实验8 酵母RNA的提取----苯酚法-20090301.ppt_第1页
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文档简介

1、实验8，了解酵母RNA中苯酚的提取方法，1，实验目的和要求1，核酸组成和RNA提取技术。2.用苯酚法制备RNA的原理和方法2，实验基本原理苯酚法应用于tRNA提取。从细菌或酵母细胞中提取tRNA，可以直接提取到水中饱和的中性酚，而苯酚可以改变细胞壁的渗透性，从细胞中释放出tRNA(分子量在25000左右)，高分子核酸仍然保留在细胞内。通过离心力将含有酚水和细胞碎片的乳浊液分成两相，上层相为水溶性RNA、多糖及小分子极性物质，下层相为水中饱和酚、跨性别蛋白、DNA(大部分与变性蛋白交织在一起)菌体残渣等。酚类和水相界面有凝聚的跨性别蛋白质。用乙醇沉淀水中的大分子物质，tRNA通过白色棉花状沉淀析

2、出，去除可溶性酯类等杂质。离心，放弃清液，获得tRNA沉淀样品。苯酚法是具有生物活性且不分解RNA的简单有效的方法。提取酵母RNA的乙醇沉淀，获得粗RNA。第三，实验材料和试剂1，实验材料试板用干酶粉2，实验试剂90%苯酚水溶液(含0.1% 8-羟基喹啉)95%乙醇4，实验器材和仪器1，离心机，离心管(7ml) 2，制冰在干酵母粉1.0g，150毫升救世锥虫病中加入5毫升蒸馏水，90%苯酚5毫升(苯酚毒性！腐蚀性)，盖上锥瓶的塞子，在摇动中震动40 min，将锥状的内容物转移到2个7ml离心管后，平衡2个试管，8000rpm离心10min。用吸管小心地吸出上清液(包括RNA)，然后转移到其他干净的离心管。请参阅图1。图1。酚提取液离心后分层的情况下，水层(RNA，多糖)中间层(跨性别蛋白质层)3。酚层(DNA和蛋白质)，1，2，3，2 5000rpm离心5毫米。小心扔掉清液，小心用小保禄棒将沉淀物转移到计量纸、自然干燥或干燥。(威廉莎士比亚哈姆雷特)定量实验的RNA粗糙产品。6，注意事项1，离心样品离心管必须平衡并对称放入离心机。2.吸清液时，搅动界面会渡边杏，吸入介面物质会渡边

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