2分离以尿素为氮源的微生物及计数.ppt

1、微生物种类及其代谢,同化作用： 生物体从外界获取营养物质，转化为自身组成物质的过程。 异化作用： 生物体自身物质分解，放出能量，排出废物的过程。,微生物种类及其代谢,同化作用类型： 自养型：直接利用环境中的无机物合成自身所需要的有机物。如进行光合作用的绿色植物、蓝细菌。 硝化细菌化能合成作用：利用化学反应释放的化学能，将无机物合成自身的有机物。 异养型：直接利用环境中的有机物合成自身所需要的有机物。如各种动物、大多数细菌等。,微生物种类及其代谢,异化作用类型： 有氧呼吸型（需氧型） C6H12O6+6O2+6H2O6CO2+12H2O+能量 无氧呼吸型（厌氧型） C6H12O6 2C2H5OH

2、+2CO2+能量 C6H12O6 2C3H6O3+能量,微生物种类及其代谢,微生物包括哪些类型？ 构成微生物的细胞类型有哪些？ 不同微生物代谢类型有哪些？ 同化作用+异化作用=代谢类型,微生物种类及其代谢,单细胞、 原核细胞,自养需氧型,异养需氧型,异养厌氧型,蓝细菌、 硝化细菌,醋酸杆菌、 大肠杆菌,乳酸菌、 大肠杆菌,微生物种类及其代谢,单细胞、 真核细胞,多细胞、 真核细胞,异养、 兼性厌氧,异养 需氧型,酵母菌,霉菌（青霉、曲霉）,微生物种类及其代谢,微生物的代谢类型是配制培养基及培养的基础,分离以尿素为氮源的微生物并计数,实验目的 1使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶

3、的细菌） 2使用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应 3说明测定细菌数量的原理与方法,分离以尿素为氮源的微生物并计数,实验原理 （1）琼脂和琼脂糖 琼脂是一种未被纯化的混合物，主要成分为琼脂糖和琼脂果胶，还含有少量的含氮化合物，及其它有机杂质和不溶性杂质。琼脂作为微生物固体培养基不可缺少的组成成分，其优点是： 其主要成分不能被微生物利用； 可使培养基固化； 不影响培养基中其他营养物质被细菌吸收。,分离以尿素为氮源的微生物并计数,实验原理 实验是用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固化剂，其目的是：尽可能使培养基中只含尿素一种含氮化合物，以防止琼脂中的含氮化合物被以尿素为氮源的细菌利用，有利

4、于对这类细菌的筛选。,分离以尿素为氮源的微生物并计数,（2）酸碱指示剂（鉴定） 尿素在被脲酶催化分解前是中性的，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性。 本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.48.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色，,实验原理 以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，由于细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中尿素的分解，产生的NH3使培养基的pH由原来的中性变为碱性，于是培养基中的酚红由黄色变成红色，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。,分离以尿素为氮源的微生物并计数,分离以尿素为氮源的微生物并计数,关键技术“涂布分离法

5、” 涂布分离时，需要先将菌液稀释，一般稀释到10-510-7之间，然后取0.1mL的不同稀释度的菌液，放在培养皿的固体培养基上，再用消毒后的玻璃刮刀把这些菌液涂布在培养基平面，在适当的稀释度下，可培养产生相互分开单个的菌落。通常每个培养皿中有20个以内的单菌落为最合适。 将每个菌落分别接种在斜面上扩大培养后，再做功能性实验。,分离以尿素为氮源的微生物并计数,基本操作步骤 （1）制备空白平板：取2个三角瓶，分别装入已灭菌的全营养LB固体培养基和尿素固体培养基，放在超净工作台上，冷却至60 左右时，在酒精灯旁把上述两种培养基分别倒至2个培养皿中（做两组，共4个空白平板），轻轻摇匀，平放至凝固。,分

6、离以尿素为氮源的微生物并计数,（2）制备细菌悬液：在无菌条件下，在将1g土样加到装有99 mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即成10-2土壤稀释液，并依次制备出10-310-7稀释液。例如，若想制备10-6的稀释液，可取0.5 mL 10-5的稀释液。取样时，尽量只取悬液 ，倒入有4.5 mL无菌水的有盖试管中，摇匀，放在试管架上。,分离以尿素为氮源的微生物并计数,（3）涂布法分离细菌：在无菌条件下，分别取0.1 mL的稀释度为10-4和10-5的土壤稀释液（细菌悬液） ，分别加到装有全营养LB培养基和尿素培养基的培养皿（空白平板）中；再将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮

7、刀上火焰熄灭后，在酒精灯火焰旁打开培养皿，将前面已加入的土壤稀释液（细菌悬液）均匀涂布到整个平面上。,分离以尿素为氮源的微生物并计数,（4）将培养皿倒置摆放在37恒温箱中培养2448h，观察菌落数 。 观察实验结果 计数：统计培养基上菌落数,分离以尿素为氮源的微生物并计数,培养基上菌落数统计比较 1 与稀释度为10-5相比，培养基中的菌落数在 稀释度为10-4时 2在相同的稀释度的情况下，尿素培养基中的菌落数 于LB培养基中的菌落数，其原因是 。,多,少,讲练测P174,微生物的培养,微生物计数方法 活菌计数样品稀释度足够高时，培养基表面只生长1个菌落（来源于样品稀释液中的1个活菌）。根据平板

8、上菌落数，推测样品中大约含有多少活菌。结果一般用菌落数而不是活菌数表示。 显微观察计数红细胞计数板，观察数量，再根据浓度比例计算出菌体数量。,微生物的培养,血球（血细胞）计数板 计数室（中央大方格）的长、宽和高分别为： 1 mm 、1 mm和 0.1mm 计数室的容积：0.1mm3 （万分之一毫升） 取样：稀释一定倍数的菌液,25格X16格,16格X25格,（100个小格）,（80个小格）,微生物的培养,血细胞计数板的取样与计数方法,（一）25 格 16格 酵母细胞数/ml100小格内酵母细胞个数/100400104稀释倍数,计数顺序： 左上右上右下左下 压在格线的，只统计左线和上线,微生物的培养,（二）16格25格 酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80400104稀释倍数,（07北京）发酵法生产酒精后的废液（pH4.3）含有大量有机物，可用于培养、获得白地霉菌体，生产高蛋白饲料。培养、制取白地霉菌体的实验过程示意图如下。请据图分析回答问题： （1）实验过程中培养白地霉的培养基是_。培养基定量分装前，先调节_，分装后用棉塞封瓶口，最后_处理。,（1）废液上清液 pH 灭菌,（2）图中过程称为_，从甲到丁的培养过