液相色谱质谱联用的原理及应用

1、液相色谱-质谱联用仪，杨丽芳，农业分析测试中心，1024，主要内容，仪器结构和原理简介，实验演示，仪器结构，沃特世TQD液相色谱/三重串联四极杆质谱仪，氩，N2，质谱仪：质谱仪由以下部分组成：数据和电源系统，样品引入系统，离子源质量分析仪，检测接收器真空系统，样品引入系统，用于将分析样品引入离子源的装置，包括：直接样品引入，液相色谱离子源， 将分析样品的原子或分子电离成带电粒子(离子)并加速离子进入分析仪的装置。 电喷雾电离源、真空系统、离子源、质谱仪的质量分析器和检测器必须在高真空下工作，以减少背景干扰，避免不必要的离子分子反应。因此，质谱反应属于单分子分解反应。利用这一特性，通过液相色谱-

2、质谱的软电离方法可以得到化合物的准分子离子，从而得到分子量。真空单元由机械真空泵(前极低真空泵)、扩散泵或分子泵(高真空泵)组成，抽取离子源和分析仪的真空。只有当真空足够高时，离子才能从离子源到达接收器，如果真空不够高，灵敏度就低。质量分析仪：是质谱仪的一部分，根据质荷比分离离子。离子通过分析器后，根据不同的质荷比(M/Z)进行分离，相同的M/Z离子聚焦在一起形成质谱。实验室现有的质量分析器类型有：串联四极质谱仪(MS/MS):三重四极(QqQ)离子源、第一分析器、碰撞室、第二分析器接收器、MS1 MS2 Q1 q2 Q3、检测接收器、用于接收离子束电流的装置，包括电子倍增器、光电倍增器、微通

3、道板、数据和电源系统，它们放大和处理接收到的电信号、给出分析结果并控制质谱仪的运行。从几伏的低压到几千伏的高压。现有备用电源，原理简介，质谱原理，质谱分析是一种先将物质电离，根据离子的质荷比将其分离，然后测量各种离子光谱峰的强度，以达到分析目的的分析方法。以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标，制成的条形图是我们常用的质谱图。常用术语：质荷比：离子质量(相对原子量单位)与其电荷(电子电荷单位)之比，写成m/z。峰：质谱中的离子信号通常称为离子峰或简称峰。基础峰：在质谱中，在指定的质荷比范围内具有最高强度的离子峰称为基础峰。由离子丰度离子):检测器检测到的离子信号强度。离子的相

4、对丰度):其通过将质谱图中指定质荷比范围内最强峰(基础峰)的强度归一化为100而获得。标准质谱图以离子的相对丰度为纵坐标。光谱峰的离子丰度与物质的含量有关，因此它是质谱的基础。总离子电流图：在选定的质量范围内，所有离子强度总和与时间或扫描时间的关系图，也称为TIC图。质量色谱图：具有特定质量(或质荷比)的离子强度与时间的关系图。使用非挥发性化合物的液相色谱-质谱；极性化合物；热不稳定化合物的分析和测定：高分子量化合物(包括蛋白质、多肽、聚合物等)。)没有可比较和查询的商业光谱库，因此他们只能构建自己的库或分析自己的光谱。具体应用领域：生物化学：肽，蛋白质，寡核苷酸，糖环境化学：农药和农药残留分

5、析，有机污染物，土壤/食品/水分析食品科学：香料，添加剂，包装材料，蛋白质，致癌物合成化学：有机金属化合物，有机化合物有机化学：表面活性剂，染料，选择和优化液相色谱-质谱分析条件，1。界面选择：电喷雾电离适用于中等极性到强极性的化合物分子，特别是那些能在溶液中提前形成离子的化合物和能获得多个质子的大分子(如蛋白质)。APCI不适合多电荷的大分子，它的优势在于分析弱极性或中等极性的小分子。2.正负离子模式选择：选择的一般原则是：正离子模式：适用于碱性样品，可用醋酸或甲酸酸化。负离子模式：适用于酸性样品，可用氨或三乙胺碱化。3.流动相的选择常用的流动相有甲醇、乙腈、水及其不同比例的混合物，以及一些

6、挥发性盐的缓冲溶液，如甲酸铵和醋酸铵等。还可以加入挥发性酸和碱，如甲酸、乙酸和氨水来调节酸碱度。避免在LCMS界面使用非挥发性缓冲液和含磷、氯的缓冲液。含有钠和钾的成分必须是1摩尔/升.它含有甲酸(或乙酸)2。三氟乙酸0.5份。用三乙胺.它含有10- 5毫摩尔/升的醋酸铵。发送样品前，必须接触液相色谱条件，液相色谱条件可以基本分离，缓冲系统满足质谱要求。4。流速和色谱柱的选择。不加热ESI的最佳流速为150微升。当使用内径为4.6毫米的液相色谱柱时，要求在柱后分流。为了提高分析效率，通常使用100毫米的短柱，这可以为大规模定量分析节省大量时间。5.辅助气体流量和温度的选择，雾化气体对流出物的喷

7、雾形成有影响，干气对喷雾脱溶效果有影响，碰撞气体对二次质谱的产生有影响。操作中温度的选择和优化主要是指界面处的干气。一般来说，干燥气体的温度应比分析物的沸点高20左右。对于热不稳定的化合物，应选择较低的温度以避免明显的分解。当干气的温度和流量较大时，应考虑流动相的组成，当有机溶剂比例较高时，温度和流量可适当降低。、实验演示、启动前准备、流动相UPLC要求、有机溶剂要求、色谱纯度(进口名牌最好)、水或缓冲盐、流动相应使用超纯水(18.2M)， UPLC对当天配制的洗针液的要求：强洗针液使用甲醇/水或乙腈/水(有机相的比例高于梯度洗脱的强溶剂的比例)，弱洗针液使用纯水或含有少量甲醇或乙腈的水溶液(

8、有机相的比例低于梯度洗脱的初始比例)清洗柱塞密封垫圈。 溶液中的超纯水含有5%-10%的甲醇，特别建议：以上的溶剂或溶液需要用0.22米的滤膜过滤和脱气，并储存在干净的玻璃容器中以避免污染。仪器操作-启动。样品管理器四元溶剂管理器质谱仪的计算机电源通过各仪器设备的自检(绿灯始终亮)后，打开MassLynx软件设置0.1毫升/分钟流量平衡色谱柱和系统(有液体流出)，打开FLD(PDA)检测器的电源(打开光学检测器前不要打开FLD或PDA电源)、MassLynx结构的主窗口， 应用软件程序选择、仪器菜单、工具菜单、MassLynx主页面、关机/启动方法编辑、质谱方法编辑、调谐页面调谐页面、高效液相色谱方法编辑、关机/启动启用、质谱控制台/智能启动、主页面仪器菜单、编辑入口文件、选择质谱文件、打开项目、电离电压、锥体电压、提取锥体和射频透镜电压、离子源温度、渗透(5-)仰角温度。120，高效液相色谱(100-300升/分钟)，源温度。上升温度。120，300，气体流量，锥形气体，去溶剂气体，300，100