骨标志物与骨质疏松#专业参考

1、骨标志物与骨质疏松,1,专业参考,骨质疏松的定义,哥本哈根（1990年）及香港（1993年）国际会议上提出的标准：以低骨量及骨组织显微结构退变为特征的一种全身性骨骼疾病，伴有骨脆性增加，易于发生骨折。1996年在阿姆斯特丹举行的国际会议把骨质疏松定义为：可引起骨质减少和骨折高危状态的骨骼系统疾病。,2,专业参考,二、骨质疏松症的诊断,3,专业参考,三、常用生化检查,1、骨形成生化标志物 2 、骨吸收生化标志物 3、甲状旁腺素,4,专业参考,骨形成生化标志物,骨特异性碱性磷酸酶 （BALP） 骨钙素（OC） 血清型原胶原延长肽,5,专业参考,1、骨形成生化标志物,骨特异性碱性磷酸酶 （BALP）

2、： 碱性磷酸酶在骨形成和矿化中起重要作用，其主要来源于肝脏（50%），骨（50%），两者的交叉反应约15-20%。 骨钙素（OC）： 是骨骼中含量最高的非胶原蛋白，由成骨细胞分泌，受1,25（OH）2D3调节。通过BGP的测定可以了解成骨细胞的动态，是骨更新的敏感指标,6,专业参考,血清型原胶原延长肽 血清I型前胶原羧基端前肽（PICP），是成骨细胞合成胶原时的中间产物，是反映成骨细胞活动状态的指标。血清I型前胶原氨基端前肽（PINP），在脯氨酸及羟脯氨酸中最为丰富。,7,专业参考,骨吸收标志物,尿羟脯氨酸 （HPr） 尿钙（Ca） 尿羟赖氨酸糖甙（GHyI） 骨涎蛋白（BSP） 骨I型胶原（

3、BIC）降解产物 半乳糖羟赖氨酸（Gal-HyI） 尿胶原吡啶交联（PYD）及脱氧胶原吡啶交联（D-PYD） 血I型胶原交联羧基末端肽（ICTP） I型胶原交联氨基末端肽（NTX） I型胶原交联（Crosslap）,8,专业参考,骨吸收生化标志物,尿羟脯氨酸 （HPr） 是反映骨更新的指标,受饮食影响较大。 尿钙 经过肌酐排泄校正过的空腹尿钙水平是反映代谢性骨病、钙磷代谢和相关疾病的重要手段，但易受干扰，很难确切反映骨吸收时释放的钙的量。,9,专业参考,尿羟赖氨酸糖甙（GHyI） 是反映骨吸收的指标，其尿中含量不如HPr高，但含量相对固定，不易受食物来源的影响，组织特异性高，老年性骨质疏松症可

4、能升高。,10,专业参考,骨涎蛋白（BSP） 是一种磷酸化的糖蛋白，占骨基质的非胶原成分的5%-10%，主要是由活性的成骨细胞和成牙质细胞产生。其水平反映了骨重吸收有关的主要指标。 骨I型胶原（BIC）降解产物 半乳糖羟赖氨酸（Gal-HyI）,11,专业参考,尿胶原吡啶交联（PYD）及脱氧胶原吡啶交联（D-PYD） 不受新合成胶原退变的影响，其排泄与饮食无关。PYD还在软骨、骨韧带和血管中发现，D-PYD几乎只见与骨中（及牙质）。为评价骨吸收的指标之一。 血I型胶原交联羧基末端肽（ICTP） 为骨重建过程中I型胶原被降解后释放入血的小片段。其含量和变化间接反映骨吸收状态。,12,专业参考,血

5、I型胶原交联氨基末端肽（INTP） 为骨重建过程中I型胶原被降解后释放入血的另一小片段。其含量和变化间接反映骨吸收状态。 I型胶原交联（Crosslap） 只存在于I型胶原C-末端肽，骨再建过程中I型胶原分解产生，与其它胶原无交叉反应。为骨代谢生化方面一个敏感、简便的检测手段。,13,专业参考,3、甲状旁腺素：,甲状旁腺素是由84个氨基酸残基组成的多肽。在甲状旁腺主细胞内合成，储存于细胞内，分泌到外周血中发挥生理作用。外周血PTH水平主要用4种类型测定，即：hPTHI 84；hPTHI34；中间分子肽段（如hPTH2854；hPTH3444；hPTH4468等）和羧基肽段（hPTH5384；h

6、PTH3984；hPTH3084等）。PTH184 ，PTH134均有完全的生物活性，但后者的半衰期较短，可能很快与受体结合或迅速从血中清除。,14,专业参考,甲状旁腺激素生理功能,1、PTH使肾小管重吸收磷的能力减弱，尿排出磷增加；使肾小管重吸收Ca 2+的能力增高，从而血钙水平增高。 2、促进肾脏合成维生素D的活性代谢物1，25 O H2 D3，从而间接地促进了肠吸收钙，提高血钙水平。 3、PTH加强骨细胞溶解骨钙的作用和破骨细胞吸收骨基质的作用，同时促进成骨细胞形成骨及矿化物的作用。,15,专业参考,四、骨矿密度测量(BMD),单光子吸收测定 利用骨组织对放射线的吸收与骨矿含量成正比的原

7、理，以放射性同位素为光源，测定人体四肢骨的骨矿含量。其精确性和重复性尚欠理想，对骨骼的改变反映较慢，需1-2年时间。,16,专业参考,双能X线吸收测定法 射线穿透身体之后，扫描系统将接受的信号传送到计算机进行数据处理，计算骨矿物质含量（BMC）、面积（AREA）、BMD。在我国各大城市已逐渐开展，缺点是对骨骼的改变反映较慢，需1-2年时间。,17,专业参考,定量CT 可以选择性地评价皮质骨和松质骨重量，但准确度及重复性稍差，受试者接受X线量较大，不易普及应用。,18,专业参考,五、罗氏现有诊断骨质疏松的生化指标,1、N-MID骨钙素( N-MIDOsteocalcin) 血清（或血浆）中骨钙素

8、的含量与各种骨代谢紊乱中的骨转换率有关。骨钙素含量异常多见于骨质疏松、原发性或继发性甲状旁腺功能亢进以及Paget病等疾病中。目前，骨钙素已被视为骨转换标志物，用于对上述疾病进行抗再吸收治疗效果的监测。完整的骨钙素（氨基,19,专业参考,酸149）及大的NMID片断（氨基酸143）均存在于血液中。完整的骨钙素在外周血中不稳定，羧基端4344间的氨基酸易被蛋白酶水解，裂解下来的NMID则稳定得多。,20,专业参考,ElecsysNMID骨钙素测定方法 采用了针对骨钙素N端片段和NMID片段上的决定簇的二株单克隆抗体。因此能够检测血清（或血浆）中稳定的NMID片段和尚未被分解的完整的骨钙素。与不稳

9、定的C端片段（氨基酸4349）没有关系，从而确保在常规实验室条件下获得稳定的检测结果。,21,专业参考,N-MID 骨钙素临床应用,1在骨转化率较高的代谢性骨病患者 如paget病，甲旁亢、氟骨病，可以出现血骨钙素水平升高。比传统的碱性磷酸酶测定更敏感，更具特异性。 2、甲状腺机能亢进症甲亢患者血中骨钙素水平升高，且与病情轻重程度呈正比。,22,专业参考,3、骨肿瘤、尿毒症、佝偻病、卵巢切除术后等血中骨钙素水平升高。 4、骨质疏松症患者因骨质丢失，血中骨钙素水平下降。 5、绝经后妇女及妊娠中期的孕妇血中骨钙素水平下降。,23,专业参考,检测范围：0.500300ng/ml,正常参考值： N-M

10、ID骨钙素 例数 5-95百分位 健康妇女 绝经期前20岁 108 11-43 绝经期后 102 15-46 骨质疏松患者 120 13-48 正常男人 18-29岁 183 24-70 30-50岁 179 14-42 51-70岁 125 14-46,24,专业参考,Elecsys N-MIDTM骨钙素的优势,测定完整的骨钙素由于稳定性的原因，常规实验室难以开展。电化学发光测定N-MID-骨钙素使用了一对抗体不仅可测定完整的分子也可以测定N-MID-骨钙素。 样本在冰箱内稳定性可以长达一周，使日常实验室可以测定骨钙素。而且具有简单、快速、全自动化和可以随机进样的优点。,25,专业参考,甲状

11、旁腺素Parathyroid hormone，PTH,有选择地检测完整的甲状旁腺素，可以直接了解甲状旁腺体的分泌活性。Elecsys PTH测定采用双抗体夹心法原理，生物素化的单抗与N端（1-37）结合，钌标记的单抗与C端（38-84）结合。对应的抗原决定簇氨基酸序列在26-32和55-64区域。,26,专业参考,PTH,在甲状旁腺中合成并分泌进入血液循环 与维生素D一起参与机体内钙的代谢/骨钙的磷酸化 通过小肠中钙的吸收及排泄参与血钙的调节 分泌受到血钙浓度的负反馈调节 甲状旁腺机能亢进导致PTH分泌增加/甲状旁腺肿瘤,27,专业参考,甲状旁腺素的主要临床应用,诊断甲状旁腺功能亢进和继发性甲

12、状旁腺功能亢进症。 与降钙素和维生素K等共同调节机体钙磷代谢. Paget骨病（变形性骨炎），临床上出现高血钙及PTH分泌增多。 诊断甲状旁腺功能低下症和甲状腺功能低下症。,28,专业参考,检测范围：1.205000pg/ml或0.127-530pmol/l 正常参考值：15-65pg/ml或1.6-6.9pmol/l,29,专业参考, 胶原特殊序列-CrossLaps(-CTx),骨基质的有机成分中，90%是由I型胶原组成的。在正常的骨代谢过程中,骨基质进行着有序的合成与分解。重要的I型胶原分解片段是C端肽（CTx）。在骨成熟过程中，C端肽的天冬氨酸转变成型（CTx）。此C端肽的同分异构体是

13、I型胶原降解所特异的。检测血清C端肽可用于监测骨质疏松症,30,专业参考,或其它骨疾病的抗吸收治疗，疗效可在几周后反应出来。由于采用了针对8AA八肽的两种单克隆抗体，ElecsysCrossLaps能特异检测交联的I型胶原同分异构体片段及含有此八肽双体的所有I型胶原分解片段（-CTx）,31,专业参考,Elecsys -crosslaps的特点,全自动检测 准确度高(6%) 全过程18分钟 灵敏度高0.02ng/ml=20pg/ml 批间同一性好(5%) 检测范围：0.01-6.0ng/ml,32,专业参考,Elecsys -crosslaps的优点,大大的缩短了检测时间 结果可靠 单样本检测

14、 可作为日常检测 精确的监测治疗效果 无需稀释 易于操作,33,专业参考,正常参考值,例数 均数 SD 均数+2SD ng/ml（pg/ml） ng/ml（pg/ml） ng/ml（pg/ml） 男性 30-50岁 165 0.300(300) 0.142(142) 0.584(584) 50-70岁 109 0.304(304) 0.200(200) 0.704(70 70岁 365 0.394(394) 0.230(230) 0.854(854) 女性 停经前 254 0.299(299) 0.137(137) 0.573(573) 停经后 429 0.556(566) 0.226(226

15、) 1.008(1008),34,专业参考,-crosslaps,I 型胶原的降解产物 骨吸收增加时,其水平增高 有助于指示对骨质疏松等疾病进行抗吸收治疗的有效性 在治疗后几周之后就可以检测出变化 检测范围：0.0106.00ng/ml 或106000pg/ml,35,专业参考,罗氏的主要竞争对手,DPC ：是骨吸收标志物的最大供应商，主要产品尿DPD（脱氧胶原吡啶交联），全自动分析，占骨吸收市场的40%。 Beckman：是骨形成标志物的最大供应商，主要产品BAP（骨特异性碱性磷酸酶），占骨形成检测市场的40%。该项目与肝脏来源的碱性磷酸酶的交叉反应约15-20%。,36,专业参考,Oste

16、x:骨转化单一产品，2001年报告销售额57亿美金，包括血、尿NTX和检测 Quidel Diagnostics (formerly Metra Biosystems):检测项目多（包括骨形成、骨吸收和骨转化标志物），但非自动检测。,37,专业参考,市场情况,骨吸收 DPC ： 尿DPD（脱氧胶原吡啶交联） Roche ： -CrossLaps NordicBioscience ：CrossLaps Ostex ： I型胶原交联氨基末端肽（NTX） 骨形成 Beckman： 骨碱性磷酸酶(BAP) Orion Diagnostics ：血清I型前胶原氨基端前肽（PINP）,38,专业参考,骨转化 （骨钙素） Roche Nichols DPC Di