培养：,将接种后的培养基和一个未接种的培养基,放入37恒温箱中培养12h24h后，,观察并记录,形成单个菌落,分散成单个细胞,（三）平板划线分离法,主要器具：,操作过程：,注意：,无菌操作方法：同前。,将培养皿_（盖在下），放于_恒温培养 箱中培养_小时。,在作第二次以及其后的划线操作时，要从 上一次划线的开始_划线。,接种环、,思考：若如上图所

8、示进行划线分离，则接种环总 共进行几次灼烧灭菌？,恒温培养箱。,每次划线前接种环都要灼烧灭菌，再冷却。,末端,倒置,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？,操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。,2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？ 为什么？,划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,3.在灼烧接种环之后，

9、为什么要等其冷却后再进行划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种。,4.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,5、如何判断接种操作是否符合无菌要求？ 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一 致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是 符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明 接种过程中，无菌操作还未达到要求。,（四）稀释涂布平板法,主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管,操作过程：,先将培养菌液稀

10、释（10-510-7倍）,用移液管或吸管取0.1ml稀释度不同的菌液，加 在平板上，用无菌玻璃三角刮刀均匀涂布在培养 基平面上。在适当稀释度下，可培养得到相互分 开的的菌落。 将培养皿倒置（盖在下），放于 恒温培养 箱中培养小时。,划线分离方法简单；涂布分离，易形成单菌落，且可计数，但操作复杂些。,6支试管，分别加入9ml无菌水,101,102,103,104,105,106,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,菌液,微量 移液器,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,b.涂布平板：,不超过0.1ml,各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照,滴,灼,试,涂,10g土样,从土壤中分离微生物,稀释涂布法,三.菌种的保藏：,1.临时保藏：,试管固体斜面培养基上,4,2.长期保存：,菌种易被污染、变异,甘油管藏,1ml甘油1ml菌液,20,思考：菌种保存为何采用斜面而