课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (2)

1、课题2:土壤中尿素分解菌的分离与计数，实验设计，土壤中尿素分解菌的分离与计数，1。土壤取样，3。样品稀释和取样涂层，4。微生物培养，观察并记录结果，5。细菌计数，土壤中尿素分解细菌的分离和计数，从肥沃和湿润的土壤中取样。首先铲大约3厘米的表土，然后取样，并将样品放入准备好的信封中。实验步骤、1土壤取样、制备5份牛肉膏蛋白胨培养基和15份选择性培养基、制备无菌试管和移液器。实验步骤，2。准备培养基，准备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择性培养基，准备无菌试管和移液器。注：每次稀释需要三种选择性培养基(平行重复原理)和一种牛肉膏蛋白胨培养基。选择稀释倍数为103107的稀释剂。实验步骤，2。培养基

2、的制备，为什么要用不同的稀释液来分离不同的微生物？确定土壤中细菌总数和分解土壤中尿素的细菌数量的稀释范围是否相同？由于土壤中微生物的数量(单位：株/公斤)不同，例如，在干旱土壤的上层样品中，需氧和兼性厌氧菌的数量约为2185万，放线菌的数量约为477万，霉菌的数量约为23.1万。因此，为了获得不同类型的微生物，有必要根据不同的稀释度分离它们，同时，应该提供选择性培养条件。为了确定土壤中的细菌数量，通常使用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；为了确定放线菌的数量，通常使用103、104和105倍稀释液；为了确定真菌的数量，通常使用102、103和104倍稀释液。注：样品稀释时，将10g

3、土壤样品放入盛有90毫升无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，吸取1毫升上清液，转移到盛有9毫升水的无菌试管中，按等比依次稀释至107倍，然后按107倍至103倍的顺序吸取0.1毫升，进行平板涂布。在不更换移液器的情况下，按浓度从低到高的顺序涂在板上。实验步骤，3。样品稀释和取样涂层。注意：由于最初的实验，稀释的范围是不确定的，所以选择了更宽的范围：稀释倍数是103107。包被培养皿在30培养。比较牛肉酱培养基和选择性培养基中菌落的数量和形态，并做好记录。4.培养、观察并记录微生物的结果。不同种类的微生物通常需要不同的培养温度和时间。细菌一般在3037培养12d几天。放线菌通常在2528培养57d几天。

4、霉菌通常在2528下培养34天。注：一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度和培养时间)，同一微生物表现出稳定的菌落特征。菌落形状、大小、膨胀度和颜色。当菌落数稳定后，选择菌落数为30300的平板进行计数。在相同的稀释度下，对至少三个平板重复计数，然后计算平均值，并根据平板对应的稀释度计算样品中的细菌数量。实验步骤，5。细菌计数，操作技巧，无菌操作1。装土壤样本的小铲子的信封在使用前需要消毒。2.土壤应该在火焰旁边称重。将称量好的土壤样品倒入靠近火焰的锥形瓶中，并塞住棉花塞。3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要用火焰来操作。2.标记培养基的类型、培养日期、平板培养样品的稀释度等。第三，计划时间、项目延期、CO2(NH2)2 H2O 2 2 NH3、脲酶、酸碱度上升指示剂(酚红)将变红，在培养基中选择和选择不同形式的菌落，并将其接种到含有酚红的培养基斜面上，观察其是否变红。1、结合对照，通过选择培养基，分析培养物中是否存在混合菌污染以及是否筛选出一些菌落。2.是否在一定稀释度下获得了30300个菌落的平板。在这种稀释度下，是否至少有两个菌落数相似的平板？3.每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？结果和其他学生的接近吗？如果有很大的不同，原因可能是什么？结果分析与评价，滤膜法，以饮用水中大肠杆菌的数量为例。将已知体积