（天津专用）2020高考生物二轮复习第16讲基因工程课件.pptx

1、-2-，1，基因工程1。基因工程3种工具，-3-，-4-，2。PCR技术(1)PCR的过程，-5-，(2)PCR和DNA复制的比较，-6-，-7-，3。基因工程操作程序(1)目的基因是从基因库中获得的。用PCR技术扩增：是在体外大量克隆目标基因。用化学方法对a .核苷酸序列进行已知的直接合成。-8-，(2)基因表达载体的构建基因表达载体的构成：目的基因启动子末端基因。基因表达载体的构建方法-9-，(3)将目的基因导入受体细胞，-10-，(4)目的基因的检测和鉴定，-11-，2，蛋白质工程1。蛋白质工程，-12-，2。蛋白质工程和基因工程的比较，-13-，3，DNA的粗提取和鉴定1。DNA的粗提

2、取(1)材料选择：选择DNA含量比较高的生物组织。(2)破裂细胞动物细胞：吸水破裂。植物细胞：洗涤剂盐研磨。(3)去除杂质的方法利用不同浓度NaCl溶液中DNA的溶解度，通过调节NaCl溶液的浓度来去除杂质。利用酶特异性，在滤液中直接添加莲肉粉，1015 min的反应，幼肉粉中的木瓜蛋白酶可以分解蛋白质，但不会破坏DNA。利用对高温的DNA耐受性，将过滤器放入6075的恒温水浴罐，保温1015分钟，使蛋白质变质，DNA分子不变质。-14-，(4)DNA的析出：将与滤液体积相同的冷却酒精溶液(95%的体积分数)放入处理后的滤液中，静置23分钟后，溶液中出现白色细丝，用玻璃棒向一个方向搅拌，卷起纱

3、线。2.在DNA识别沸水浴条件下，DNA把二苯胺染成蓝色。-15-，试卷点1，试卷点2，试卷点3，基因工程，1。(2019年全国丽莎)基因工程中，PCR技术可以扩增目标基因。请回答以下问题：(1)基因工程中使用的目的基因可以人工合成，也可以从基因库中获得。基因库包含和。(2)生物体细胞内DNA复制开始时，释放DNA双链的酶。利用PCR技术在体外扩增过程中，将反应体系的模板DNA链变成单链的条件是。这两股释放过程的共同点是破坏DNA股分子。(3)目前在PCR反应中使用Taq酶代替大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是。-16-，测试点1，测试点2，测试点3，回答：(1)基因组文库cDNA库(2)分解酶

4、加热9095氢键(3)Taq酶热稳定性高，大肠杆菌DNA聚合酶在高温下停用下表是限制酶识别序列及其切割部位的几种酶及其切割部位。在图1，图2中，与切割部位相同的酶没有重复标注。请回答以下问题：-18-，测试点1，测试点2，测试点3，-19-，测试点1，测试点2，测试点3，(1)重组质粒构建为图的质粒和目的基因，通过选择两种限制性酶，酶切，酶切载体和目的基因片段要扩增重组质粒，需要将其转移到状态大肠杆菌。(2)筛选转移到重组质粒的大肠杆菌，应添加到筛选板培养基中。PCR识别，图2中的引物组成的板块上建立的殖民地。(3) BamH酶切割的DNA端与用Bcl酶切割的DNA端相连，连接处的6对碱基对对

5、该部位会切割出两种酶(不能填充、不能做或只能一种)。(4)把图1质粒切成Sau3A，就能得到不同大小的DNA片段。-20-，测试点1，测试点2，测试点3，回答：(1)Bcl和HindDNA连接感(2)四环素引物和引物c，(4)7，-21-，测试点1(2017江苏)金属硫蛋白(MT)是一种广泛的金属结合蛋白，研究小组计划通过聚合酶chain reaction (PCR)获取目的基因，并构建基因工程细菌以净化重金属废水。PCR扩增过程的示意图如下。请回答以下问题：-22-，组卷点1，组卷点2，组卷点3，(1)从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA并获取，用于PCR扩增。(2)设计一对引物(引物1

6、和引物2)，它们跟MT基因的两端序列互补配对。(。为了方便构建重组质粒，需要在引物上增加适当的部位。设计底漆时，应避免在底漆之间使用，以防止底漆自身连接。(3)在图中，阶段1为1，阶段2表示复性，阶段3表示延伸，这三个阶段构成了单个循环。(4)PCR扩增时复性温度的设定是成败的关键。复性温度过高时受损的基本对。复性温度的设置与引物长度、基本配置有关，长度相同，但引物应设置更高的复性温度。(5)如果PCR没有反应任何放大产物，可采取的改进是_ _ _(充电序列号：上升复性温度降低复性温度降低引物重新设计)。-23-测试点1，测试点2，测试点3，回答：(1)逆转录cDNA (2)限制性核酸内切基本

7、互补对(3)变性(4)底漆和模板GC含量高(5)(2)每个酶的切割部位最好只有一个。每个限制性内切酶只识别单个切割部位，因此载体上有一个或多个此酶切割部位可能会导致切割重组后丢失某些片段。丢失的片段有复制原点，形成的向量进入受体细胞后不能自主复制。如果某个载体只有一个限制酶的切割部位，就可以把酶切掉，然后把这个环打开成外源DNA片段，这样就不会丢失自己的片段。-25-，考试点1，考试点2，考试点3，4。(2019天津科学)b基因存在于水稻基因组中，仅在体细胞(2n)和精子中正常表达，但在卵子中不会转录。为了研究b基因表达对卵子的影响，设计了以下实验。-26-，试卷1，试卷2，试卷3，根据图回答

8、以下问题。(1)B基因不会在水稻卵细胞中转录，推测其可能的原因是卵细胞中(单一选择)。包含A. b基因的染色体缺失B.DNA聚合酶失活C.B基因发生基因突变D.B基因的启动子不能启动转录(2)从水稻体细胞或中提取总RNA并构建文库，从而获得B基因编码蛋白的序列。将该序列连接到露西基因(荧光素酶可以催化荧光物质)和融合基因(表达的蛋白质可以拥有两种蛋白质各自的功能)，然后构建重组表达载体。(3)在工艺转换筛选过程中，T-DNA整合到受体细胞染色体DNA中，过程需要在培养基中添加卡那霉素。-27-，试验点1，试验点2，试验点3，(4)在获得转基因植物的过程中，以下识别筛选方法是正确的(多选)。a

9、.以随机断裂的b基因片段为探针制造的DNA分子杂交B. Luc基因为模板，利用设计探针对DNA分子杂交C. b基因编码蛋白进行序列，以设计探针和从卵细胞中提取的mRNA杂交.荧光素为模板，检测添加的卵细胞是否释放荧光(5)从转基因植物的未成熟种子中分离出胚胎，观察细胞内只包含一个染色体组一般来说，大米卵细胞在不受精的时候不发育，不发育。答案：(1)D(2)精子cDNA(3) (4)BCD (5)B基因表达将卵子直接发育成胚胎，没有受精-28-，试纸1，试纸2，试纸3，5。(2018年全国科学)一种荧光蛋白(GFP)可以用紫外线或蓝光刺激来检测细胞内目的基因的表达，一个研究小组将某种病毒的外壳蛋

10、白(L1)基因连接到GFP基因的5个末端，称为L1-GFP融合基因(a)其结构和酶切部位的度数如下图所示，e1e 4 4 4的4种限制性酶产生的粘着性端各不相同。-29-，试卷1，试卷2，试卷3，回答以下问题。(1)该组推测，在质粒P0上插入甲时使用了两种限制性酶，这两种酶的使用是为了保证或保证。(2)将P1转移到体外培养的牛皮肤细胞后，在该细胞中观察到绿色荧光的情况下，说明L1基因在牛皮肤细胞中完成了过度过程。(3)为了得到含有甲的牛，该组需要做的是：能产生绿色荧光细胞的业力、体外培养、胚胎移植等。(4)一个学生用PCR方法检测克隆牛的多个组织细胞中是否存在a，这时该牛的其他组织细胞必须分别

11、用PCR模板(mRNA，总RNA或细胞核DNA填充)。(。-30-，测试点1，测试点2，测试点3，回答3360(1)E1和E4甲的完整甲壳和载体正确连接(2)转录翻译(3)细胞核卵母细胞(4)核DNA，-3360是菊花的主要害虫之一。研究人员将抗虫基因转移到菊花中，培育了抗虫菊花。下图是获得转基因菊花的技术过程，将回答以下问题。注入卡那霉素耐药基因(kanR)是标记基因，菊花叶对卡那霉素很敏感。-32-，试验点1，试验点2，试验点3，(1)为了促进重组质粒对土壤亚基帕的吸收，可以处理土壤农杆菌以吸收重组质粒。(2)将重组质粒引入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌可做的特性，将目的基因注入受体细胞，然

12、后插入菊花细胞，最终形成转基因植物。(3)用添加了特定浓度植物激素和激素的培养基转移愈伤组织，在适当条件下培养，筛选转基因菊花。(4)用PCR方法检测转基因菊花是否有目标基因时，应根据的核苷酸序列设计特定引物，以此作为模板的第一次扩增。-33-，试验点1，试验点2，试验点3，(5)转基因菊花的软茎、叶和人工饲料以适当比例混合后食用天牛二岁幼虫的试验结果见下表。对照组要喂同样的量。转基因菊花对天牛2岁幼虫有强烈的毒杀效果的表分析引人注目。-34-，测试点1，测试点2，测试点3，回答3360(1)Ca2(或CaCl2)易感(2)菊花(或植物)细胞感染，T-DNA被受体细胞染色体()以下是蛋白质工程

13、的基本途径，想回答以下问题。(1)图中，过程的主要依据是每个氨基酸有对应的分子，上面的碱基与基因中的碱基配对时遵循。(2)通过过程获得的脱氧核苷酸序列不是完整的基因，要想表达并运行该序列，该序列必须有各自的和，在过程中有酶的参与。(3)完成流程需要技能。-36-，测试点1，测试点2，测试点3，回答：(1)密码子mRNA基本互补配对原理(2)启动子终结器DNA连接(3)基因工程，-37-，测试点1，干扰素alpha 2a是人类白细胞合成抗病毒药和抗癌能力强的蛋白质。通过基因工程培养出了干扰素alpha 2a基因母鸡，结果发现产生的蛋中含有大量的干扰素alpha，只能利用简单的净化系统，有效地从转

14、基因母鸡的蛋中获取所需的蛋白质。请回答以下相关问题。(1)通过基因工程技术培养干扰素alpha 2a基因母鸡的目的是先从人类白细胞中提取mRNA，在提取物中添加RNA酶抑制剂。提取人白细胞mRNA后，可通过方法获得cDNA。然后用“噬菌体”或“一种家禽病毒”作为目标基因载体，将cDNA放入鸡受精卵中，并将受精卵培养成成体。目的基因和载体连接时DNA连接酶催化的化学键。-38-，测试点1，测试点2，测试点3，(2)通过蛋白质工程生产干扰素2a，一般过程是从干扰素2a的功能中确认氨基酸序列，并确定它以获取基因，然后进行表达，纯化，获得干扰素2a。之后还需要对合成的干扰素alpha 2a进行能力测试

15、。答案：(1)防止RNA分解逆转录病毒磷酸二酯键(2)。蛋白质的结构性脱氧核苷酸序列抗病毒和抗癌，-39-考点1，考点2，考点3，DNA的粗提取和鉴定，(2019年江苏江阴期)以下是有关DNA粗提取实验的阅读资料。a .核酸很不稳定，容易被比较激烈的化学、物理因素和酶的作用分解。制造DNA时，添加DNA酶(水解DNA的酶)的抑制剂柠檬酸钠，去除Mg，使DNA酶不被激活。b .核酸的DNA和RNA在体内以核酸和蛋白质构成的核蛋白形式存在。DNA核蛋白在浓度为2 mol/L的NaCl溶液中的溶解度很高，但在浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度很低。RNA核蛋白溶解在浓度为0.14 m

16、ol/L的NaCl溶液中。c .苯酚处理可使蛋白质变质，并留在苯酚层。在DNA溶液中加入体积为95%的酒精溶液2.5倍，就可以分离DNA。此时DNA很粘，可以用玻璃棒搅拌，用灯丝去除。-40-，测试点1，测试点2，测试点3，D.DNA和二苯胺溶液在沸水浴条件下反应，产生蓝色化合物。e .实验材料和仪器：柠檬酸钠溶液、石英砂、浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液、浓度为2 mol/L的NaCl溶液、蒸馏水、苯酚、体积分数为95%的酒精、二苯胺试剂、进安镇硫酸、科丽妍花f .实验阶段：粉碎均质过滤滤液稀释6倍，溶解粘性物粘着物，定酚后，去上部清液提取DNADNA鉴定。-41-，测试点1，测试点2，测试点3，(1)钩住时为10 g菜花北菇，适量的奎师那，其目的是将滤液稀释6倍。(3)取粘稠物质，放入2毫升溶液中，重新溶解DNA核蛋白，添加2毫升，充分振动，固定后，丢弃上层液。此步骤的目的是消除。(4)如何从剩下的溶液中提取DNA？5)提取的物质怎样证明其实是DNA？(？-42-，测试点1，测试点2，测试点3，回答3360(1)浓度为2mol/L的NaCl溶液柠檬酸钠溶液(2) DNA溶解度减少(3)浓度为2mol/L的NaCl酚蛋白(5)将提取物与二苯胺试剂混合后，用沸水浴，溶液为蓝色时，提取物为D