第四章-药物定量分析和方法验证.ppt

1、第四章 药物定量分析与分析方法验证,第二节 分析样品的前处理方法,第一节 定量分析方法,第三节 药品分析方法验证,练习与思考,基本要求,一、掌握定量分析方法及验证的效能指标。 二、熟悉定量分析方法的特点 三、熟悉样品的前处理方法。 四、了解定量分析样品的前处理方法的进展 及在药物分析中的应用。,重量分析法 容量分析法 光谱分析法 色谱分析法,第一节 定量分析方法,一、重量分析法,生成的沉淀而进行分析的方法,生成沉淀滤过洗涤灼烧恒重。,特点： 1、操作繁琐 2、结果准确,很少用,（一）容量分析法的特点 操作简单、快速； 比较准确（相对误差0.2%）； 仪器普通易得 常用于测定高含量或中含量组分，

2、原料药含量测定首选,二、容量分析法,（二）容量分析法的计算问题 1.滴定度（T）： 每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量(mg) 2.滴定度的计算 aA（待测物） + bB（滴定液） cC + dD a b T/M 1m,T = ma/bM,m：滴定液浓度 (mol/L) M：被测物分子量,WA=TVB,3.百分含量的计算 （1）直接滴定法,W：供试品取样量,设至终点时，消耗滴定液体积为V ml 则药物实测质量为VT,浓度校正因数,（2）间接滴定法 1）生成物滴定法（略） 药物 + A B 滴定 2）剩余滴定法（回滴法） 药物 + A（定、过量） 剩余的 A + B （回滴）V 空白试

3、验V0,滴定剂,（3）以相当于标示量%表示,光谱 光谱分析法 分光光度法 分类 紫外-可见分光光度法 红外分光光度法 原子吸收分光光度法 荧光分光光度法,三、光谱分析法,三、光谱分析法 （一）紫外-可见分光光度法 吸收光谱范围：紫外：200400nm 可见：400760nm 灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7g/ml 1. 特点 准确度高，RE（%）为2% 5% 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛 2. 朗伯-比耳定律 A = ECL 吸收系数：摩尔吸收系数 研究分子结构 百分吸收系数 含量测定,3. 测定方法 要求供试品溶液的A应在0.3 0.7 1）对照品比较法：A供A对C供C

4、对,制剂：,原料药：,AXARWXWR,2）吸收系数法：,注意： 应100 应注意仪器的校正和检定： 作为计算浓度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都适用的，特别是单色光不纯的情况下，A会随仪器不同而变化，误差较大。 但若认定一台仪器，固定其工作状态和测定条件，则C和A间的关系在多数情况下仍符合LambertBeer定律。,3）计算分光光度法： 多种，具体按每种药物规定的方法进行 如：VA的三点校正法,4）比色法 加入显色剂后，按照对照品比较法测定 影响显色因素很多，故需注意平行操作 空白溶剂：溶剂+显色剂，同法处理,（二）荧光分析法 灵敏度高，可达10-10g/ml 10-12g/ml 在

5、低浓度进行测定，防止自熄灭作用 1. 特点 用基准溶液校正仪器灵敏度 制备荧光衍生物，可提高灵敏度和选择性 干扰因素多，需做空白实验 样品用量少，操作简单，应用范围较广,2.含量测定 原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧光强度R与该物质浓度C成正比 方法：对照品比较法 计算：,根据混合物中各组分的色谱行为差异，先行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的方法，是分离分析混合物的最有力手段。 按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 分类 按分离方法：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC,特点：高灵敏度、 高效能、高速度、应用广泛,四、色谱分析法,1

6、. 对仪器一般要求 固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变 其他均可适当改变 色谱图20分钟内记录完毕 2. 系统适用性试验 色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分离度：R = 2（tR1 tR2)/(W1 + W2); 应大于1.5 重复性：对照液连续进样5次，峰面积RSD2.0 拖尾因子：T = W0.05h/2d1 应在0.9 1.05,（一）HPLC法,流动相,真空脱气机,四元泵,自动进样器,紫外检测器,荧光检测器,蒸发光散射检测器,液质联用仪,质谱检测器,流动相：对于以C18为固定相的反相色谱系统，常用甲醇-水，间或加以乙腈、缓冲液等为流动相，有机溶剂比

7、例通常不低于5,四元泵,自动进样器,色谱柱,填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶,检测器,测定方法 1)内标法加校正因子测定供试品中主成分含量,对照液（R）： AR CR,峰面积 含量,内标液（S）： AS CS,供试液（X）： AX CX,f= ,AS/CS,AR /CR,f= ,AS / CS,Ax /Cx,Cx=f ,Ax,AS / CS,例,2)外标法测定供试品中主成分含量,对照液（R）： AR CR,供试液（X）： AX CX,CX CR,AX AR,CX,CR AX,AR,要求：进样量准确、操作条件稳定,（二）GC法 1. 对GC仪器一般要求 载 气：氮气 色谱柱：填充柱或毛细管柱 填充柱：内径24mm，长110m，内装吸附剂 高分子多孔小球或涂渍