动物细胞培养的准备.ppt

1、第三章细胞培养准备工作，玻璃碗金属器具橡胶塑料产品，玻璃碗洗浸水(自来水)洗(洗涤剂)酸性泡沫(24小时)自来水洗敷料浸水和洗50干橡胶，塑料产品洗清水洗清水洗自来水整夜用纱布或棉棒和50稀乳液洗(1520次)干正压除菌过滤器的清洗，清洗含有稀洗涤剂的水，反复清洗后冲洗流动的水，将15毫升二水蒸馏水浸泡在24h三蒸汽水中，准备24h干燥或50干燥。塑料设备常用的塑料设备包括多孔培养板(4孔、6孔、12孔、24孔、96孔)、Petri盘子、培养瓶、吸头等。重复使用处理阶段：自来水粉刷3HCl或2NaOH溶液浸泡，整夜充分冲洗自来水，双蒸汽水3次紫外线直接照射或辐射灭菌，清洗时流动的水要震动冲洗。

2、在一瓶中倒入2/3的自来水，震动后晕倒，重复15-20次。煮前的睡眠在器材5厘米以上，水沸腾后加入洗涤剂。配制时，先将蒸馏水放入容器中，加热融化中铬酸钾，然后将容器放入流动的自来水中，中铬酸钾液冷却后，慢慢放入浓硫酸，边走边搅拌。配置，强度，包装材料：牛皮纸，硫酸纸，铝箔纱布，金属消毒罐，铝便当方式，封闭设备使用结束，显示设备手持结束；在小包装玻璃管道口(尖吸管、移动管扶手等)上放棉花。消毒灭菌方法，去除或杀死物品中的所有微生物，杀死孢子为标准，物理方法1:紫外线消毒，紫外线直接照射消毒是各实验室常用的方法。主要用于培养室空气、工作台、塑料盘和培养板等表面消毒。紫外线消毒时会产生臭氧，对身体有

3、害，因此紫外线消毒停止30分钟后才能进入室内。现在，一些实验室为了空气消毒，用电子灭菌剂代替紫外线灯。紫外线消毒法是利用紫外线对菌体蛋白质进行光解、变性、细菌体内的核酸、酶破坏致死的消毒方法。紫外线的杀菌力与波长密切相关，最佳杀菌波长为250-270nm。照明消毒法主要利用紫外线，使菌体蛋白光解变性发生时细菌死亡。一般来说，太阳光消毒法日光曝光法用于枕头、床上用品、床垫、棉花等的消毒，一般来说，曝光6 h达到消毒，曝光时2 h翻转紫外线消毒法紫外线消毒法用于空气消毒和物品表面的消毒。物理方法2:干热消毒，干热是相对湿度在20%以下的高热释放空气热量，传热慢，常用于干热消毒灭菌的方法。1.焚烧灭

4、菌法；2.燃烧灭菌法；3.干燥消毒灭菌法：用于高温下不变质、不损伤、不蒸发的物品，如油剂、粉末、玻璃器具、金属制品等。玻璃碗，160oC 90-240mins 4。微波消毒灭菌法：食品及餐具用消毒医疗剂及耐热非金属材料的消毒灭菌，物理法3:过滤消毒，目前细胞培养工作中使用的培养液，人工合成培养液，血清，消化用胰酶等维生素，蛋白质，滤膜使用时要注意：滤膜薄，光滑，易于移动，安装时必须纠正膜位置过度干燥的滤膜很脆，在高压或高温干燥时容易破裂，所以安装前可以用三证水润湿滤膜。为了确保过滤效果，使用时一次铺两个过滤器，上面的孔径为045微米，下面的孔径为022微米，两个都为022微米。用无齿滑动镊子夹

5、起过滤器，防止镊子牙齿打破过滤器。施加压力时要均匀力，打开后过滤器，检查过滤器是否移动和破碎。过滤菌的各种过滤器，过滤菌的方法：培养基、血清、消化酶、抗生素等。物理方法4:湿热灭菌，湿热通过空气和水蒸气传导热，传热快，穿透力强，湿热消毒灭菌常用方法：沸腾消毒法高压蒸汽灭菌法，普通高压蒸汽灭菌压力102。97-137.30 kPa，温度为1211260C左右15-30 min布，金属，橡胶，玻璃，部分培养液培养液，橡胶：115OC (10磅)20mins玻璃，金属：121oc，高压蒸汽灭菌器、化学消毒灭菌法、化学消毒灭菌法使用化学药品渗入细菌，变性凝固菌体蛋白，妨碍细菌酶活性，抑制细菌的代谢和生

6、长，或破坏细菌膜的结构，改变渗透性，破坏生理功能等，根据消毒灭菌目的、化学消毒剂使用原则，(1)物品的性能，(2)(3)消毒剂要定期更换，易挥发的消毒剂要盖章，定期检查，调整浓度。(4)浸泡前，物品要洗净擦干净，锁在消毒液里的物品要注意打开轴关节或盖子，管子里要装满消毒液。(。(5)避免使用前无菌生理盐水消毒的物品，刺激消毒剂人体组织，化学消毒剂分类，L，高效消毒剂高效消毒剂，能杀死所有微生物。孢子(碘酊、福尔马林等)2，中效消毒剂中效消毒剂可杀死细菌繁殖体。孢子(乙醇、碘等结核杆菌，亲水性病毒，孢子(苯扎溴胺、氯基廷等)，化学消毒剂使用方法，浸泡法浸泡法是将物品洗净，擦拭后浸泡在消毒液中消毒

7、灭菌的方法。擦拭方法是用消毒剂直接擦拭人体或物品的表面(如皮肤、椅子等)，达到消毒灭菌的方法。喷雾喷雾方法是利用喷雾器将消毒剂变成微粒雾，在空气中对空气和物品表面进行消毒灭菌的方法。熏蒸法熏蒸法是通过加热消毒剂或加入氧化剂制造气体来消毒灭菌的方法。，一般消毒剂，过氧化乙酸过氧化酸福尔马林(37-40%的甲醛溶液)戊二醛glutaraldehyde环氧乙烷乙烯利氧化氯消毒剂乙醇乙醇本杰明(新洁灭)；浸泡1- 2min 0.5在工具消毒中，浸泡30-60 min 0.2 -0.5在物体表面消毒中，或在空气消毒中浸泡10 min 1 -2，8 mL/m3，加热熏蒸，密闭窗口30-120 min，浓缩

8、溶液有腐蚀性，配制时要戴口罩和橡胶手套。保存在阴凉黑暗的地方，防止高温引起的爆炸。福尔马林(37%至40%的甲醛溶液)，消毒效果：高效40甲醛210 mLm3水420 mL加热，室内物品和空气消毒40甲醛4060 mLm3加高锰酸钾2040 g，机柜内熏蒸，密封612H 10甲醛，注意：蒸汽渗透力消毒效果容易受温度、湿度的影响，室温为18以上，相对湿度为70以上。人体有一定的毒性和刺激性，使用时请注意保护。戊二醛，消毒效果：高效浓度和使用方法：2戊二醛溶液为0.3碳酸氢钠，2碱性戊二醛，用于不吸收高温的金属设备、医疗器械、内窥镜等。消毒需要10-30分钟，灭菌需要7-10 h。注：浸泡金属类时

9、，放0.5硝酸钠(0.5)作为防锈剂。消毒灭菌后物品，使用前无菌蒸馏水清洗，含氯消毒剂，含氯消毒剂：常用漂白剂消毒效果：中、高效浓度及使用方法：0.5漂白剂溶液，0.51氯胺溶液用于浸泡餐具、马桶等，用于浸泡30min。13喷洒漂白剂溶液，0.53氯胺溶液，或擦拭地面、墙壁和物品表面。粪便消毒：在5份干粉中混合1份漂白粉，2 h，在100毫升尿液中加入1 g漂白粉，1 h。注意事项：消毒剂存放在密封容器中，凉爽、干燥、通风，减少有效氯的损失。准备的溶液性质不稳定，目前需要配制。有腐蚀及表决器用，不适合金属制品、有色衣服及油漆家具消毒。3 d更换一次消毒液，乙醇，消毒效果：中效浓度和用法：70-

10、75皮肤消毒95燃烧灭菌注意事项：挥发性，保存盖子，定期测定，有效浓度保持刺激性，粘膜和伤口消毒易燃性，因此，皮化处，苯扎姆消毒效果：效率低下0.1乳酸蒸汽经常用作无菌室或周围环境的定期消毒。75酒精经常用于超精台台面、器具、实验操作者皮肤等的消毒。0.1 .新洁灭用于擦桌子、椅子、地板、皮肤、工作台面或消毒。0.1塞维泰水溶液用于皮肤浸泡消毒。摘要：物理消毒，(1)射线消毒：用于60Co，X射线，血清和塑料产品灭菌。(2)紫外线：碗要浸泡在75酒精中，照亮30min。(3)干热灭菌：160C，90120 min。主要用于玻璃，金属器皿。(4)湿热杀菌：121C，30min适用于布、橡胶、部分

11、塑料、金属、玻璃等。(5)过滤杀菌：用孔径小于0.22米的过滤膜过滤，适用于培养液和其他高压灭菌不可能的溶液。摘要：化学消毒；(1)70(75)酒精：手、机器、工作台。(2)0.1新洁灭：主要用于洗手和工作台清洗。(3)高粱：主要用于书桌、椅子、墙壁、地板的消毒和空气消毒。(。(4)0.5%过氧乙酸：10min杀死孢子菌，用于表面消毒。(5)其他：乳酸、甲醛、高锰酸钾、山羊等。(。无菌室灭菌：1。定期清洁无菌室：每周清洁一次，首先用自来水擦地板，擦桌子，擦初顺工作台等，然后用3关掉或用0.5过氧化氢乙酸擦拭。2.CO2孵化器灭菌：首先用3种新凝胶擦拭，然后用75酒精擦拭，或用0.5过氧化氢乙酸

12、，紫外线照射3。实验前灭菌：紫外线灯打开，三氧消毒器，空气净化器系统各20-30分钟4。实验后灭菌，实验者的无菌准备：1。肥皂洗手。2.穿上隔离服，隔离帽，面具，拖鞋3。用75酒精棉球擦双手。无菌操作时注意事项：1 .进入超净工作台的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶瓶都要用75酒精擦拭瓶子的外表面。3.器皿使用前必须过灭菌。4.使用继续的器皿(如瓶盖、吸管)要放在高处，使用时仍然要做得过火。5.各种操作要接近酒精灯，动作要轻巧准确，随意触摸渡边杏。吸管接触不到废液桶的话，就会渡边杏。6.吸收两个茄子以上的使用液时，要注意更换吸管，防止交叉污染。准备培养前，器材物品放在车间(培养室，初顺台)消毒。

13、工作室消毒，每天0.2%辛杰停用地板；每天紫外线照射分初顺台在每次实验前用酒精擦拭，然后紫外线消毒分，手和服装火焰消毒工作：动作准确，敏捷，避免撞到碗的布置。根据顺风的不同，其他流动管提取额不固定保管马匹、咳嗽、专业引流、灭菌、标签所有用品。“防止污染”，第2节，细胞培养溶液，水：平衡盐溶液(BBS):消化液：培养基抗生素液：染色液：(1)水，(2)平衡盐溶液，保持渗透压力，保持PH值细胞生存调节渗透压，平衡盐溶液：无Ca2，Mg2缓冲PBS:NaCl 8.0g KCl 0.2g na 2 hpo 4 . H2O 1.56g kh2po 4.20g 1000ml添加水，(c)消化液，角色：附着

14、细胞的原代培养和传递胰蛋白酶液血清可以停止胰蛋白酶的继续作用。EDTANa，又称Versen溶液化学合剂，对细胞有一定的解毒作用毒性小，价钱0.02%，胶原酶溶液。细胞培养容器和培养基culture vessels and medium for animal cell culture，2，培养基(液体)，培养基(液体)保持体外细胞生存和生长的溶液天然培养基：合成培养基：氨基酸，维生素，迈可等离子体污染，血清(serum):通常用作小牛血清(包括胎牛血清)、人血清和其他动物血清。灭活：56度，移除30分钟补体活动。成分：总蛋白质3.5-4.5g/100ml球蛋白不高于2g/100ml。透明浅黄色，不溶血，不沉淀。1，血清，常用血清有胎牛血清，新