标准解读
《GB/T 37966-2019 纳米技术 氧化铁纳米颗粒类过氧化物酶活性测量方法》是一项国家标准,旨在提供一种科学的方法来测定氧化铁纳米颗粒的类过氧化物酶活性。该标准详细规定了实验所需的材料、试剂、仪器设备以及具体的测试步骤,适用于科研机构、高校及相关企业对氧化铁纳米颗粒类过氧化物酶活性进行准确测量。
根据此标准,首先需要准备一定浓度的氧化铁纳米颗粒溶液作为待测样品,并选择合适的底物与显色剂,通过控制反应条件如pH值、温度等,让氧化铁纳米颗粒催化底物与过氧化氢之间的反应。反应后生成的颜色变化可通过分光光度计进行定量分析,从而间接反映出氧化铁纳米颗粒的类过氧化物酶活性水平。
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- 2019-08-30 颁布
- 2019-08-30 实施
文档简介
犐犆犛11.100
犆04
???????????
犌犅/犜37966—2019
????????????????
???????
犖犪狀狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵犻犲狊—犕犲犪狊狌狉犲犿犲狀狋犿犲狋犺狅犱犳狅狉狆犲狉狅狓犻犱犪狊犲犾犻犽犲犪犮狋犻狏犻狋狔狅犳
犻狉狅狀狅狓犻犱犲狀犪狀狅狆犪狉狋犻犮犾犲狊
20190830??20190830??
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??Ⅰ…………………………
??Ⅱ…………………………
1??
1………………………
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6……………
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6………………………
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??C(?????)??????????????????????????11………………
????15……………………
犌犅/犜37966—2019
??
?????GB/T1.1—2009???????。
???????????。
??????????????????(SAC/TC279)??。
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???????。
????????:??、??、???、???、???、???、??、???、???、??、???、
???、???。
Ⅰ
犌犅/犜37966—2019
??
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??????????、?????、?????、???????,???????????????
??????????,???????????????,??????????????????
?????。??,???????????????,40??????,???????(Fe3O4)、
??????(?Fe2O3)、?????(Co3O4)、???(Cu2O)、????(MnFe2O4)、???(FeS)、?
??(CeO2)、????(PB)、?(Au)、?(Pt)、???、???、?????,???????????
??????????,????Fe、Co、Cu、Mn??????Fenton????????????
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????????????????????,???????????,???、????????
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?????????????????,????、????????????????????
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Ⅱ
犌犅/犜37966—2019
????????????????
???????
1??
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?????????????????(??????、??????)???????????
????????。?????????????????????。
2???????
??????????????????。??????????,????????????
?。???????????,?????(????????)??????。
GB/T19267.2??????????????2??:?????????
JJG178??、??、
????????????
3?????、
???
3.1?????
?????????????。
3.1.1
????狀犪狀狅狆犪狉狋犻犮犾犲狊
????????????????????。
[GB/T32269—2015,??4.1]
3.1.2
???犲狀狕狔犿犲犪犮狋犻狏犻狋狔
????????????。
?1:????????????????????????????????。
?2:????????????????????????Fe?????????????????????
?,???U·
mg
-1。
?3:?????:?????????????????????,???????,?????????(μmol)
????????????(IU),??U。1U=1μmol·min-1。
3.2???
???????????。
DMSO:?????(Dimethylsulfoxide)
H2O2:????(Hydrogenperoxide)
NPs:????(Nanoparticles)
SOP:??????(StandardOperationProcedure)
TMB:3,3′,5,5′??????(3,3′,5,5′Tetramethylbenzidine)
1
犌犅/犜37966—2019
4??
??1??,??3,3′,5,5′??????(TMB)??????,?37℃?????(pH=3.6)
????????????,TMB?H2O2??????TMB???,?????650nm????
?????。?37℃、650nm??????????????????,????????????
?????TMB???????,???????????????????(犫nano)。?犫nano???
???????????????,?????????????????????????(犪nano),
????????????????。
?1?????
5?????
5.1?????
5.1.1??
????????????、???、
pH
?、?????、??、?????、???、???、??
??。????????A。
5.1.2?????
???????????650nm,??“?????”。??????±0.005,?????(650±
1)nm,????≤2nm。???????????????GB/T19267.2???。
5.1.3???
??????????,??±1.5%,???±0.1℃。
5.1.4狆犎?
????????
pH
,??????0.01?,???±0.01。
5.1.5?????
????????,?????????(37±1)℃。
5.1.6??
????????,?????0.01mg,???(????)≤0.015mg(5g)。
2
犌犅/犜37966—2019
5.1.7?????
200μL、1000μL?????。
5.1.8???
10mL、100mL???。
5.1.9???
???(10.00±0.05)mm。
5.2??
??????1。
?1??
????????/???
??
?????(???)???
????(???)???
3,3′,5,5′??????(???)TMB
30%H2O2???
??
????
???<2μS·cm-1,pH6~7
?
?????DMSO
????
????????(GBW08616)?
???????(GBW(E)130070)?
?????(GBW(E)130071)?
6????
6.1????
???????????????100%??。???????????100%[??狔(%)],?
????:犉content=100/狔,???????????????????。
??????????GB/T19267.2???。
???????,????????±0.5%。
???????????
pH
???。??,?????
pH
????????
pH
?。???
????????????,??????????????????????????
pH
?。
6.2??1
?????0.164g,???8mL?,???10mL????,?????????0.2mol·L-1
??????。
????1.144mL,???80mL?,???100mL????,?????????0.2mol·L-1
3
犌犅/犜37966—2019
??????。
??????????
pH
,????0.2mol·L-1???????0.2mol·L-1??????
??
pH
?3.6(37℃),?0.2mol·L-1,pH=3.6????/??????。???2℃~8℃???
?3??。
6.3??2
??TMB0.10g??8mLDMSO?????????,???10mL????,?DMSO?
??????10g·L-1TMB?DMSO??。???2℃~8℃????,????1??,???
??。??????????,??????,??????,?????????????????
????????。???????????,?????。
6.4???????
???????????????????????。
7????
7.1????
????????2。
?2????
????
??(37±1)℃
????(650±1)nm
??(10.00±0.05)mm
????(60±10)s
????≥300s
???≥11
7.2????
7.2.1???????,
??????????,?????????。
7.2.2???????,
????????,??37℃???????????。
7.2.3????????1、
??????????、??2?30%H2O2?????????37℃。
7.2.4???????3?????????????。
?3????
????
2.00mL
??1
???????,?????37℃
0.100mL
??????????
???????,????
4
犌犅/犜37966—2019
?3(?)
????
0.100mL
??2
???????,????,??60s。??????,????????????37℃
0.200mL
30%H2O2
???????,????,????????????,???????????(650nm)??
7.2.5????????2。
?2?????
7.3???????
???????1:?????30%H2O2??,?????7.2。
???????2:???????????????,?????7.2。
?:???3?,??3?????????。
7.4????????????????
????B。
5
犌犅/犜37966—2019
8??????
8.1??
?????????????????????????(min-1)。????????,??(1)
?????????????????。
犫nano=
犞
ε×犾×Δ
犃
Δ狋
…………(1)
??:
犫nano———???????????????,??????(IU?U);
犞———???????,?????(μL);
ε
———TMB??????????,???39000mol-1·L·cm-1;
犾———?????,?????(cm);
Δ犃/Δ狋———????????????????????,?????(min-1)。
?犫nano??????????????????,????????????????????
????。
??(2)?????????????????。
犪nano=犫nano/犿Fe…………(2)
??:
犪nano———???????????????,?????????(U·
mg
-1);
犿Fe———??????????????,?????(
mg
)。
?:????????C。
8.2????
8.2.1???,
?????????????????。
8.2.2??????????、
???,????????????,?????????。
8.2.3???,
????????。
9??
???????????????:
a)?????:??、???;
b)????:??????、???;
c)????(?????????);
d)????;
e)??????;
f)????;
g)????:????、????、????、????、???。
6
犌犅/犜37966—2019
??犃
(?????)
????
犃.1???????
?????,?????SOP???JJG178?????????????????,???A.1。
?犃.1???????
????????
?????
□??□??□??□???□??24h??
□??□??□????□?????□?????
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????:□??□???????、??????
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??????
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□?????????
?????
?????:□?????□????
□?????□UPS
????:□???、???□????
□??????????
???????????????????????????。
犃.2?????
?????,?????SOP??????????,???A.2。
?犃.2?????
????????
?????□??□????□???????????
??□??????????????
??????
??:□??????
????:□???????????
??????
□???????????????????
?????????:□???????????????????
?????
??:□????
????:□???????
7
犌犅/犜37966—2019
?????????????????????????。
犃.3狆犎???
?????,?????SOP???
pH
?????,???A.3。
?犃.3狆犎???
????????
?????□??□??□??□??□????
??
????:□?
pH
?????
??:□?
pH
?????□????□????
?????:□??□??□??
?????:□??□???□??
pH
????:□???□???
??????
?????????:
?????????????????
??
pH
????????
?????
???:□???????????:????
???:□???????????:????
□????
?????????????????
pH
??????。
犃.4???????
?????,?????SOP????????????,???A.4。
?犃.4???????
????????
?????□??□??□????
??□????????
??????□??□????□????
??????□????□?????
?????
□????????□????????
□????□??????
???????????????????????????。
犃.5????
?????,?????SOP?????????,???A.5。
8
犌犅/犜37966—2019
?犃.5????
????????
?????□??□??□?????□?????
????□??□????
??
□???????????????????
?????:□??????
?????:□??????
?????□??????□????
????????????????????????。
犃.6?????
?????,?????SOP??????????,???A.6。
?犃.6?????
????????
?????□????□????
??????□??????□??????
?????□??????□????
?????????????????????????。
9
犌犅/犜37966—2019
??犅
(?????)
????????????????
?????????????????????????。
??????1000
μg
·mL-1?????????100μL、200μL、400μL、600μL、800μL,??
???????,???????,?????????,???
pH
??5??,???50mL,??
????????????510nm?????。
??????????Fe???????????犆犃????,??(B.1):
犃=0.19956犆+0.06171…………(B.1)
??:
犆———???50mL?Fe?????,????????(
μg
·mL-1);
犃———???510nm?????。
?????100μL,????Fe????????????????,???50mL,????
??????????,???????????????,????????100μL??????
??????。
?:?????????????????,???????????????????????。
01
犌犅/犜37966—2019
??犆
(?????)
??????????????????????????
犆.1?????????????????
???????(γFe2O3)???????0.046mg·mL-1,??????狀=3,??????
????TMB?????????????,??C.1。
?犆.1犜犕犅????????????(??????)
????????,??????,??C.1。
?犆.1??????
?????????????????
Δ犃/Δ狋(min-1)0.15730.15870.1589
????6.31×10-41.51×10-31.23×10-3
????????????、犿Fe=犆Fe×犞Fe=0.046mg·mL-1×0.1mL=4.6×10-3
mg
、犞=
2400μL、犾=1.000cm、ε=39000mol
-1·L·cm-1???(
C.1)?(C.2):
犫nano=
犞
ε×犾×Δ
犃
Δ狋
…………(C.1)
犪nano=犫nano/犿Fe…………(C.2)
?????????C.2:
?犆.2犪狀犪狀狅????
????????????????????????
犪nano
(??:U·
mg
-1)
2.0982.1172.1192.1110.012
犆.2??????
犆.2.1??????犃???
????????????,?γFe2O3??????????????????,?????
11
犌犅/犜37966—2019
犪nano,??C.3。
?犆.3犪狀犪狀狅????
????
犪nano(???U·
mg
-1)
????????????????????
Day1
Ⅰ2.1332.1011.7811.919
Ⅱ2.3542.0902.0612.215
Ⅲ2.3332.0212.101
—
Day2
Ⅳ1.8501.9731.8231.991
Ⅴ2.0211.8981.9061.877
Ⅵ2.0771.9701.8791.778
Day3
Ⅶ2.0981.9252.1172.119
Ⅷ1.9652.2131.91112.031
Ⅸ2.1331.8662.0982.063
?:??“—”??????????????。
??C.3?????(C.3),??γFe2O3??????????????????珔犪nano?
2.020U·
mg
-1。
珔
犪nano=∑
狀
犻=1犪
犻
狀
…………(C.3)
???????????(C.4),?犛(犪犻)?0.142U·
mg
-1。
犛(犪犻)=
∑
狀
犻=1(
犪犻-珔犪nano)
2
狀-1槡
…………(C.4)
??(C.5)?,A????????0.024U·
mg
-1。
犝A珔犪nano()=犛珔犪()=犛(
犪犻)
槡狀
…………(C.5)
犆.2.2??????犅???
犆.2.2.1犅?????
??犪nano????(C.1)??(C.2),???B??????????:ε、犾、犞、Δ犃/Δ狋、犿Fe。??,
TMB??????????ε???,???????。?B?????????(C.6)??:
犝B(犪nano)
犪nano
=
犝C犾()
犾
[]
2
+
犝C犞()
犞
[]
2
+
犝C
Δ犃
Δ狋
()
Δ犃
Δ狋
熿
燀
燄
燅
2
+
犝C犿Fe()
犿Fe
[]
槡
2
………(C.6)
???????????????。
犆.2.2.2?????犾
??????????????,????????????:犾=1.000cm,犝=0.003cm,犽=2。
21
犌犅/犜37966—2019
??(C.7)??,?犾????????0.0015。
犝C(犾)
犾
=
犝
犽×犾
…………(C.7)
犆.2.2.3?????????犞
????????????。
????????????、??2、30%H2O2????????100μL、100μL、200μL,??
???1?????(2000μL),???????????????。??犞??????????
???????(??100μL~1000μL),????????????。??(C.8)??犞????
????0.002。
犝C(犞1000μL)
犞
=0.002…………(C.8)
犆.2.2.4????????????????????Δ犃/Δ狋
??????????????。
????????????????,????????????????:犝=0.008,犽=2。?
犝C(犃)=0.004。
???,Δ犃/Δ狋???????:?????????????????、?????????
??。
??????????,???????????????????(C.9)?:
Δ犃
Δ狋=
-2犃1-犃1.5+犃2.5+2犃3
5
…………(C.9)
??,???????????????????????(C.10)?:
犝C(Δ犃)=6
5犝C
犃()=0.0048…………(C.10)
?????????????????(C.11):
犛b=犫
1-狉
2
狉
2(
狀-2)槡
…………(C.11)
??:
犫———?????????;
狉———?????????。
???犛b??,?????。?Δ犃/Δ狋??????????(C.12)??:
犝C
Δ犃
Δ狋
()
Δ犃
Δ狋
=0.0048
Δ犃
Δ狋
…………(C.12)
犆.2.2.5??????????????犿犉犲
???(C.13)
犿Fe=犞Fe×犆Fe…………(C.13)
??犿Fe????????(C.14)?:
犝C犿Fe()
犿Fe
[]
2
=[
犝C犞Fe()
犞Fe
]
2
+
犝C犆Fe()
犆Fe
[]
2
…(C.14)
??,犞Fe???????????,?:
31
犌犅/犜37966—2019
犝C犞Fe()
犞Fe
[]
2
=0.002
2=4×10-6
犆Fe????????????。???(C.15)
犆Fe=犆0
Fe()×犞0(Fe)
犞?
…………(C.15)
??犆Fe????????(C.16)?:
犝C犆Fe()
犆Fe
[]
2
=[
犝C犆0Fe()[]
犆0Fe()
]
2
+[
犝C犞0Fe()[]
犞0Fe()
]
2
+
犝C(犞?)
犞?
[]
2
………(C.16)
??:
犆0(Fe)???????????(???)????????。?????????????
?B,?????3.845mg/mL。?犆0(Fe)?????????????,???,犝C[犆0(Fe)]=
0.010mg/mL;
犞0(Fe)????????1000μL???,犝C[犞0(Fe)]=2μL;
犞?????????50mL???。???????????????,?????????
???:犝=0.05mL,犽=2。?犝C[犞?]=0.025mL。
????????(C.14),??:
犝C犿Fe()
犿Fe
=0.0039
????,?B?????????(C.6)?:
犝C犾()
犾
=0.0015犝C
犞()
犞
=0.002
犝C
Δ犃
Δ狋
()
Δ犃
Δ狋
=0.0048
Δ犃
Δ狋
犝C
犿Fe()
犿Fe
=0.0039
??Δ犃/Δ狋≈0.15,
犝C
Δ犃
Δ狋
()
Δ犃
Δ狋
?????????????????。???????????
???????????,??0.0048
Δ犃
Δ狋
???????????。
?B??????:
犝B犪nano()=犪nano×0.0048
Δ犃
Δ狋
=0.0048×犞
ε×犾×犿Fe
=0.065U·
mg
-1
犆.2.3??????
?????????,?A?、B?????????。??(C.17)??????????
0.069U·
mg
-1。
犝C=犝A珔犪nano()[]
2+
犝B犪nano()[]槡
2…………(C.17)
?????犽=狋0.05,34=2.03。
??(C.18)????????0.14U·
mg
-1。
犝犪nano()=犝C×犽…………(C.18)
??,?????????????????????
犪nano=2.02±0.14U·
mg
-1,
犽=2.03
41
犌犅/犜37966—2019
????
[1]GB/T19702????????????????????????????
[2]GB/T32269—2015??????????????????、????????
[3]GBW(E)130387???Fe2O3???????
[4]WS/T222—2002?????????????
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[8]EllisonSRL,WilliamsA,Silv
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