微生物的分离纯化与接种技术

1、实验6微生物的分离纯化及接种技术，1，实验目的，1。掌握上焊接种工具的使用。2.倾斜培养基，掌握液体培养基接种方法3。掌握逆向技术4。掌握各种分离株的技术，第二，实验原理，接种是将微生物转移到微生物实验及科学研究的最基本操作技术之一，接种方法包括倾斜接种、液体接种、平板接种、穿刺接种等。在接种过程中，要严格无菌操作，以免纯种被杂菌污染。混合微生物群体中只含有一种或一株微生物的过程称为微生物的分离和纯化。平板分离法通常用于微生物的分离和纯化。微生物在固体培养基中生长的单一菌落通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此，可以选择单一菌落，得到纯粹的培养。取得单菌落后，可以使用稀释版权法、下划线分离法等

2、。三、实验器材及试剂、接种环、酒井灯、试管、移动管、培养皿、铜版棒、营养阵地培养基、营养肉汤、生理盐水、大肠杆菌液。4，实验程序，1。接种环的使用接种环由铂金丝或细电炉丝制成，使用前后都要用酒精等外盐严格灭菌。接种环的灭菌方法，4，实验阶段，2。斜面接种(每人2个试管斜面，1个斜面，1个液体，1个液体)菌管(液体菌种必须先摇动的情况下)和空白斜面培养机在左手拇指和其他四个手指之间，菌管在上方，培养机在下方右手拿着接种环火焰灭菌。用右手手掌、小指和无名指同时拿起两个喷嘴的棉塞，快速火焰灭菌两个试管入口。在火焰附近，用灭菌的接种环从菌管中挑选少量的菌泰或一环菌液，延伸到要接种的培养器官斜面下，划出

3、“Z”字形的线。接种时不要撕培养基表面，埋在细菌里的接种环进入试管时不要碰试管入口。接种后燃烧喷嘴，插入棉塞。燃烧接种环，放回原位。将接种的试管斜面放入37培养箱中培养24h，然后观察结果。倾斜接种图，3 .液体接种(每人接种两种液体试管，一种斜面连接液体，一种液体连接液体)的工作方式与以前相同，但为了防止培养基泄漏，试管入口向上倾斜。连接菌体后，将接种环和管内壁摩擦几次，冲洗环中的菌体，接种后堵住棉塞，将试管轻拍至手掌，使菌体完全分散。将接种的试管斜面放入37培养箱中培养24h，然后观察结果。4，实验阶段，4，实验阶段，4。见逆板(每组6-8个营养琼脂板)(1)熔融培养基)。(2)皮瓣：培养

4、基冷却50左右(用手抓住瓶子加热)，拿着无菌培养皿，每盘1520毫升培养基(自然复盖整个底部)，凝固后准备。(。4，实验阶段，4，实验阶段，5 (1)连续下划线分离法(每人一个营养琼脂板)a .灭菌接种环，冷却后取适量混合菌液。b .在中间曲面上连续绘制“锯齿”线，直到绘制了整个平板曲面。4，实验阶段，连续划线法，4，实验阶段，(2)古濑车站划线分离法(每人营养一千盘)a .灭菌接种环。b .冷却后，蘸一点混合菌液，在平板培养基表面A画线。c .再次灭菌接种环。d .冷却后从a到b绘制细菌。e .接种环再次灭菌。f .从b绘制到c。g .再灭菌接种环。h .从c到d绘制。I .将扁平的碗倒放在

5、37培养箱中，培养24h，然后观察结果。，4，实验阶段，分割交叉方法，第一古濑车站下划线，消毒接种环，第二古濑车站下划线，消毒接种环，第三古濑车站下划线，(2) 10-1，10-2，10-3，10-4，3个营养琼脂培养基分别为10-2，10-3，10，(3)稀释细菌液体。取一袋无菌移动管，按照无菌操作法从10-1试管中吸出1mL菌液。再接一个无菌移液管，从10-1吹几次，搅拌后将1毫升的菌液吸入10-2管。另外接受一个无菌移动管，在10-2中吹几次，搅拌后将1毫升的菌液吸入10-3管。另外接受一个无菌移动管，在10-3中吹几次，搅拌后将1毫升的菌液吸入10-4管。(移动管不能混用。)，4，实验

6、阶段，4，实验阶段，(4)无菌移行管，分别吸收了10-2，10-3，10-4的稀释度，也将菌液各吸收0.1毫升，放入该编号的营养琼脂板中。(移动管不能混用。(5)用无菌铜版棒均匀涂抹。(要涂不同稀释度菌液，必须使用不同的涂布棒)(6)等菌液被培养基吸收后，将板翻转到37培养箱中，培养24h，然后观察结果。4，实验阶段，4，实验阶段，4，实验阶段，7。稀释法(每组稀释10-2，10-3，10-4稀释菌液中分别加入1毫升菌液，倒入培养基分离)(1)电炉加热，融化其他60毫升营养琼脂培养基，将融化培养基放入45水浴，等待保温。(2) 10-1，10-2，10-3，10-4，3块无菌公盘，分别10-2

7、，10-3，10(3)稀释菌液。(。取一袋无菌移动管，按照无菌操作法从10-1试管中吸出1mL菌液。再接一个无菌移液管，从10-1吹几次，搅拌后将1毫升的菌液吸入10-2管。另外接受一个无菌移动管，在10-2中吹几次，搅拌后将1毫升的菌液吸入10-3管。另外接受一个无菌移动管，在10-3中吹几次，搅拌后将1毫升的菌液吸入10-4管。4，实验阶段，(4)无菌移行管，分别将10-2，10-3，10-4的稀释度也从菌液中吸出1毫升，放入该号码的空白版。(5)将45水浴保温营养琼脂培养基倒入胃板，每板倒入1520毫升培养基，立即用平转充分混合菌液和培养基，盖上平板盖。(6)培养基凝固后，将平板翻转到37培养箱中，培养24h，然后观察结果。5，注意事项，1。接种环在接种前后都要消毒。2.接种环消毒后，在菌管上涂上菌种之前，要靠在试管内壁，冷却铂丝的温度，防止烫伤。3.用接种环在培养基表面画线分离时，不要太用力，以免培养基撕裂。培养皿必须反过来培养。5.混合菌液和培养