药物的杂质检查

1、药物的杂质检查,基本内容,一、药物纯度的概念与要求,第一节 概述,1.药物纯度的概念： 药物的纯度是指药物的纯净程度。 对药物纯度的认识是在防治疾病的实践中积累起来的,2.对药物纯度的要求随着临床应用的实践和分析测试技术的发展，在不断改进，使之更加完善。,3.杂质：药物中存在的无治疗作用的、影响药物稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。,4.药物纯度的评价： 应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。,5.与试剂的纯度不同，不能用化学试剂的规格代替药品标准，更不能将化学试剂当作药品直接用于临床。,二、杂质的来源,贮藏过程中产生： 外界条件影响：日光、

2、空气、温度、湿度、 微生物等引起药物产生,2杂质的种类,一般杂质:在自然界分布比较广泛,在多种药物的生产或贮存过程中容易引入的杂质。 如：pH值、溶液澄清度、氯化物、硫酸盐、重金属等,特殊杂质：在有关药物的生产和贮存过程中，因其生产工艺或药物本身的性质可能引入的杂质。,三、杂质的限量检查,在不对人体有害、不影响疗效的情况下，允许药物中存在一定量的杂质。 1.杂质限量： 药物中所含杂质的最大允许量。 表示方法(g/g)：或ppm（百万分率,10-6） 2.限量检查： 药物中杂质的检查，一般不要求测定其含量，而只是检查杂质的量是否超过限量。,杂质限量检查方法：对照法,合格,不合格,对照液浊度 供试

3、液浊度,杂质限量的计算：,式中： L 杂质的限度（%） C 对照液浓度 （g/ml） V 对照液的加入体积（ml) S 供试品的量(g) 注意: 单位统一,例：,对乙酰氨基酚中氯化物的检查： 样品2.0g 溶于100ml水中，取25ml检查Cl-，与标准NaCl溶液(10g/ml) 5ml对照液相比，不得更深。,C= 10g/ml V=5.0ml S= 25 2.0 100=0.5g,一氯化物检查法： 1.原理： 供试液：Ag+ClAgCl（白色混浊） 对照液：标准氯化钠溶液,第二节 一般杂质的检查方法,2.条件： 硝酸酸性条件（稀硝酸10ml） 反应试剂：硝酸银试液 1.0ml 杂质对照：N

4、aCl(10g/ml) 灵敏度范围： 50-80 g/50ml 讨论：选择稀硝酸反应条件的意义。,3.讨论 比浊方法：同置黑色背景下，从上至下观察。 氯化物适宜浓度：50-80g/50ml。 硝酸酸性：作用。 避光。 供试液若不澄清，需经滤过处理。 供试液若有色，需经处理后方可检查。,供试品有色： （1）内消色法，按中国药典附录规定的方法处理。,（2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查， 可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。,二、硫酸盐检查法,1.原理： 供试液：SO2 Ba2 BaSO（白色混浊） 对照液：标准硫酸钾溶液,比浊,3.讨论 比浊方法：同置黑色背景下，从上至下观察。 硫酸盐

5、适宜比浊浓度：100-500g/50ml。 盐酸酸性。 供试液如不澄清，需滤过。 供试液若有色，可采用内消色法处理。,三铁盐检查法 (一）硫氰酸盐法 1.原理： 供试液：Fe3 6SCNFe(SCN)63（红色） 对照液：标准铁溶液,比色,2.方法:,3.讨论 比色方法：白色背景下，从侧面观察。 盐酸酸性作用。 过硫酸铵的作用。 Fe3的适宜比色范围：10-50g/50ml。 色调不一致时或所呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时：可分别移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，分别取醇层比色。,(二）巯基醋酸法（BP ） 原理：巯基醋酸还原Fe3+为Fe2+，在氨碱性试液中与 Fe 2 +作用生成红色配

6、位离子。 2Fe3+ + 2HSCH2COOH 2Fe2+ + SCH2COOH + 2H+ SCH2COOH Fe2+ + 2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 + 2H+ Fe(SCH2COOH)2 Fe(SCH2COOH)2 2- + 2H2O,2OH-,四、重金属检查法,重金属是指在实验条件下与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等，由于药品生产过程中遇到铅的机会比较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅作为代表。,第一法(硫代乙酰胺法) 用于溶于水、稀酸和乙醇的药物 1.原理： 供试液：CH3CSNH2 + H2O CH3CONH2 +

7、H2S H2S + Pb2 PbS+ 2H（黄棕黑） 对照液：标准铅溶液,比色,2.方法：,3.讨论 同置白色背景下，从上至下观察。 pH3.5醋酸盐缓冲液。 Pb2适宜比色范围：10-20g/25ml。 供试液有色时,需预先处理。 供试品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氢析出S 产生混浊影响比色，可加Vc或盐酸羟胺使Fe3+还原成Fe2+再检查。,第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法 用于在水、稀酸、乙醇中难溶，或含芳环、杂环 （能与重金属离子形成配位化合物）的有机药物 1.原理：C-M炽灼破坏后Mn第一法检查 2.方法：500600炽灼,第三法：硫化钠法 用于难溶于稀酸但能溶解于碱性水溶液的

8、药物 （磺胺类、巴比妥类） 供试液：Pb2Na2SPbSNa（灰黑色） 对照液：标准铅溶液 第四法(微孔滤膜法)： 用于重金属限量低（含2-5g重金属）的药物。2010 版中国药典已不收载。,比色,五砷盐检查法 （一）古蔡氏法： 1.原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，氢与药物中微量砷盐反应，生成具挥发性的砷化氢气体，遇溴化汞试纸产生黄至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液在同样条件下生成的砷斑比较，颜色不得更深。,Zn+HCl,古蔡氏法:,SbH3+HgBr2SbH2(HgBr)+HBr 锑斑,供试品、HCl、Zn、KI、SnCl2,Pb(Ac)2棉,HgBr2试纸,古蔡氏法仪器装置图,KI和酸性

9、SnCl2的作用：,AsO43- + 2I- +2H+ AsO33- + I2 + H2O AsO43- + Sn2+ + 2H+ AsO33- + Sn4+ H2O I2 + Sn2+ 2I- + Sn4+ 4I- + Zn2+ ZnI42-,AsO43-,AsO33-,AsH3,慢,快,KI SnCl2,将五价砷还原为三价砷，加快反应速度,5,3,抑制锑化氢的生成,促进AsH3的生成,形成Zn-Sn齐，去极化,Pb(AC)2棉的作用： 消除锌粒和供试品中可能含有的少量的硫化物的影响。 S2- + 2H+ H2S H2S + HgBr2 2HBr + HgS （汞斑） H2S + Pb(Ac

10、)2 PbS + 2HAc,2.供试品处理,（1）供试品为S2-,SO32-, S2O32-等: 因在酸中生成H2S, SO2,与HgBr作用生成HgS或Hg，干扰砷斑检查。 用硝酸氧化成硫酸盐可消除。 （2）供试品为Fe3+ ，能消耗KI，SnCl2 ，可先加足量 SnCl2。 （3）环状结构有机药物，先有机破坏 （4）含锑药物，改用白田道夫（Betterdorff ）法 2As3+ + 3SnCl2 + 6HCl 2As+ 3SnCl4 + 6H+,胶态、棕褐色,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法 （silver diethyl dithio carbamate) （Ag-DDC法） 1.原理

11、： 供试液：AsH3+ 6Ag（DDC）Ag （红色胶态） 对照液：标准砷溶液,比色或 测定A,仪器装置,小结,六、溶液颜色检查法,控制药物中有色杂质的含量 1. 目视比色法,5种色调 10种色号,标准比色液,标准贮备液,比色原液,K2Cr2O7 CoCl2 CuSO4,2. 分光光度法 有色杂质对光有吸收，通过测定吸收度可控制其限量 3. 色差计法 通过比较供试品、标准比色液与水之间的色差值,黄绿、黄 橙黄,橙红 棕红,七、易炭化物检查法 检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。 这类杂质多数结构未知，常采用加硫酸呈色后与对照液比较的方法进行检查。,八、溶液澄清度检查法(检查不溶

12、性杂质),与浊度标准液比较 浊度标准贮备液：硫酸肼乌洛托品甲醛腙 （白色混浊） 浊度标准原液 浊度标准液：5个级号 澄清：系指供试品溶液的澄清度相当于所用溶剂或 未超过0.5号浊度标准液,H2O,H2O,九、炽灼残渣检查法（控制非挥发性无机杂质）,炽灼残渣：有机药物经炭化或经加热使挥发性无机物分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。 加硫酸炽灼法：700800; 如炽灼残渣需作重金属检查，则炽灼温度应控制在500600 恒重：供试品连续两次炽灼或干燥后的重量差异在0.3mg以下,十、干燥失重测定法检查药物中水分和其他挥发性物质,干燥失重：药品在规定条件下，经干燥后所减失的量。 1.

13、常压恒温干燥法 适用于受热较稳定的药物 温度：105 2.减压干燥法 适用于熔点低、受热分解的药物 3.干燥剂干燥法 适用于受热易分解或升华的药物 干燥剂：硅胶、硫酸、五氧化二磷,4.热分析法 （在程序控制温度下，测定物质的物理、化学性质与温度关系的一类技术。） 热重分析法（TGA） 在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系。 特点：样品用量少、灵敏、快速 常用于贵重和易氧化药物的干燥失重测定。,草酸钙(CaC2O4H2O)的热重曲线,.差热分析法（DTA) 是在程序升温下，测量供试品和参比物之间的温度差与温度关系的一种技术。 参比物是一种惰性物质，在加热过程中不发生相变和化学变化。因此温差(

14、T)只与被测物质的量质 变化有关。 T= 0 被测物未发生吸热或放热反应 T= - 为吸热峰 ，峰顶向下 T= + 为放热峰 ，峰顶向上,测定药物熔点 应用 尖峰为物理变化 药物定性分析 宽峰为化学变化 估测药物的纯度,鉴别,.差示扫描量热法(DSC) 是在程序升温下，测量维持样品和参比物的温度相同，系统所需输给待测物质和参比物的能量差随温度（或时间）变化的热分析技术。 供试品吸热：系统供能增加 供试品放热：系统供能减少,应用：鉴别、晶型鉴别、纯度检查、测定熔点或水分,不同纯度苯甲酸的DSC曲线,十一、水分测定法,卡尔费休法 原理： I2+ SO2 + H2O 2HI + SO3 费休氏液：I

15、2、 SO2、无水甲醇、无水吡啶 终点：费休氏液：淡黄红棕色 永停法,十二、有机溶剂残留量测定法,主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂 常采用气相色谱法进行检查 直接进样法 顶空进样法（适用于挥发性大的样品测定）,第三节 特殊杂质检查方法,特殊杂质：在该药物的生产和贮存过程中，根据药物的性质、生产方法和工艺条件，有可能引入的特有杂质。 方法： 利用药物和杂质在物理和化学性质上的差异进行,一、物理性质上差异：,臭味及挥发性的差异颜色的差异溶解行为的差异旋光性质的差异,二、化学性质上差异：,酸、碱性质的差异氧化还原性的差异杂质与一定试剂产生沉淀杂质与一定试剂产生颜色反应杂质与一定试剂反应产

16、生气体,三、光谱分析法：,（一）紫外分光光度法 在药物无吸收而杂质有吸收的波长测定吸收度，规定测得的吸 收度不得超过某一限值。,利用药物和杂质对光选择性吸收性质的差异,（二）原子吸收分光光度法 用于金属元素的测定。,试样预处理原子化器待检元素的原子蒸气 求出待检元素含量检测器吸收特定的光,（三）红外分光光度法 用于药物中无效或低效晶型的测定。晶型结构不同，化学键的键长、键角等发生不同程度的变化，导致红外吸收光谱中某些特征峰的频率、峰形、强度等出现显著差异。,四、色谱分析法,（一）TLC 1.杂质对照品法判断结果：供试品溶液如显与对照品相应的 杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较 ，不得更深。

17、 需要对照品,特点：分离效能高，分离的同时进行测定，应用广泛,2.高低浓度对比法 当杂质结构不能确定、或无杂质对照品时，采用此法 要求：杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近,供试液,稀释,对照液,点样、展开、干燥、显色,结果判断：供试液所显杂质斑点与对照液主斑点比较，不得更深。,（高）,（低）,3.1法与2法并用 适用：当药物中存在多个杂质时，其中有的杂质有对照品，有的杂质没有对照品或结构未知,4.对照药物法 适用：无合适杂质对照品，或供试品杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异。 可用与供试品相同的药物作为对照品，此药物所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。,（二）高效液相色谱法(HPLC

18、) 1.内标法加校正因子测定法 需要杂质对照品,校正因子的测定 杂质对照品+内标物质测定,供试品+内标物质测定,2.外标法测定 需要杂质对照品，进样量能够精确控制。,供试液：A杂 对照液：A对,3.加校正因子的主成分自身对照法 建立方法时，需要杂质对照品 杂质检查时，不需杂质对照品,杂质对照品药物对照品 f 校正因子直接载入各品种质量标准中 供试液 对照液：供试液稀释成与杂质限度相当的溶液,分别测定,C杂,4.不加校正因子主成分对照法 用于没有杂质对照品时杂质的检查 对照液：供试品的稀释液，进样测得A主 供试液：进样测得杂质Ai，杂质Ai A主即为合格.,5.峰面积归一化法 适用于粗略测量杂质含量 L% = Ai /(Ai + A主）100% 例如：利巴韦林中有关杂质的检查： 对照品液(5g/ml)