实验三、血清、红细胞制备

1、实验3。实验动物的采血方法，动物血清和红细胞的制备方法导师：程艳，实验目的，1。学习实验动物不同部位的无菌采血方法；2.学习动物血清和红细胞的制备；3.观察家兔和豚鼠的免疫器官。根据实验原理，免疫系统由免疫器官、免疫组织、免疫细胞和免疫分子组成。免疫细胞1。先天免疫的组成细胞：吞噬细胞、淋巴器官、树突细胞、自然杀伤细胞、NKT细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞；2.适应性免疫反应细胞：T细胞、B细胞免疫分子1。膜分子：TCR，BCR，镉分子，粘附分子，MHC分子，细胞因子受体。2.免疫球蛋白、补体和细胞因子。根据实验原理，血液是一种结缔组织。血液系统是各种重要免疫细胞和免疫分子的载体，也是各种免

2、疫事件发生的场所。成分：1 .血浆蛋白(白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原)、脂蛋白、无机盐、氧等成分、激素、酶、抗体细胞代谢产物等。2.血细胞、红细胞、白细胞(有颗粒的粒细胞：中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，无颗粒的粒细胞：单核细胞和淋巴细胞)，实验原理，在实验研究中，需要采集实验动物的血液进行检查或分析，因此需要掌握正确的采血、分离和保存操作技术。采血方法的选择主要取决于实验目的和动物种类所需的血容量。当需要更多的血容量时，可以使用能够刺穿血容量较小的组织的血液进行静脉采血(原则：当静脉采血需要重复多次时，应从远离心脏端开始，以避免栓塞和影响整个静脉)。实验原理现在将由动物和部分介绍。小鼠

3、和大鼠的采血方法：断尾、尾静脉穿刺、眶后静脉丛、眼球摘出、断头、颈(股)动静脉采血方法：豚鼠的耳缘切口、心脏、股动脉、足背中静脉、家兔的采血方法：耳静脉、中央耳动脉、心脏、后肢皮下静脉、股动脉和颈动脉采血方法：鸡的采血方法：翼静脉采血、心脏采血、颈静脉采血、实验原理、 兔血采集方法(1)耳静脉采血：将兔子固定，将耳静脉皮肤上的毛发拔掉或剪掉，用75%酒精消毒，用左手食指和中指夹住靠近心端的静脉，使其血管艳丽，拇指和小指夹住耳朵边缘部分，将左手无名指和小指放在耳朵下面作为垫。 右手握住注射器，使针头从静脉末端刺入，沿血管方向刺入心脏末端约1-1.5厘米，放松左手拇指和食指对血管的压力，用右手慢慢

4、吸住注射器。如果注射阻力较大，则意味着针头没有穿透静脉，因此应调整针头或再次穿刺；或者，刀片可以在血管上切开一个小孔，让血液自然流出并滴入容器。采血后，用干棉球按压止血。(2)家兔心脏穿刺采血：将家兔固定在背部位置，在左胸第24根肋骨之间剪一根头发，用75%酒精和碘伏消毒。然后，用510毫升注射器，在胸骨左缘3-4个肋间最明显的心尖搏动点进行垂直穿刺。注意事项如下：(1)动作要迅速，缩短留针时间，防止血液凝固；如果针已经进入心脏但不能出血，应该将针退回一点。针不应在胸腔内左右摆动，以免损伤心、肺，实验原理，豚鼠采血方法(1)取足背中静脉的血液固定动物，用酒精消毒动物的足背，找出足背中静脉，然后

5、用左手拇指和食指捏住豚鼠的趾端，用右手的注射针刺入静脉。采血后，用纱布或脱脂棉止血采集实验动物的血液，制备血清，制备血清：2ml不含抗凝剂的无菌静脉血，37自然凝固，在血清开始出现后，将其放入冰箱中12小时或24小时，离心分离血清(3000转/分，5-10分钟)，所得上清液为血清，因此小心吸出上清液(小心不要吸出细胞成分)。血浆制备：加入抗凝剂(抗凝剂：血液=1: 9)，取2ml无菌静脉血(注射器用抗凝剂冲洗)，将血液加入装有抗凝剂的离心管中，倒置混合，离心(3000转/分，5-10分钟)，取上清液作为血浆。注意：每50毫升血清加入1毫升硫柳汞水溶液可以保存血清。红细胞和悬液的制备标准红细胞的

6、制备：取1毫升全血，加入23毫升等渗盐水，摇匀，离心沉淀，弃去上清液，然后加入23毫升生理盐水洗涤三次，离心除去上清液，其余为血细胞比容。红细胞悬液的制备：2个红细胞悬液：包装好的红细胞2滴新鲜等渗盐水4毫升5个红细胞悬液：包装好的红细胞5滴新鲜等渗盐水4毫升10个红细胞悬液：包装好的红细胞5滴新鲜等渗盐水2毫升注意：标准红细胞悬液应在使用前立即制备并储存3天，并可与柠檬酸葡萄糖溶液(ACD)一起储存1周。实验动物：豚鼠和兔子；实验试剂：血液抗凝剂(133，360，500 u肝素钠注射液)；生理盐水实验设备：5毫升注射器、一次性离心管(5、10、15毫升规格)、普通吸管、尖吸管、1毫升刻度吸管和75%酒精棉球卧式离心机；实验步骤。1.用75酒精棉球对采血部位的皮肤进行消毒。2.用5ml注射器抽取豚鼠或家兔静脉血。豚鼠2ml采血方法：足背中静脉采血，家兔采血：耳静脉采血。3.制备血清和红细胞(如上述过程)。注意事项：1 .给