试验二培养基的配制与灭菌

1、实验1。培养基的制备。目标要求：1 .阐明培养基的配制原则。2.掌握基本培养基制备的一般方法和步骤。(1)实验原理根据微生物生长发育的需要，用不同营养成分人工配制的营养基质称为培养基。培养基是一种适合微生物生长和繁殖或代谢产物产生的营养培养基。培养基是所有微生物研究和利用的基础。任何培养基都应该有微生物生长的六大营养元素，即碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子和水。一旦准备好任何培养基，必须立即灭菌。根据所选营养物的来源，培养基可分为三类：天然培养基2。半合成培养基3。合成培养基1。牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏蛋白胨培养基是应用最广泛和最常见的基础细菌培养基之一，它含有普通细菌生长和繁殖所需的最基

2、本的营养物质：牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，氯化钠提供无机盐。由于该培养基用于培养细菌，有必要用稀酸或稀碱将其酸碱度调节至中性或微碱性，以促进细菌的生长和繁殖。2.淀粉培养基(高培养基)是一种用于培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。这种合成介质的主要特点是含有多种已知化学成分的无机盐，如硝酸钾、高锰酸钾、硫酸镁、氯化钠、硫酸亚铁等。一些合成培养基需要补充微量元素。马丁培养基主要由碳源、氮源、无机盐、维生素等组成。它们都来自天然和化学成分。马丁氏菌是一种用来培养霉菌的培养基。4、YPD培养基、YPD或YPED培养基，也称酵母提取物蛋白胨葡萄糖培养基，

3、而加入琼脂的培养基也称酵母提取物蛋白胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基。主要用于酵母培养。(2)实验方法：计算、称量、熔化、调节酸碱度(过滤)、包装和灭菌；(1)制备牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏3.0g蛋白，10.0g氯化钠，5.0g自来水，1000ml琼脂，16-18g(固体)，ph 7.4，7.6，灭菌121，20-30分钟，(2)高培养基，可溶性淀粉20。克KNO3 1克K2HPO4 0.5克硫酸镁0.5克氯化钠0.5克硫酸亚铁0.01克蒸馏水1000毫升琼脂16-18克(固体)。首先用少量蒸馏水溶解淀粉，然后加盐。将酸碱度调节至7.67.8。3。马丁培养基，kh2po4 1g硫酸镁0.5蛋白质

4、老化5g葡萄糖10g琼脂16-18g(固体)，自然酸碱度，1000毫升培养基1%孟加拉红3.3毫升，4。YPD培养基，配方：酵母抽提物1%蛋白胨2%葡萄糖)2%琼脂粉16-2% 2，掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。3、了解干热灭菌的原理和应用，掌握干热灭菌的操作技术。4、了解紫外线灭菌、高压蒸汽灭菌的原理和方法，高压蒸汽灭菌锅是一种耐高压的密封金属锅。它利用封闭条件下产生的高压蒸汽达到杀菌效果。温度在100以上，杀菌能力强。因此，它是一种应用广泛、效率高的灭菌工具。分类：1 .水平型2。垂直型。具体操作步骤：(1)向灭菌锅内加入适量自来水(至水位)；(2)将上述包装好的培养基进行灭菌。注意：不要放

5、得太拥挤，以免影响蒸汽循环和杀菌效果；(3)盖上螺丝，使蒸锅气密(对角均匀扭曲)；(4)打开空气阀。蒸汽产生10分钟后(此时，蒸汽锅内的冷空气被排气阀排出)，温度随蒸汽压力上升。当达到所需压力(15磅/小时2)时，控制热源保持所需时间(20分钟)，然后停止加热，让其自然冷却。(5)当压力降至0磅时，打开排气阀，然后打开锅盖，取出灭菌后的物料。注意：在压力降至0磅之前不要打开锅盖，否则压力会突然下降，导致培养基沸腾，弄湿棉塞，甚至冲出试管。(6)从罐中取出灭菌的培养基，稍微冷却后放在斜面上，然后在37的培养箱中培养24小时，并在无菌条件下生长，以备后用。用这种方法完成灭菌的一个重要关键是，必须在压力上升之前将锅内的冷空气完全排出，否则，尽管压力表显示的是每小时15磅，但锅内的温度只有100，这通常会导致灭菌不完全。斜面排列示意图：干热灭菌是利用高温使微生物细胞中的蛋白质凝固和变性，达到灭菌的目的。蛋白质在细胞中的凝结与其自身的含水量有关。当细菌被加热时，环境和细胞中的含水量越高，蛋白质凝结越快，而含水量越低，凝结越慢。紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。紫外线杀菌的主要机制是诱导胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制DNA的复制。波长为200-300纳米的紫外线具有杀菌效果，其中