5.1 DNA的粗提取与鉴定ppt课件

1、2、提取生物大分子的基本思路,1、生物大分子,3、提取DNA的基本思路,选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子,主要指蛋白质、核酸、以及脂质和糖类等,利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分,（一）实验材料的选取,1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取23种实验材料）,2、原则：选用DNA含量相对较高、容易提取的生物组织。,鸡血,3、合适的材料：,释放组织细胞中的DNA 粗提取DNA 将粗提取的DNA进一步纯化 鉴定提取物是DNA,加柠檬酸

2、钠，静置或离心 加蒸馏水，同一方向搅拌 过滤，除去细胞壁、细胞膜等。 加入NaCl至2mol/L，同一方 向缓慢搅拌 加蒸馏水至0.14mol/L，过滤，在 溶解到2mol/L溶液中 除去细胞质中的大部分物质。 与等体积95冷却酒精混合， 析出白色丝状物 除去核蛋白、RNA、多糖等。 二苯胺，沸水浴，呈现蓝色,制备鸡血细胞液,释放DNA,溶解DNA,DNA纯化,DNA鉴定,DNA析出,动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可.,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,1、破碎动物细胞，获取含DNA的滤液,答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶

3、液，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，从而释放出DNA。,讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？,2、破碎植物细胞，获取含DNA的滤液 充分研磨 研磨前加入一定的洗涤剂和食盐,洗涤剂:是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，但对DNA没有影响，有利于DNA的释放； 食盐:主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解,讨论： 如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？,答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等,（三）去除滤液中的杂质,方案一、 在滤液中_，使NaCl溶液浓度为_，过滤除去不溶的杂质； 再_，调节Na

4、Cl溶液浓度为_，析出DNA，过滤除去溶液中的杂质。 再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。,加入NaCl,2mol/L,加入蒸馏水,0.14mol/L,当氯化钠的物质的量浓度为: 2 mol/L时，DNA的溶解度最大 0.14 mol/L时，DNA的溶解度最低,（1）DNA的溶解性,方案二： 直接在滤液中加入嫩肉粉，反应1015分钟。 方案三： 将滤液放在60750C的恒温水浴箱中保温1015分钟。,DNA对酶和高温的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没影响 大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在80以上才会变性,（四） DNA的析出与鉴定,DNA的析出用的是与滤液体积相等

5、的_（体积分数为95） ，静置23min，溶液中会出现_，这就是粗提取DNA。,1、DNA的析出,冷却的酒精溶液,白色丝状物,用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水。,DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。,在试管中先加入_ 5ml于两只试管中，其中一只加入_， 各加入_4ml 试剂。,2、 DNA的鉴定,混合均匀后，将试管置于_中加热5min,待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有_,物质的量的浓度为2mol/L 的NaCl溶液,DNA丝状物,二苯胺,沸水,蓝色,总结：,DNA的粗提取和鉴定这

6、个实验中： （1）加了几次水，每一次的作用是什么？,第一次，取血细胞液时加蒸馏水，目的是让血细胞吸水涨破 第二次，在析出含DNA的粘稠物后，目的是稀释NaCl溶液，使DNA逐渐析出,（2）加了几次NaCl，每一次的作用是什么？,第一次，在溶解核内DNA时，加入NaCl后充分搅拌，加速染色质中DNA与蛋白质的分离，使DNA充分游离并融入NaCl中 第二次，在DNA粘稠物在溶解时，加NaCl是使DNA再溶解 第三次，是在DNA的鉴定中，目的是溶解DNA,（3）过滤了几次，每一次的作用是什么？每一次提取的是滤液还是过滤物？,第一次在提取血细胞核物质时进行过滤，取得的滤液中含有染色质，而滤出的是细胞膜

7、、核膜和细胞器等的破碎结构 第二次在过滤含DNA的2mol/L的NaCl溶液时，过滤后的滤液中含有DNA 第三次在过滤0.14mol/L的NaCl溶液时，粘稠物含有DNA，滤液中含有仍然溶解在NaCl中的细胞中的一些成分，如蛋白质等,1. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 A氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B人血也可代替鸡血进行实验 C柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 DDNA不能溶于酒精 2. 在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是 A. DNA溶解于水 B血细胞破裂，DNA释放 C稀释血液，防止凝固 D有利于搅拌,3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是 A. 利于DNA的溶解 B. 分离DNA和