微生物标本的采集方法

1、微生物标本采集技术：临床微生物环境微生物、感染张瑞芳、正确采集和运送微生物标本是准确进行病原学诊断的前提。基本原则是：1 .及时采集微生物标本进行病原学检查；2.使用抗菌药物前收集标本；3.取样时严格执行无菌操作；4.取样后立即送去检查；5.棉签标本应使用运输介质；6.标本容器应该消毒。然而，不应该使用消毒剂。7.发送样品时，应注明来源和检验目的。8.与正常菌群混合的标本不应在肉汤中培养。如何提高细菌的阳性检出率？1.取样时间、取样方法、标本的质量和数量、标本的运输和保存、显微镜检查和合格标本的筛选、高质量、各种分离介质的培养环境，1。痰标本的收集。对于抗生素应用前收集的痰标本，必须在收集后1

2、2小时内立即在实验室进行痰管理。最早和最广泛使用的标本，也是最有争议的标本采集，需要专业的医务人员来指导，这使得下呼吸道感染病原体的诊断变得困难。收集细菌(包括防御细菌和诺卡氏菌、厌氧菌和分枝杆菌)、真菌(包括肺孢子菌)、病毒、支原体、衣原体和立克次体原虫，以及痰标本。早上起床后，患者自然咳痰，反复用清水或冷开水漱口，以清除口腔多余的细菌。有假牙的人应摘下假牙，轻咳，咳出口腔中的痰并扔掉，然后用力深深地咳嗽，从气管咳出深呼吸道中的痰，并直接吐入干净的无菌容器中，不含痰。通过体位引流等收集痰。直接从下呼吸道采集的多份样品经气管穿刺抽吸、胸壁针刺抽吸、支气管镜采样、支气管肺泡灌洗、支气管镜直接抽吸

3、、肺活检、人工气道抽吸。收集并吸痰标本：不能咳出痰或不同意作者或人工气道者戴无菌手套，无菌吸痰器分别与吸引器和无菌吸痰管连接。按照吸痰方法将痰吸入无菌吸痰器，盖好检查，直接经支气管镜吸痰。注意严格的无菌操作。第二，正确收集和清洁中段尿液样本，并确保尿液在膀胱中停留至少4小时。尿样最好保存在上午中间：患者睡前少喝水，早上起床后用肥皂水清洗会阴，女性用手分开大阴唇，男性翻包皮，仔细清洗，然后用水冲洗尿道口周围；开始排尿，排出前面的尿液，丢弃，不要停止，直接将10-20毫升中间的尿液排入专用无菌容器，并立即送去检查。容器内部是无菌的，所以打开容器盖后，应该拿在手里，不应该随意放置。记录取标本的时间，

4、确保取标本后1小时内送至临床实验室，并正确收集尿管外留置的尿液标本(靠近关节上端会阴处)，用注射器穿刺尿管，按照无菌操作方法吸收10毫升尿液。操作时，注意防止与消毒剂混合(建议采用三步消毒法：75%酒精-2%碘-75%酒精脱碘干燥)。注意不要从收集袋中收集尿液。第三，采集血液培养标本。1.手部清洁：使用快速干燥的手部消毒剂进行手部卫生，没有明显的污染。2.血培养瓶瓶口消毒：用75%酒精消毒一次。干燥60s 3后，静脉穿刺消毒：建议用75%酒精分三步对采集部位进行消毒，用2%碘酒从穿刺点开始画一个圆圈，直到消毒区域直径大于5cm，并摩擦穿刺皮肤两次。干燥后，75%的酒精用于脱碘采血前，应在血液培

5、养的瓶颈处贴上标签，包括患者的基本信息、采血时间和采血地点。注意不要将标签粘贴在培养瓶的条形码上，否则仪器将无法识别。血培养次数和采血时间，采血培养应尽可能在使用抗菌药物前进行，患者发烧越快越好，最好在发热高峰前1小时内或患者发冷发热开始时采集。10分钟内从不同部位采集23份外周血标本进行培养(有助于判断是污染还是感染，提高阳性率)。注意阳性报告的时间和阳性瓶子的数量。在血液培养后2-5天内，没有必要重复血液培养，因为血液中的感染细菌在治疗后2-5天不会立即消失。4。对于疑似中心静脉导管相关血流感染，1。保留导管2。保留一份外周静脉血和一份中心静脉导管血，不要在导管开始时丢弃血液。3.拔管：外

6、周静脉血4-2支，导管尖端5厘米(中心静脉导管血和外周静脉血培养时应记录转阳时间)，血管内导管尖端段标本采集和送样程序用75%酒精清洗导管周围皮肤，无菌移动导管，切去尖端5厘米，直接放入无菌试管或血盘。立即送去检查(不超过15分钟)，以防干燥。如果由于怀疑CRBSI而移除皮下静脉输注端口，则应定量培养端口和导管尖端的内容物。血液培养中的常见错误，冰箱瓶内培养瓶胶塞上的小盖未打开，直接穿刺抽血后凝血未及时混合。5.如何正确运送标本，1。传输介质的温度应该合适。2.原理：保持细菌的活力。3.血培养和脑脊液标本：应及时送检；不能及时送检的标本应放在培养箱或室温下，不得存放在冰箱中(病毒、霉菌和分枝杆

7、菌除外，4)。4.痰、尿等标本：如不能及时送检，可放入冰箱抑制细菌生长，但时间不应超过6小时。6.各种标本采集后应立即送检。如果不能立即送检，储存环境要求：储存环境样品的来源是4个冰箱痰、尿、粪便、活检组织、气枪冲洗液、导管、心包积液、脓液和伤口分泌物等。室温(25)-血液培养、脑脊液、泌尿生殖道、眼睛、耳朵、鼻子、喉咙、血管导管尖端、体液、厌氧菌培养样本。1970年之前，美国医院定期对空气和环境表面(如地板、墙壁和工作台面)进行培训。1970年，美国疾病预防控制中心和美国医院协会(AHA)主张停止常规的环境培养，因为医院感染的发生与空气或环境表面的微生物污染水平无关。对于环境表面或空气中微生

8、物含量的允许水平，也没有有意义的标准。从1970年到1975年，美国25%的医院减少了这种常规的环境培训工作这是一个持续的趋势。在四种情况下需要进行环境采样：第一，当环境中的宿主或媒介被认为在疾病传播中具有流行病学意义时，为疾病或感染的爆发提供依据；第二，在研究过程中进行适当的环境采样；第三，监测潜在的危险环境条件，确认有害化学或生物因素的存在，并验证危险因素的成功消除；第四，质量保证样本。1.物体表面取样，检测和评估物体表面的细菌总数。污染程度主要取决于消毒效果。物体表面取样涂片法：在被测物体表面放置一个5厘米的标准灭菌规格板，用浸有无菌生理盐水的棉签在规格板上来回均匀涂抹整个网格，然后旋转

9、棉签，切断手接触部分，将棉签放入盛有10毫升生理盐水的试管中。充分摇匀1分钟，用适量稀释，接种于普通营养琼脂平板上进行计数，然后根据平板上的菌落数得出物体表面每平方厘米的细菌数，并对物体表面进行采样-贴片法，贴片法：用无菌生理盐水浸泡5cm5cm的无菌滤纸，按照无菌操作方法，将其均匀附着于物体表面，取下1分钟，放入含25ml无菌生理盐水的试管中，充分摇匀1分钟。经过适当稀释后，将其接种在普通的营养琼脂平板上进行菌落计数，并获得制品表面每平方厘米的细菌数。2.灭菌物品表面的监测：1 .采样时间：消毒处理后4小时内采样。采样面积：采集面积为100平方厘米，所有表面均被采集；100平方厘米，取100

10、平方厘米。3.取样方法：将5厘米5厘米的标准灭菌规格板放在待检灭菌物品表面，将带有相应中和剂的无菌洗脱液(5ml)的棉签在规格板中横向和纵向均匀擦拭5次，然后旋转取样棉签，切掉手接触部分，将棉签放入望京洗脱液中，立即送检。小物体表面的计算结果用cfu/件表示。1.班级和班级环境：5 cfu/cm2；班级和班级环境：10 cfu/cm2；GB 15982-2012医院消毒卫生标准4 . 1 . 1；3.手消毒效果监测；1.采样时间：在接触病人和从事医疗活动前或消毒后立即采样；2.取样区域和方法(棉签使用含有相应中和剂的无菌洗脱液(5ml)的棉签来监测手指和手的标准范围。1.外科手消毒：5cfu/

11、cm2，卫生手消毒：10cfu/cm2 GB15982-2012医院消毒卫生标准4.2。四是空气消毒效果监测。1.采样时间：消毒处理后，手术前采样2次。取样方法：根据面积确定数量，打开并盖住盘体边缘3。采样高度：离地面1.5米(80-150)。分布方式：室内30区，在内、中、外对角线上设置三个点；室内面积为30，有4个角落和5个中心点，所有这些都离墙1米。5.收集方法：从外向内逐一收集，避免通过培养皿从内向外收集。1.监控时间：每季度一次。2.类环境，监控标准：洁净手术部(室)等洁净场所。空气中细菌菌落总数的要求应符合G B50333-2013医院洁净手术部建筑技术规范3.0.2-2 3环境监

12、测与检测标准：洁净手术部(室)、产房和重症监护病房。空气中细菌菌落总数4CFU(15分钟直径9厘米的平板)4。甲类环境及监测标准：儿科病房、母婴室、妇产科检查室、流产室、治疗室、换药室、消毒供应中心、血液透析中心(室)、急诊室、化验室、各类普通病房、传染病门诊及其病房，空气中细菌菌落总数4CFU(5分钟直径9厘米)G B50333-2013医院洁净手术部建筑技术规范3.0.2-2，甲类环境：洁净手术室，一类，二类，二类， 二级作业区0.2 cfu/30 min，二级作业区0.4 cfu/30 min，二级作业区0.75 cfu/30 min，二级作业区1.5 cfu/30 min，二级作业区2

13、 cfu/30 min，二级作业区2 cfu/30 min。 30分钟。90碟(10000级)6 cfu/30分钟。五号手术室90盘。5.消毒剂监测。1.取样方法：按照无菌操作法的：10毫升培养基，用无菌注射器吸取1毫升消毒剂；0.2.消毒剂标准：使用中的消毒灭菌消毒剂：使用中的皮肤和粘膜无菌生长消毒剂：10毫升使用中的其他消毒剂的细菌污染：100毫升，消毒剂监测标准范围：1。使用中的消毒剂：无菌生长2。使用中的皮肤和粘膜消毒剂：10cfu/ml 3。其他使用中的消毒剂：100cfu/ml。六.紫外线强调监测方法。1.每日记录：使用后，累计消毒时间。如果使用时间超过1000小时，应加强监测或建

14、立紫外线消毒使用登记簿。灯管应每周用75%酒精擦拭并记录。2.辐照应力：对于普通30W直管紫外灯，新灯管的辐照强度为90Wcm2，合格，符合GB19258的要求；使用中的紫外线灯照射强度为70Wcm2，合格；3.监测重点：每六个月监测一次，监测前用75%酒精清洗灯管表面，开灯，稳定5分钟后，将强度监测卡放在灯管下1米的垂直位置，正面朝上，照射1分钟，取出卡片，阅读。注意事项：做好你自己的保护，尤其是你的眼睛；测试卡应保持在封闭的光线下。七。高危医疗器械、手术器械、穿刺针等。无菌生长GB15982-2012医院消毒卫生标准4.3不建议医院定期对无菌物品进行无菌检查。中等风险医疗设备：呼吸机管道、

15、口腔表面等。20 cfu/件，季度监测未检测到病原微生物，IX。低风险医疗设备、听诊器、血压计袖带等。20 cfu/片，季度监测未检出病原微生物；10.内窥镜、胃镜、肠镜等消毒。20 cfu/件WS507-2016软内窥镜清洗消毒技术规范7.3季度监测；11.透析用水，细菌：100cfu/ml每月监测内毒素：0.25EU/ml季度监测YY0572-2015血液透析及相关处理水4.1，XII，透析液，细菌：100cfu/ml每月监测内毒素：0.5EU/ml季度监测YY0598-2015血液透析及相关处理水53.54，季度卫生监测介质统计，XIII净化系统应持续运行，直至清洁和消毒工作完成。所需的

16、最小自净时间为：一级：15分钟，二级：25分钟，三级：30分钟，四级：40分钟。用于环境管理和压差控制的洁净手术室在运行过程中应保持正压。清洁区域和非清洁区域之间的静压差为10pa。高洁净室和低洁净室应保持正压，同时打开洁净手术室(包括缓冲室)的两扇门。在操作过程中，应关闭门：为了避免在打开和关闭门时经常出现气流污染，在操作过程中，不应打开通向外部走廊的门。手术室应根据专业相对固定，所有物品的摆放位置应尽量减少进出手术室的次数。洁净、无尘、无污染的物品不准进入手术室。清洁区内的物品必须经过清洁和消毒后才能进入清洁区。衣物、床垫和清洁消毒工具等物品的材料选择应遵循减少粉尘产生的原则。每天手术前后，手术室墙壁、地面光滑，手术室内各种物体表面湿擦干净并消毒；手术期间，严格控制血液和体液污染的扩散(医疗废物的封闭收集和运输)。一旦污染被局部消毒和清洗后，使用覆盖消毒法：用布或浸有消毒剂的多层纸巾(建议不要流动)覆盖污物，或用浸有消毒剂的布或纸巾(建议不要流动)从污染物周围2m处擦拭。消毒时间为30分钟后，不同区域和不同手术室的清洗消毒工具将被布或纸巾丢弃。医院的空气净化管理规定了空气净化技术，维护要求定期检查空气处理装置和新鲜空气装置，以保持其清洁。新风机组粗滤网应每2天清洗一次；粗过滤器应为r当发现污染和堵塞时，建议每年更换一次末端高效过滤器。当阻力超过160pa的设计初始阻力或已使