1.1DNA重组技术的基本工具(选修3).ppt

1、主题1:基因工程是指根据人们的意愿进行严格的设计，通过体外基因重组和转基因技术赋予生物体新的遗传特征，从而创造出更符合人们需求的新的生物类型和生物产品。因为基因工程是在脱氧核糖核酸分子水平上设计和构建的，所以它也被称为脱氧核糖核酸重组技术。首先，基因工程的概念，基因剪接技术或DNA重组技术，体外，基因，DNA分子水平，切割，剪接，导入，表达，基因重组，生物类型和人类所需的生物制品，基因工程的概念分析，转基因抗虫棉，抗虫棉，普通棉，利用基因工程培育抗虫棉的简要过程：普通棉(无抗虫特性)，苏云加入载体DNA导入、棉花细胞(含抗虫基因)和棉花植株(有抗虫特性)。讨论2:外源基因(如抗虫基因)在受体(

2、产生相应的蛋白质)中表达的理论基础是什么？(1)基因是控制生物特征的独立遗传单位。(2)遗传信息的传递遵循中心法则。(3)生物世界共享一套遗传密码。讨论1:为什么不同生物体的基因可以重组？(1)基本组成单位是相同的：它们都由脱氧核苷酸组成。(2)相同的空间结构：由两条反平行的脱氧核苷酸长链形成的规则双螺旋结构。(3)碱基配对方式相同：A与T配对，C与G配对，7，1.1 DNA重组技术的基本工具，精确切割DNA的工具(“分子手术刀”)，连接限制性内切酶DNA片段的工具(“分子缝合针”)，DNA连接酶基因转移的工具(“分子转运体”)，基因进入受体细胞的载体，1。分子手术刀-限制性内切酶(限制性内切

3、酶)，主要(1)来源：思考1:限制性内切酶在原核生物中的功能是什么？切断入侵的外援基因，使其无效，以保护自己。迄今为止，已从近300种不同的微生物中分离出约4000种限制性内切酶。思考2:限制性内切酶是一种酶还是一种酶？它是一种识别双链DNA分子特定核苷酸序列的酶，并在每个链的特定位置破坏两个核苷酸之间的磷酸二酯键。(3)作用：(4)结果：由两条反平行的脱氧核苷酸长链形成的两种规则的双螺旋结构，磷酸二酯键、g、磷酸二酯键、A、13，被限制性酶识别的序列的特征是什么？被限制性内切酶识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一个中心轴，中心轴两侧双链DNA上的碱基对称地反向重复排列。图1-

4、1限制性内切酶识别序列的中心轴，当限制性内切酶从识别序列的中心轴切下时，产生平端。当限制性内切酶从识别序列中轴线的两侧切下时，产生粘性末端。在g和a之间切割，在c和g之间切割，思考：3。限制性酶切一次形成多少个末端？2 4.一段脱氧核糖核酸被限制性酶切割两次，形成几段脱氧核糖核酸。有几个结尾？3段和4段。5.如果你想得到某个目标基因，你必须用限制性内切酶切几个切点。可以生产多少粘性末端？一个目标基因有多少个粘性末端？有必要切割两个切割点以产生四个粘性末端和两个粘性末端。(5)作用特点：思维6:限制性内切酶的本质是蛋白质吗？是的，特异性(即识别特定的脱氧核苷酸序列和切割特定的位点)和高效率是温和

5、的。2.连接酶“分子缝合针”，1。类型：2。行动地点：2。磷酸二酯键(扶手)不是氢键(梯子)。3.功能：“缝合”双链DNA片段(粘端)，(粘端和平端)，脱氧核糖核酸聚合酶和脱氧核糖核酸连接酶之间有什么异同？双链、单链，在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，在现有核酸片段的3末端的羟基上添加单个核苷酸以形成磷酸二酯键，1)两者都由蛋白质、3组成。进入受体细胞的基因的载体“分子转运体”，2，常用大量外源基因通过载体在受体细胞中复制。1、载体的功能、复制起始序列、切割位点和标记基因的存在，这些可以通过含有氨苄青霉素的培养基来鉴定。它是一种小的双链环状脱氧核糖核酸分子，裸露，结构简单，不依赖于细菌假核脱

6、氧核糖核酸或细胞核，具有自我复制的能力。质粒存在于细菌、真菌(如酵母)和其他生物的细胞质中。2，讨论，3，作为一个向量，如果没有切割点？4.如何识别携带目标基因的载体是否已经进入受体细胞？如果目标基因被导入受体细胞后不能复制呢？1.从化学组成来看，载体应该是单链还是双链？双链DNA，不能，不能进行DNA重组，载体上应该有标记基因，这可能导致基因丢失，载体必须具备条件，3，作为载体必须具备能够自我复制的条件，有一个或多个限制性内切酶，而且一些标记基因对受体细胞无害，这应该适合提取和操作。想一想：天然质粒分子能直接用作基因工程的载体吗？不，天然质粒DNA分子完全不具备载体的条件，只能在人工修饰后用

7、于基因工程操作。思考和探索，1。限制性内切酶能切割脱氧核糖核酸的任何部分吗？以下是被四种不同的限制性酶切割的DNA片段：(1)ctgca(2)AC(3)GC g TG CG(4)g(5)g(6)GC CTT aa ACG TC CG(7)gt(8)aa TTC ca g你能用DNA连接酶把它们连接起来吗？2和7可以连接形成ACGT TGCA；4和8可以连接形成GAATTC CTTAAG；3和6可以连接形成gcgccgcg1和5可以连接形成CTGCAG GACGTC。为什么限制酶不能切断它们自己的脱氧核糖核酸分子？1)所述1)DNA分子不具有限制性酶的识别和切割序列；2)通过甲基化酶将甲基转移到所鉴定序列的碱基上，从而限制酶