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文档简介

1、实验三细菌的鞭毛染色和芽孢染色,主 讲:徐尔尼 生命科学学院生物技术系,一、目的与要求 学习细菌的芽孢染色和鞭毛染色方法。 观察芽孢杆菌形态特征和鞭毛的形态特征。 巩固无菌操作技术和显微镜的油镜使用。,二、基本原理 1、鞭毛染色法 细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0.010.02m，所以不能用光学显微镜直接观察到，必须采用特殊的染色方法，才能被观察。 鞭毛染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。,二、基本原理 2、芽孢染色法 由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，因此用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进

2、入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。,三、实验器材 1、菌种：普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌 2、染色剂：硝酸银鞭毛染色液:(A液、B液）、芽孢染色液:（5%孔雀绿染液、0.5%番红染液） 3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、木夹、接种环、双层瓶、显微镜、擦镜纸、滤纸等,四、操作步骤 1、鞭毛染色（硝酸银染色法） 取一滴无菌水，滴于玻片一端取一环菌置于无菌水中，让菌体利用鞭毛运动开 然后玻片倾斜，让菌液缓缓流向玻片的另一端 室温自然干燥 滴加染液A 3-5min

3、 水洗 用染液B冲去残水 滴加染液B1-1.5min水洗 干燥 镜检 结果：菌体深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形。 操作要点： 菌种的培养时间为8-10h。 玻片要求光滑、洁净。 勿用接种环涂布制片。 制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥。 为使鞭毛清晰可见，水洗时尽量把载玻片冲干净。,四、操作步骤 2、芽孢染色 涂片 干燥固定 滴加孔雀绿染液 夹住玻片，微火加热至蒸汽冒出，维持5min 水洗 番红复染2min水洗 干燥 镜检结果：芽孢绿色，营养体红色。 操作要点： 加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂片干涸。 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，以免细菌被水冲掉。,五、实验数据及处理结果 1、根据油镜观察结果，绘出枯草芽孢杆菌的形态特征（注意芽孢的形状及着生位置）。 2、绘出普通变形杆菌的鞭毛形态特征。,六、思考与讨论 1、用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛，要注意哪些环节？ 2、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？ 3、说明芽孢染色法

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