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文档简介
1、实验三细菌的鞭毛染色和芽孢染色,主 讲:徐尔尼 生命科学学院生物技术系,一、目的与要求 学习细菌的芽孢染色和鞭毛染色方法。 观察芽孢杆菌形态特征和鞭毛的形态特征。 巩固无菌操作技术和显微镜的油镜使用。,二、基本原理 1、鞭毛染色法 细菌的鞭毛很纤细,其直径通常为0.010.02m,所以不能用光学显微镜直接观察到,必须采用特殊的染色方法,才能被观察。 鞭毛染色原理是在染色前先用媒染剂处理,使它沉积在鞭毛上,使鞭毛直径加粗,然后再进行染色。,二、基本原理 2、芽孢染色法 由于芽孢壁厚、透性低、不易着色,因此用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内,进
2、入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽孢一经着色难以被水洗脱,当用对比度大的复染剂染色后,芽孢仍保留初染剂颜色,而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色,使芽孢和菌体更易于区分。,三、实验器材 1、菌种:普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌 2、染色剂:硝酸银鞭毛染色液:(A液、B液)、芽孢染色液:(5%孔雀绿染液、0.5%番红染液) 3、仪器或其他用具:载玻片、生理盐水、酒精灯、木夹、接种环、双层瓶、显微镜、擦镜纸、滤纸等,四、操作步骤 1、鞭毛染色(硝酸银染色法) 取一滴无菌水,滴于玻片一端取一环菌置于无菌水中,让菌体利用鞭毛运动开 然后玻片倾斜,让菌液缓缓流向玻片的另一端 室温自然干燥 滴加染液A 3-5min
3、 水洗 用染液B冲去残水 滴加染液B1-1.5min水洗 干燥 镜检 结果:菌体深褐色,鞭毛淡褐色并呈波浪形。 操作要点: 菌种的培养时间为8-10h。 玻片要求光滑、洁净。 勿用接种环涂布制片。 制片后要自然干燥,不能放在火焰上干燥。 为使鞭毛清晰可见,水洗时尽量把载玻片冲干净。,四、操作步骤 2、芽孢染色 涂片 干燥固定 滴加孔雀绿染液 夹住玻片,微火加热至蒸汽冒出,维持5min 水洗 番红复染2min水洗 干燥 镜检结果:芽孢绿色,营养体红色。 操作要点: 加热过程中,要及时补充染液,切勿让涂片干涸。 待玻片冷却后,用缓流自来水冲洗,以免细菌被水冲掉。,五、实验数据及处理结果 1、根据油镜观察结果,绘出枯草芽孢杆菌的形态特征(注意芽孢的形状及着生位置)。 2、绘出普通变形杆菌的鞭毛形态特征。,六、思考与讨论 1、用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛,要注意哪些环节? 2、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢,很少看到芽孢囊及营养细胞,你认为这是什么原因? 3、说明芽孢染色法
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